Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

1 РАЗРАБОТАН Федеральным государственным бюджетным учреждением "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов" (ФГБУ "ВГНКИ")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии Российской Федерации

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 3 декабря 2012 г. N 54-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 28 июня 2013 г. N 313-ст введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2014 года.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 16446-78

Настоящий стандарт распространяется на сухой комплемент для реакции связывания комплемента (далее - комплемент), представляющий собой сыворотку крови морских свинок, стабилизированную сернокислым магнием и высушенную методом лиофилизации.

Комплемент предназначен для применения в качестве компонента реакции связывания комплемента (далее - РСК) для диагностики болезней животных бактериальной и вирусной этиологии.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.0.004-90 Система стандартов безопасности труда. Организация обучения безопасности труда. Общие положения

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.008-76 Система стандартов безопасности труда. Биологическая безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.2.003-91 Система стандартов безопасности труда. Оборудование производственное. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.3.002-75 Система стандартов безопасности труда. Процессы производственные. Общие требования безопасности

ГОСТ 12.4.011-89 Система стандартов безопасности труда. Средства защиты работающих. Общие требования и классификация

ГОСТ 17.2.3.02-78 Охрана природы. Атмосфера. Правила установления допустимых выбросов вредных веществ промышленными предприятиями

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 3773-72 Реактивы. Аммоний хлористый. Технические условия

ГОСТ 4523-77 Магний сернокислый 7-водный. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9142-90 Ящики из гофрированного картона. Общие технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 9412-93 Марля медицинская. Технические условия

ГОСТ 10652-73 Реактивы. Соль динатриевая этилендиамин-N,N,N',N'-тетрауксусной кислоты 2-водная (трилон Б). Технические условия

ГОСТ 12303-80 Пачки из картона, бумаги и комбинированных материалов. Общие технические условия

ГОСТ 14192-96 Маркировка грузов

ГОСТ 16445-2012 Сыворотка гемолитическая для реакции связывания комплемента. Технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 24061-2012 Средства лекарственные лиофилизированные для ветеринарного применения. Методы определения массовой доли влаги

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 28083-2012 Средства лекарственные лиофилизированные для ветеринарного применения. Метод контроля вакуума в ампулах и флаконах

ГОСТ 29230-91 (ИСО 835-4-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 4. Пипетки выдувные

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1 Комплемент должен соответствовать требованиям настоящего стандарта и производиться по технологическому регламенту.

3.2.1 Комплемент расфасовывают по 2 см³ в стерильные пенициллиновые флаконы или ампулы и лиофилизируют. После этого ампулы запаивают под вакуумом, а флаконы заполняют азотом по ГОСТ 9293 или осушенным воздухом, закрывают резиновыми пробками и обжимают алюминиевыми колпачками.

3.2.2 Флаконы (ампулы) с комплементом упаковывают в картонные коробки по ГОСТ 12301 или картонные пачки по ГОСТ 12303 с разделительными перегородками или гнездами, обеспечивающими целостность флаконов (ампул). В каждую коробку (пачку) вкладывают инструкцию по применению.

3.2.3 Коробки или пачки с комплементом упаковывают в картонные ящики по ГОСТ 9142 или другие аналогичные. Масса ящиков - не более 15 кг. В каждый ящик вкладывают контрольный лист с указанием:

- наименования препарата;

- количества коробок (пачек) в ящике;

- номера серии комплемента;

- даты упаковки;

- фамилии или номера упаковщика.

3.2.4 На флакон (ампулу) наклеивают этикетку с указанием:

- наименования препарата;

- количества препарата в ампуле (флаконе), см³;

- номера серии;

- срока годности;

- титра;

- надписи: "Для ветеринарного применения".

3.2.5 На коробки или пачки с комплементом (вторичная упаковка) наносят маркировку с указанием:

- наименования организации-производителя;

- наименования препарата;

- номера серии;

- даты выпуска;

- титра в гемолитической системе;

- количества флаконов (ампул) в коробке;

- количества доз по титру во флаконе (ампуле);

- количества разбавителя;

- срока годности;

- условий хранения;

- обозначения настоящего стандарта;

- надписи: "Для ветеринарного применения";

- штрихового кода;

- номера регистрационного удостоверения;

- информации о подтверждении соответствия.

