Цели и принципы стандартизации в Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".

1. Разработан Государственным научным учреждением Научно-исследовательским институтом кондитерской промышленности Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ НИИ КП Россельхозакадемии).

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 149 "Кондитерские изделия".

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 13 декабря 2011 г. N 845-ст.

4. В настоящем стандарте учтены основные нормативные положения международного стандарта ИСО 15304:2002 "Жиры и масла животные и растительные. Определение содержания трансизомеров жирных кислот в растительных жирах и маслах. Метод газовой хроматографии" (ISO 15304:2002 "Animals and vegetable fats and oils - Determination of the content of trans fatty acid isomers of vegetable fats and oils - Gas chromatographic method").

5. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

Настоящий стандарт распространяется на кондитерские изделия и кондитерские полуфабрикаты (далее - продукты) и устанавливает газохроматографический метод определения массовой доли насыщенных жирных кислот (Приложение А), входящих в состав жиров продуктов.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 5725-6-2002 Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

ГОСТ Р 12.1.019-2009 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

ГОСТ Р 53228-2008 Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 1770-74 (1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3022-80 Водород технический. Технические условия

ГОСТ 3273-75 Натрий металлический технический. Технические условия

ГОСТ 5904-82 Изделия кондитерские. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб

ГОСТ 6995-77 Реактивы. Метанол-яд. Технические условия

ГОСТ 8677-76 Реактивы. Кальция оксид. Технические условия

ГОСТ 9293-74 (ИСО 2435-73) Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 17299-78 Спирт этиловый технический. Технические условия

ГОСТ 17433-80 Промышленная чистота. Сжатый воздух. Классы загрязненности

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 20015-88 Хлороформ. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим выпускам ежемесячно издаваемого информационного указателя за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

При подготовке и проведении измерений должны быть соблюдены следующие условия:

При выполнении измерений необходимо соблюдать требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007, пожаровзрывобезопасности по ГОСТ 12.1.018, электробезопасности по ГОСТ Р 12.1.019, а также требования, изложенные в технической документации на применяемые средства измерений и вспомогательное оборудование.

К выполнению измерений и обработке результатов допускается специалист, имеющий опыт работы на газовом хроматографе и персональном компьютере и прошедший инструктаж по обращению с реактивами, технике электробезопасности и пожарной безопасности.

Отбор и подготовку проб для проведения измерений проводят по ГОСТ 5904.

Метод заключается в разделении метиловых эфиров жирных кислот на кварцевой капиллярной газохроматографической колонке с последующим расчетом массовой доли насыщенных жирных кислот.

Хроматограф газовый, оснащенный: пламенно-ионизационным детектором (ПИД), обеспечивающим нагрев до температуры не менее 350 °C; термостатом с программированием температуры, обеспечивающим нагрев колонки до температуры не менее 250 °C; инжектором, обеспечивающим нагрев до температуры не менее 300 °C; компьютером с программным обеспечением.

Колонка газохроматографическая кварцевая капиллярная с неподвижной фазой: цианопропилфенил 10%, бисцианпропил полисилоксана 90%; длиной не менее 30 м, внутренним диаметром 0,32 мм, толщина неподвижной фазы 0,2 мкм.

Микрошприц вместимостью 10 мм3.

Весы по ГОСТ Р 53228, обеспечивающие точность взвешивания с пределами допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,2 мг;

Ротационный испаритель с диапазоном скорости вращения колбы от 5 до 100 об/мин, диапазоном температуры нагрева бани от 20 °C до 100 °C.

Баня водяная, обеспечивающая поддержание температуры до 100 °C с погрешностью не более +/- 2 °C.

Аппарат Сокслета, состоящий из:

- насадки НЭТ-250 ТС по ГОСТ 25336;

- холодильника ХШ-1-200-29/32 ХС по ГОСТ 25336;

- колбы П-1-250-29/32 по ГОСТ 25336.

Пипетка 1(2, 3)-1(2)-1(2)-1; 1(2, 3)-1(2) по ГОСТ 29227, ГОСТ 29228.

Пробирка П-4-10-14/23 ХС со шлифом и пластмассовой пробкой по ГОСТ 25336.

Цилиндр 1-250 или 3-250 по ГОСТ 1770.

Воронка лабораторная В-25-38 ХС или В-36-50 ХС по ГОСТ 25336.

Колба 2-25-2 по ГОСТ 1770.

Колба К-1-1000-29/32 ТС-2 по ГОСТ 25336.

Колба К-1-500-29/32 ТС по ГОСТ 25336.

Холодильник ХШ-1-400-29/32 ХС по ГОСТ 25336.

Стаканчик для взвешивания СВ-19/9 по ГОСТ 25336.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498, с интервалом температур от 0 °C до 100 °C и ценой деления 0,5 °C.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Водород технический марки А по ГОСТ 3022 или водород электролизный от генератора водорода типа СГС-2.

