1. Разработан и внесен Министерством рыбного хозяйства СССР.

Разработчики:

М.Д. Мукатова, канд. техн. наук; С.Ю. Дубровин, канд. техн. наук; А.Д. Попов; Д.В. Николаев.

2. Утвержден и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 21.07.92 N 746.

3. Введен впервые.

4. Срок проверки - 1998 год, периодичность проверки - 5 лет.

5. Ссылочные нормативно-технические документы:

Настоящий стандарт распространяется на кормовую муку, изготовленную из рыбы, морских млекопитающих, ракообразных и беспозвоночных, а также из отходов, получаемых при их переработке, и устанавливает колориметрический метод определения массовой доли карбамида и метод расчета сырого протеина с учетом массовой доли карбамида.

1.1. Сущность метода

Метод основан на измерении интенсивности окраски желтого цвета раствора комплексного соединения карбамида с антипирином и диацетилмонооксимом (диацетилантипиринуреида).

1.2. Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 13496.0, подготовка пробы к анализу - по ГОСТ 7636.

1.3. Аппаратура, материалы и реактивы

Весы лабораторные общего назначения 3-го класса точности с погрешностью взвешивания +/- 5 мг по ГОСТ 24104.

Аппарат для встряхивания.

Колориметр фотоэлектрический со светофильтром, длиной волны (490 +/- 10) нм по НТД с пределами измерений оптической плотности от 0 до 1,35 и погрешностью измерения не более +/- 1%.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 или другой нормативно-технической документации с интервалом измеряемых температур от 0 до 200 °C с ценой деления 1 °C.

Часы с минутным отсчетом по ГОСТ 3309.

Шкаф сушильный лабораторный, обеспечивающий поддержание заданной температуры с погрешностью не более +/- 5 °C.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Воронка стеклянная по ГОСТ 25336 диаметром 70 - 90 мм.

Пипетки 4-2-1 или 5-2-1 по ГОСТ 20292.

Пипетки 6-2-5 или 7-2-10 по ГОСТ 20292.

Бюретки 1-2-25-0,1; 2-2-25-0,1; 3-2-25-0,1; 4-1-50; 5-1-50 по ГОСТ 20292.

Цилиндры мерные 1-10 или 2-50 по ГОСТ 1770.

Цилиндры вместимостью 500 см3 с погрешностью +/- 5 см3 по ГОСТ 1770.

Колбы мерные 1-25 (50, 100)-2,2-25 (50, 100)-2 по ГОСТ 1770.

Колбы конические К-1-25-14/23 ТС или К-2-25-22 ТХС по ГОСТ 25336.

Ступка фарфоровая по ГОСТ 9147.

Стаканы В-1-600 ТС или Н-2-600 ТХС по ГОСТ 25336.

Карбамид по ГОСТ 6691 с содержанием основного вещества 99% х.ч.

Антипирин по Ф. Ст. 42-2438.

Кислота серная по ГОСТ 4204 х.ч. или ч.д.а. (плотность 1,84 г/см3), 40%-ный раствор (плотность 1,30 г/см3).

Диацетилмонооксим по нормативно-технической документации х.ч.

Кислота уксусная по ГОСТ 61 х.ч. или ч.д.а., 5%-ный раствор.

Кислота трихлоруксусная по нормативно-технической документации х.ч. 20%-ный раствор.

Дистиллированная вода по ГОСТ 6709.

Примечание. Допускается применение других средств измерений с метрологическими характеристиками и оборудования с техническими характеристиками не хуже, а также реактивов по качеству не ниже вышеуказанных.

1.4. Подготовка к испытанию.

1.4.1. Приготовление 40%-ного раствора серной кислоты

40%-ный раствор серной кислоты приготовляют из серной кислоты плотностью 1,84 г/см3, для чего на каждые 100 см3 дистиллированной воды берут 36 см3 кислоты. При этом кислоту приливают в воду осторожно небольшими порциями при постоянном перемешивании.

1.4.2. Приготовление 0,4%-ного раствора антипирина в 40%-ном растворе серной кислоты.

Антипирин растирают в ступке. Взвешивают (2,00 +/- 0,01) г измельченного антипирина в химическом стакане вместимостью 500 см3 и добавляют 383 см3 40%-ной серной кислоты (498 г). Раствор тщательно перемешивают и переносят в склянку с притертой пробкой.

1.4.3. Приготовление 5%-ного раствора уксусной кислоты

5%-ный раствор уксусной кислоты приготовляют, добавляя к 100 см3 дистиллированной воды 5 см3 уксусной кислоты.

1.4.4. Приготовление 0,5%-ного раствора диацетилмонооксима в 5%-ном растворе уксусной кислоты

Взвешивают (1,00 +/- 0,01) г диацетилмонооксима и растворяют его в 198 см3 (199 г) 5%-ной уксусной кислоты.

1.4.5. Приготовление 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты

На весах отвешивают 100 г кристаллической трихлоруксусной кислоты с погрешностью 0,01 г, растворяют в 400 г дистиллированной воды.