3.2.6 На транспортную тару наносят маркировку с указанием:

- наименования организации-производителя, ее адреса (в том числе страны);

- наименования препарата;

- количества коробок (пачек) с препаратом в ящике;

- массы брутто;

- номера серии;

- даты выпуска;

- срока годности;

- условий хранения и перевозки;

3.2.7 Транспортную маркировку наносят на противоположную сторону транспортной тары в соответствии с ГОСТ 14192 с указанием манипуляционных знаков: "Хрупкое. Осторожно" и "Ограничение температуры".

4.1 По биологической безопасности комплемент должен соответствовать требованиям ГОСТ 12.1.008.

4.2 В процессе производства комплемента должен осуществляться контроль за выполнением требований обеспечения пожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004.

4.3 Производственный процесс должен быть организован в соответствии с требованиями ГОСТ 12.3.002, а производственное оборудование должно соответствовать требованиям ГОСТ 12.2.003.

4.4 Обучение персонала мерам безопасности должно быть организовано в соответствии с ГОСТ 12.0.004.

4.5 Средства защиты работающих - в соответствии с ГОСТ 12.4.011.

4.6 Воздух рабочей зоны - в соответствии с ГОСТ 12.1.005.

4.7 Контроль за выбросами во внешнюю среду - в соответствии с ГОСТ 17.2.3.02.

4.8 Утилизация комплемента с истекшим сроком годности, серий, не выдержавших контрольных испытаний, а также флаконов и ампул, оставшихся после испытаний и использования, не требует специальных мер безопасности.

5.1 Каждая серия комплемента должна быть принята (проверена) отделом, отвечающим за контроль качества готовой продукции организации - производителя.

5.2 Серией комплемента считают определенное количество препарата, полученного за один технологический цикл, одновременно представленного на контроль и оформленного одним документом о качестве.

5.3 В документе о качестве указывают:

- наименование организации-производителя;

- наименование препарата;

- номер серии;

- дату изготовления (месяц и год);

- объем серии;

- результаты испытания по показателям качества;

- срок годности (месяц и год);

- условия хранения;

- обозначение стандарта;

- номер и дату выдачи документа о качестве;

- заключение и подпись лица, выдавшего документ о качестве.

5.4 Для контроля качества комплемента от каждой серии методом случайного отбора отбирают выборку в количестве 40 флаконов (ампул).

20 флаконов (ампул) с комплементом используют для проведения испытания по показателям качества, указанным в таблице 1, а 20 - направляют в архив отдела, отвечающего за контроль качества. Образцы комплемента в архиве хранят в течение срока, на шесть месяцев превышающего срок годности.

5.5 Архивные образцы маркируют надписью "Архив", опечатывают и снабжают документом установленной формы с указанием:

- наименования препарата;

- номера серии;

- даты выпуска (месяца и года);

- даты отбора проб;

- объема серии;

- количества отобранных образцов;

- должности и подписи лица отобравшего пробы;

- срока годности (месяца и года);

- обозначения настоящего стандарта;

- срока хранения проб в архиве.

5.6 При неудовлетворительных результатах испытаний хотя бы по одному из показателей по нему проводят повторные испытания на удвоенном количестве образцов комплемента, взятых от той же серии, и на удвоенном количестве материалов. Результаты повторных испытаний считают окончательными и распространяют на всю серию.

В случае неудовлетворительных результатов повторной проверки, серию комплемента считают не соответствующей требованиям настоящего стандарта и бракуют.

6.1.1 Для определения внешнего вида все флаконы (ампулы) с комплементом просматривают визуально. Одновременно проверяют целостность флаконов и ампул.

