1. РАЗРАБОТАН И ВНЕСЕН Государственным агропромышленным комитетом СССР

РАЗРАБОТЧИКИ

П.В. Лопата (руководитель темы), Г.А. Ересько, д-р техн. наук; Н.А. Яцюта; Т.Т. Гриценко, канд. биол. наук; В.С. Ярных, акад. ВАСХНИЛ; В.М. Карташева, д-р ветерин. наук

2. УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 29.11.88 N 3895

3. ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

4. ССЫЛОЧНЫЕ НОРМАТИВНО-ТЕХНИЧЕСКИЕ ДОКУМЕНТЫ

5. Ограничение срока действия снято по протоколу N 4-93 Межгосударственного совета по стандартизации, метрологии и сертификации (ИУС 4-94)

6. ПЕРЕИЗДАНИЕ. Август 2009 г.

Настоящий стандарт распространяется на молоко и жидкие молочные продукты - сливки, пахту, сыворотку, напитки и др. (в дальнейшем - молоко) и устанавливает биокалориметрический метод определения общего количества бактерий по величине физиологической активности микрофлоры.

Метод основан на калориметрическом измерении тепловой мощности, выделяемой в процессе жизнедеятельности микрофлоры молока, которая является энергетической характеристикой ее физиологической активности.

Отбор проб молока и молочных продуктов и подготовка их к испытанию - по ГОСТ 9225.

Микрокалориметры типа МКМ-Ц по ТУ 25-2477.0040.

Термометры стеклянные жидкостные (нертутные), диапазон измерений 0 - 100 °C, цена деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.

Стерилизатор паровой медицинский по ГОСТ 19569 <*>.

Электропечь сопротивления лабораторная или шкаф сушильный; диапазон регулирования температуры от 50 до 200 °C.

Стаканчики для взвешивания (бюксы) типов СВ и СН по ГОСТ 25336.

Шприцы медицинские типа "Рекорд" вместимостью 5 и 20 см³ по ТУ 64-1-789.

Иглы инъекционные для шприцов типа "Рекорд" 1А1 12х120-115 по ТУ 64-1-789.

Холодильник бытовой электрический по ГОСТ 26678.

Пробирки типов П1 и П2 соответственно диаметром 16 мм, высотой 150 мм и диаметром 21 мм, высотой 200 мм по ГОСТ 25336.

Спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962 <**> или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

--------------------------------

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51935-2002 (ЕН 285-96).

<**> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 51652-2000.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, раствор молярной концентрации 0,1 моль/дм³.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Пергамент по ГОСТ 1341.

3.1. Посуду и вспомогательную аппаратуру, предназначенную для проведения измерений, готовят к работе по п. 3.1.1 ГОСТ 9225.

3.2. Кюветы микрокалориметра стерилизуют спиртом.

3.3. Каждый прибор подлежит индивидуальному градуированию: первичному (при введении в эксплуатацию прибора и смене сырьевой зоны); периодическому, не реже одного раза в сезон года; по требованию контролирующих органов.

3.4. Подготовку к работе и градуирование прибора (определение физиологической активности микрофлоры молока F) проводят в соответствии с требованиями технического описания и инструкции по эксплуатации микрокалориметра, прилагаемых к прибору.

3.5. Тепловой поток микрофлоры молока измеряют при температуре статирования 30 или 37 °C, которую устанавливают переключателем "Температура".

3.6. Объем (1 см³) вводимых в кюветы дистиллированной воды и молока контролируют по шкалам шприцов.

3.7. Отобранную пробу молока перед исследованием тщательно перемешивают и разделяют пополам на две пробы N 1 и 2, которые помещают в стерильную посуду с пробками. Затем пробу N 1 пастеризуют при температуре (90 +/- 5) °C в течение не менее 15 мин. После окончания пастеризации эту пробу охлаждают до температуры (25 +/- 5) °C и заправляют стерильным шприцом в одну из кювет. Неподвергавшуюся пастеризации пробу молока N 2 помещают в холодильник.

4.1. Общее количество бактерий в молоке определяют по величине теплового потока 1 см³ молока с учетом значения физиологической активности его микрофлоры (F).

Физиологическую активность микрофлоры определяют по п. 3.4.

4.2. Заправку одной кюветы пробой N 1 проводят в трехкратной последовательной повторности с целью удаления из нее остатков дистиллированной воды или спирта. Третью порцию оставляют для измерения. Вторую сравнительную кювету оставляют заправленной дистиллированной водой. В результате получают заправленную в микрокалориметр систему: дистиллированная вода - пастеризованное молоко, для которой регистрируют отсчет показаний базовой линии для пробы N 1 с остановленным процессом метаболизма микрофлоры в молоке.

4.3. После окончания регистрации отсчета базовой линии проводят перезаправку кюветы с пастеризованным молоком пробой N 2 молока с естественным начальным уровнем физиологической активности микрофлоры. Заправку молока выполняют стерильным шприцом в трехкратной последовательной повторности с целью вымывания остатков пробы N 1. Третью порцию оставляют для измерения. В итоге получают исследуемую систему: дистиллированная вода - молоко, для которой регистрируют отсчет показаний теплового потока Q.

4.4. После окончания измерений для каждой исследуемой пробы молока кюветы промывают раствором гидрата окиси натрия до полного вымывания остатков пробы молока N 2. Кювету промывают раствором в трехкратной повторности, а затем окончательную промывку выполняют дистиллированной водой также в трехкратной повторности.

5.1. При проведении измерений на микрокалориметре МКМ-Ц обработка результатов измерений проводится автоматически с помощью встроенного в прибор микропроцессора.

Применяя микрокалориметр МКМ-Ц в комплекте с автоматическим цифропечатающим устройством АЦПУ, результаты обработки показаний выводят через задаваемые интервалы времени на распечатку.

Форма протокола распечатки результатов измерения на АЦПУ общего количества бактерий в молоке приведена в техническом описании и инструкции по эксплуатации микрокалориметра.

За окончательный результат общего количества бактерий в молоке принимают его величину N в строке протокола, выводимой после подачи звукового сигнала микропроцессором.

При отсутствии АЦПУ в комплекте прибора МКМ-Ц отсчет показаний измеряемых величин проводят с пятиразрядного цифрового табло на передней панели измерительного блока после подачи звукового сигнала.

5.2. При отклонении объема пробы молока N 2 от значения, указанного в п. 3.6 более +/- 0,05 см³, проводят дополнительную обработку результатов измерений.

5.2.1. Тепловой поток, выделяемый микрофлорой 1 см³ молока , Вт/см³, вычисляют по формуле, используя измеренное значение теплового потока Q

где Q - значение теплового потока, выделяемого микрофлорой в пробе N 2 молока, Вт;

V - объем пробы молока N 2, введенный в кювету, см³.

5.2.2. Общее количество бактерий в 1 см³ молока , , вычисляют по формуле

где - значение теплового потока, выделяемого микрофлорой 1 см³ молока, Вт/см³;

F - среднее значение физиологической активности микрофлоры молока, ;

1,15 - коэффициент, учитывающий прирост общего исходного количества бактерий за время измерения теплового потока.

5.3. Предел допускаемой погрешности результата определения общего количества бактерий биокалориметрическим методом равен в , с доверительной вероятностью P = 0,95.