Воздух класса 0 по ГОСТ 17433.

Газ-носитель: азот газообразный по ГОСТ 9293, ос.ч., или гелий (сжатый), тщательно просушенный, с содержанием кислорода менее 10 мг/кг.

Натрий металлический по ГОСТ 3273.

Окись кальция по ГОСТ 8677, ч.д.а.

Метилат натрия, ч.д.а., раствор в метаноле 30%.

Гексан для хроматографии, ос.ч.

Метанол-яд по ГОСТ 6995, х.ч., для получения абсолютно сухого метилового спирта и метиловых эфиров жирных кислот.

Хлороформ (трихлорметан) по ГОСТ 20015.

Спирт этиловый технический по ГОСТ 17299 или спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Стандартная смесь метиловых эфиров жирных кислот.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования с метрологическими и техническими характеристиками и реактивов по качеству не ниже указанных.

9.1. Приготовление абсолютного метанола

В колбе вместимостью 500 см3 взвешивают (30 +/- 1) г окиси кальция, добавляют 250 см3 метанола и кипятят с обратным холодильником типа ХШ в течение 6 - 8 ч. Затем метанол перегоняют в перегонном аппарате при температуре 64,7 °C.

9.2. Приготовление раствора метилата натрия в абсолютном метаноле концентрацией 2 моль/дм3

Взвешивают 2,7 г метилата натрия или 1,15 г металлического натрия в стаканчике для взвешивания. Результат записывают в граммах до второго десятичного знака.

В мерную колбу вместимостью 25 см3 наливают 10 - 12 см3 абсолютного метанола, добавляют метилат натрия или осторожно вносят маленькими кусочками натрий и перемешивают до полного растворения. После перемешивания раствор охлаждают до комнатной температуры и доводят абсолютным метанолом до метки.

Полученный раствор хранят в холодильнике при температуре от 3 °C до 8 °C в течение 1 мес.

9.3. Приготовление смеси хлороформа и этилового спирта в объемном соотношении 95:5

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают 50 см3 этилового спирта. Объем раствора доводят до метки хлороформом и перемешивают.

9.4 Экстракция жира из кондитерских изделий и кондитерских полуфабрикатов

Массу анализируемой пробы рассчитывают так, чтобы она содержала от 1 до 3 г жира.

Измельченную анализируемую пробу взвешивают с записью результата в граммах до третьего десятичного знака, помещают в патрон из фильтровальной бумаги, который сворачивают таким образом, чтобы предотвратить переход анализируемой пробы в раствор. Патрон с образцом помещают в прибор Сокслета и проводят экстракцию смесью хлороформ - этиловый спирт в соотношении 95:5 в течение 5 ч.

После экстракции раствор жира выпаривают с помощью ротационного испарителя при температуре от 40 °C до 70 °C.

Оставшийся в колбе жир сушат при температуре от 60 °C до 70 °C на водяной бане до постоянной массы, затем охлаждают в эксикаторе 20 мин и взвешивают колбу с записью результата в граммах до третьего десятичного знака для определения массы экстрагированного жира.

9.5. Получение метиловых эфиров жирных кислот

Пробу полученного расплавленного жира перемешивают до равномерного распределения. В стеклянную пробирку вносят стеклянной палочкой 15 - 20 мг жира, растворяют его в 9,5 см3 гексана. В полученный раствор пипеткой добавляют 0,5 см3 раствора метилата натрия в абсолютном метаноле молярной концентрацией 2 моль/дм3. Реакционную смесь интенсивно перемешивают в течение 2 мин, затем отстаивают 5 мин. Декантируют верхний слой, содержащий метиловые эфиры.

Готовый раствор хранят в холодильнике не более суток.

9.6. Подготовка хроматографа к измерению

Подключение хроматографа к сети, подготовку и установку колонок и вывод прибора на режим выполняют согласно инструкциям по монтажу и наладке хроматографа.

На хроматографе устанавливают следующие условия анализа:

- температура инжектора - 250 °C;

- режим программирования термостата - от 50 °C до 240 °C со скоростью 10 °C/мин;

- температура детектора - 290 °C;

- скорость потока газа-носителя (азот или гелий) - от 1 до 5 см3/мин.

Проводят холостой опыт с гексаном, при этом на хроматограмме не должно быть посторонних пиков. Холостой опыт повторяют после анализа каждых десяти испытуемых проб.

Микрошприцем вводят в испаритель хроматографа 1 мм3 раствора метиловых эфиров кислот, запускают программу изменения температуры термостата и записи данных. Пример типичной хроматограммы, полученной при рекомендуемых условиях, приведен в Приложении Б.

После разделения метиловых эфиров жирных кислот проводят идентификацию по времени выхода метиловых эфиров жирных кислот при анализе стандартной смеси метиловых эфиров жирных кислот.