1.4.6. Приготовление основного и рабочих растворов карбамида

1.4.6.1. Приготовление основного раствора карбамида массовой концентрации 10 мг/см3

Взвешивают 1,000 г карбамида и с помощью дистиллированной воды без потерь переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3. Тщательно перемешивают до полного растворения навески и доводят объем до метки дистиллированной водой. 1 см3 этого раствора содержит 10 мг карбамида.

1.4.6.2. Приготовление рабочего раствора карбамида массовой концентрации 0,1 мг/ см3

Отбирают пипеткой 1 см3 основного раствора карбамида, переносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, доводят объем дистиллированной водой до метки и тщательно перемешивают. 1 см3 рабочего раствора содержит 0,1 мг карбамида.

1.4.6.3. Приготовление серии рабочих растворов различной концентрации

В сухие пробирки или колбочки пипеткой помещают 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0; 10,0 см3 рабочего раствора (см. 1.4.6.2), т.е. соответственно 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6; 0,7; 0,8; 0,9; 1,0 мг карбамида и в каждую добавляют дистиллированную воду до объема 10 см3 в соответствии с требованиями таблицы.

1.4.6.4. Построение градуировочного графика

В конические колбы с притертыми пробками вместимостью 25 см3 приливают пипеткой по 1 см3 рабочих растворов, приготовленных по п. 1.4.6.3, и добавляют по 4 см3 0,4%-ного раствора антипирина в 40%-ном растворе серной кислоты (п. 1.4.2), по 4 см3 дистиллированной воды и по 1 см3 0,5%-ного раствора диацетилмонооксима в 5%-ном растворе уксусной кислоты (п. 1.4.4). Контрольную пробу готовят в конической колбе параллельно с рабочими растворами, заменив 1 см3 рабочего раствора на 1 см3 дистиллированной воды.

Полученные рабочие растворы и контрольную пробу термостатируют при температуре (100 +/- 5) °C в течение (50 +/- 5) мин.

Содержимое колб окрашивается в желтый цвет различной интенсивности в зависимости от содержания карбамида. Оптическую плотность растворов определяют на фотоэлектроколориметре в кюветах с рабочей длиной 3 - 5 мм при длине волны (490 +/- 10) нм через 0,5 - 2 ч после термостатирования, по сравнению с контрольной пробой.

Для каждой пробы одной и той же концентрации определяют среднее значение результатов оптической плотности (D) трех измерений.

По полученным данным строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс значение концентрации карбамида в мг/см3 в рабочих растворах, а по оси ординат - соответствующие значения оптической плотности.

Градуировочный график используют для определения массовой доли карбамида в фильтрате, извлеченном из навески кормовой муки.

1.5. Проведение испытания

1.5.1. Навеску рыбной муки в количестве (4,0 +/- 0,1) г взвешивают в конической колбе вместимостью 100 см3, мерным цилиндром добавляют 50 см3 дистиллированной воды и встряхивают на аппарате в течение 55 - 60 мин. После этого к ней мерным цилиндром приливают 10 см3 20%-ного раствора трихлоруксусной кислоты (п. 1.4.5). Через каждые 20 - 30 мин содержимое колбы фильтруют. Колбу и фильтр промывают дистиллированной водой, из цилиндра три раза по 10 см3. Фильтрат собирают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем до метки дистиллированной водой. В две колбы (для параллельного определения) с притертыми пробками вместимостью 10 - 25 см3 пипетками вместимостью 1 и 5 см3 набирают, соответственно, 1 см3 фильтрата, 4 см3 0,4%-ного раствора антипирина в 40%-ном растворе серной кислоты (п. 1.4.2), 4 см3 дистиллированной воды, 1 см3 0,5%-ного раствора диацетилмонооксима в 5%-ном растворе уксусной кислоты (п. 1.4.4). Параллельно готовят контрольную пробу, заменяя 1 см3 фильтрата на 1 см3 дистиллированной воды. Приготовленные в двух колбах растворы и контрольную пробу термостатируют, после чего определяют их оптическую плотность на фотоэлектроколориметре.

По полученному значению оптической плотности с помощью градуировочного графика находят массовую концентрацию карбамида в растворах (мг/см3).

1.6. Обработка результатов

Массовую долю карбамида в кормовой муке (X) в процентах вычисляют по формуле

где c - концентрация карбамида, найденная по градуировочному графику, мг/см3;

V - общий объем фильтрата, см3;

m - масса навески кормовой муки, взятой для испытания, г;

1000 - коэффициент пересчета миллиграммов в граммы.

Вычисления проводят до второго десятичного знака.

За результат измерения принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, расхождение между которыми не должно превышать 0,01%.

Расхождение между контрольными анализами разных лабораторий не должно превышать 0,05%.

Расчет основан на определении разности между общим азотом, определяемом по ГОСТ 7636, и азотом карбамида в процентах и последующем пересчете разницы на сырой протеин.

Азот карбамида определяют, умножая массовую долю карбамида (X) на коэффициент 0,46, учитывающий содержание азота в 1 г/моль карбамида.

Содержание сырого протеина в процентах с учетом введенного карбамида определяют, умножая полученную разность между общим азотом и азотом карбамида на коэффициент 6,25.