6.1.2 По внешнему виду комплемент должен представлять собой сухую однородную пористую массу белого или розового цвета. На флаконах и ампулах не должно быть трещин. Изменение консистенции не допускается.

6.2.1 Для определения растворимости препарата во флакон (ампулу) с комплементом при помощи пипетки или дозатора вносят физиологический раствор или дистиллированную воду в количестве, указанном на флаконе (ампуле).

6.2.2 После встряхивания препарат должен полностью раствориться в течение (3,0 +/- 0,5) мин и представлять собой прозрачную жидкость светло-розового цвета без посторонней примеси и механических включений. Возможна легкая опалесценция.

Колбы мерные вместимостью 100, 250 и 1000 см³ по ГОСТ 1774.

Колбы плоскодонные вместимостью 200 см³ по ГОСТ 25336.

Стаканы лабораторные по ГОСТ 25336.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Аммиак водный по ГОСТ 3760.

Аммоний хлористый по ГОСТ 3773.

Аммиачный буферный раствор.

Трилон Б по ГОСТ 10652 молярной концентрации 0,05 моль/дм³ (0,1 н раствор).

Хромовые индикаторы: кислотный хромовый темно-синий или хромовый черный специальный.

Фиксанал MgSO₄·7H₂O молярной концентрации 0,05 моль/дм³ (0,1 н раствор) или MgSO₄·7H₂O по ГОСТ 4523.

Спирт этиловый по ГОСТ 18300.

6.3.2.1 Приготовление аммиачного буферного раствора

Взвешивают пробу хлористого аммония массой 2 г с точностью до второго десятичного знака, растворяют в дистиллированной воде, добавляют 10 см³ 25%-ного водного раствора аммиака и доводят объем дистиллированной водой до 100 см³.

6.3.2.2 Приготовление растворов хромовых индикаторов

0,5 г индикатора растворяют в 20 см³ аммиачного буферного раствора по 6.3.2.1 и доводят до 100 см³ 95%-ным этиловым спиртом.

6.3.2.3 Приготовление раствора трилона Б молярной концентрации 0,05 моль/дм³

Пробу трилона Б массой 18,6 г растворяют в дистиллированной воде, доводят объем до 1 дм³, перемешивают и фильтруют, если раствор получился мутным.

6.3.2.4 Установка титра трилона Б

Готовят раствор соли магния молярной концентрации 0,05 моль/дм³: растворяют содержимое фиксанала или пробу MgSO₄·7H₂O массой 1,2325 г в 1 дм³ дистиллированной воды. В колбу вместимостью 200 см³ вносят 100 см³ раствора сернокислого магния молярной концентрации 0,05 моль/дм³, 5 см³ аммиачного буферного раствора, пять - семь капель индикатора, затем смесь медленно титруют при интенсивном перемешивании раствором трилона Б молярной концентрации 0,05 моль/дм³ до отчетливого изменения окраски раствора.

Поправочный коэффициент к титру трилона Б K_тр вычисляют по формуле

где K_Mg - поправочный коэффициент к титру раствора MgSO₄ молярной концентрации 0,05 моль/дм³;

V - количество раствора трилона Б молярной концентрации 0,05 моль/дм³, израсходованное на титрование 100 см³ раствора MgSO₄ молярной концентрации 0,05 моль/дм³, см³.

Комплемент из пяти флаконов (ампул) растворяют в дистиллированной воде, переносят в мерную колбу вместимостью 250 см³ и доводят объем до метки. Затем берут 50 см³ раствора, добавляют к нему 5 см³ аммиачного буферного раствора, пять-шесть капель раствора хромового индикатора и титруют при энергичном перемешиванию раствором трилона Б молярной концентрации 0,05 моль/дм³ до изменения окраски раствора.

Массовую долю сульфата магния в комплементе X, %, вычисляют по формуле

где V₁ - количество раствора трилона Б концентрацией 0,05 моль/дм³, израсходованное на титрование пробы, см³;

K_тр - поправочный коэффициент к титру раствора трилона Б молярной концентрацией 0,05 моль/дм³;

0,01232 - количество MgSO₄·7H₂O, соответствующее 1 см³ раствора трилона Б молярной концентрации 0,05 моль/дм³, г;

100 - пересчет в %;

2 - количество комплемента во флаконе (ампуле), см³.