11.1. Массовую долю метилового эфира каждой жирной кислоты рассчитывают путем определения скорректированной площади соответствующего пика относительно суммы скорректированных площадей всех пиков с учетом поправочного коэффициента для компенсации отклика ПИД на соответствующий компонент - метиловый эфир жирной кислоты.

При определении соответствующих поправочных коэффициентов используют расчетный метод или расчет на основании результатов анализа стандартной смеси метиловых эфиров жирных кислот, проведенных в условиях, идентичных условиям измерений анализируемой пробы.

11.2. Расчетный метод определения поправочного коэффициента

Поправочный коэффициент для каждого компонента рассчитывают по формуле

где - поправочный коэффициент для компонента x;

- относительная молекулярная масса, рассчитанная по химической формуле компонента x;

- число атомов углерода метилированной жирной кислоты компонента x;

- относительная атомная масса углерода .

11.3. Расчет поправочного коэффициента на основании результатов анализа стандартной смеси метиловых эфиров жирных кислот

Проводят анализ стандартной смеси метиловых эфиров жирных кислот известного состава в условиях, идентичных условиям измерения анализируемой пробы.

Вычисляют поправочный коэффициент для метилового эфира каждой жирной кислоты (x) в стандартной смеси по хроматограмме стандартной смеси и формуле

где - площадь пика метилового эфира каждой жирной кислоты (x) в стандартной смеси, в единицах площади;

- сумма площадей всех пиков метиловых эфиров жирных кислот стандартной смеси, в единицах площади;

- масса метилового эфира каждой жирной кислоты (x) в стандартной смеси, мг;

- сумма масс метиловых эфиров жирных кислот стандартной смеси, мг.

11.4. Расчет относительного поправочного коэффициента

Относительный поправочный коэффициент (по отношению к метиловому эфиру пальмитиновой кислоты C16:0) рассчитывают для каждого компонента по формуле

где - относительный поправочный коэффициент для компонента x;

- поправочный коэффициент для компонента x;

- поправочный коэффициент для C16:0.

Относительный поправочный коэффициент для C16:0 считается справочным .

11.5. Расчет массовой доли компонента

Массовую долю метилового эфира каждой жирной кислоты , с учетом относительного поправочного коэффициента рассчитывают по формуле

где - площадь пика, соответствующего компоненту x, в единицах площади;

- сумма скорректированных площадей всех пиков, за исключением пика растворителя, в единицах площади;

- относительный поправочный коэффициент для компонента x.

11.6. Расчет массовой доли насыщенных жирных кислот

Вычисляют сумму массовых долей метиловых эфиров жирных кислот M, %, идентифицированных по полученной хроматограмме

где - массовая доля компонента x, %.

Перечень насыщенных жирных кислот, входящих в жирно-кислотный состав триглицеридов кондитерских изделий и кондитерских полуфабрикатов, приведен в Приложении А.

Массовую долю насыщенных жирных кислот в продуктах X, %, рассчитывают по формуле

где Y - массовая доля экстрагированного жира, полученного по 9.5, %, рассчитанная по формуле

где - масса пустой колбы, г;

- масса колбы с полученным жиром, г;

m - масса анализируемой навески, г.

Вычисления по (6) проводят до второго десятичного знака с последующим округлением до первого десятичного знака.

За окончательный результат определения массовой доли насыщенных жирных кислот в продуктах принимают среднеарифметическое двух параллельных определений, выполненных в условиях повторяемости, если выполняется условие приемлемости

где и - результаты двух определений, выполненных в условиях повторяемости, %;

- среднеарифметическое двух определений, выполненных в условиях повторяемости, %;

r - предел повторяемости (сходимости), приведенный в таблице при P = 0,95, %.

Результат определения массовой доли насыщенных жирных кислот представляют в виде

где - среднеарифметическое значение двух определений массовой доли насыщенных жирных кислот, признанных приемлемыми, %;

- значение относительной погрешности, приведенное в таблице 1, %.

12.1. Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости, проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.2.2).

12.2. Проверку приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости, проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6 (подпункт 5.3.2.1).

12.3. Процедуры и периодичность контроля точности (контроля стабильности) получаемых результатов измерений в пределах лаборатории проводят с учетом требований ГОСТ Р ИСО 5725-6 (раздел 6).

12.4. Разрешение противоречий в оценке качества продуктов между результатами двух лабораторий проводят в соответствии с ГОСТ Р ИСО 5725-6 (пункт 5.3.3).

А.1. Перечень насыщенных жирных кислот, входящих в состав жиров кондитерских изделий и кондитерских полуфабрикатов, приведен в таблице А.1.

Б.1. Пример типичной хроматограммы, полученной при рекомендуемых условиях, приведен на рисунке Б.1.