Массовую долю влаги определяют по ГОСТ 24061.

Массовая доля влаги в препарате должна быть не более 3%.

Наличие вакуума в ампулах определяют по ГОСТ 28083.

В ампулах с препаратом должен быть вакуум.

Активность комплемента определяют по полному (100%-ному) гемолизу эритроцитов в гемолитической системе.

Титром комплемента считают наименьшее его количество (наибольшее разведение), при котором в течение 10 мин при температуре 37 °C - 38 °C наступает полный гемолиз 0,2 см³ 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в присутствии 0,2 см³ гемолитической сыворотки и 0,6 см³ физиологического раствора.

Гемолитические свойства комплемента характеризуется полным отсутствием гемолиза эритроцитов барана в пробирке без гемолитической сыворотки.

Для проведения испытания применяют:

- центрифугу;

- баню водяную;

- штативы для пробирок;

- пробирки стеклянные по ГОСТ 25336;

- флаконы вместимостью 250 см³;

- колбы стеклянные вместимостью 50, 100 см³ по ГОСТ 1770;

- бусы стеклянные или металлические;

- воронки стеклянные по ГОСТ 25336;

- иглы для взятия крови;

- пипетки мерные вместимостью 1, 2, 5 и 10 см³ по ГОСТ 29230;

- микропипетки вместимостью 0,2 см³;

- дозаторы

- физиологический раствор хлористого натрия pH 6,8 - 7,2;

- марлю медицинскую по ГОСТ 9412;

- сыворотку гемолитическую по ГОСТ 16445.

6.6.2.1 Приготовление 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана

Кровь у барана берут с утра до кормления из яремной вены во флакон со стеклянными (керамическими) бусами и интенсивно перемешивают круговыми движениями флакона в процессе взятия и в течение 7 мин после. Затем фильтруют через марлю, отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500 об/мин по 10 мин до полного обесцвечивания промывной жидкости, но не более четырех раз. Из осадка эритроцитов готовят 2,5%-ную взвесь на физиологическом растворе.

Для приготовления гемолитической системы смешивают в равных объемах 2,5%-ную взвесь эритроцитов барана в физиологическом растворе и рабочее разведение гемолитической сыворотки в удвоенном титре (например, при титре 1 : 1000 берут 2 : 1000, то есть для приготовления 50 см³ рабочего разведения гемолитической сыворотки 0,1 см³ препарата из ампулы разводят в 49,9 см³ физиологического раствора). Затем отбирают в отдельные пробирки по 1 см³ 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и рабочего разведения гемолитической сыворотки для контроля. Оставшиеся 49 см³ рабочего разведения гемолитической сыворотки добавляют при постоянном помешивании к 49 см³ взвеси эритроцитов. Эритроциты барана сенсибилизируют антителами гемолитической сыворотки путем выдерживания гемолитической системы в водяной бане при температуре (37 +/- 1) °C в течение 20 мин при трехкратном периодическом перемешивании, и после остывания до комнатной температуры используют для титрования активности комплемента.

В три флакона (ампулы) с комплементом вносят физиологический раствор в объеме, указанном на флаконе (ампуле), и помещают в холодильник. После растворения содержимого ампулы (флаконы) слегка встряхивают, комплемент сливают в одну емкость, перемешивают и непосредственно перед титрованием готовят разведение 1 : 20.

Комплемент в разведении 1 : 20 микропипеткой вместимостью 0,2 см³ или дозатором вносят в ряд пробирок в дозах от 0,02 до 0,2 см³ с шагом 0,02 см³ (0,02; 0,04; 0,06 см³ и т.д.). Затем в пробирки вносят физиологический раствор до 0,2 см³ общего объема жидкости (0,018; 0,016; 0,014 см³ и т.д.). После этого в каждую пробирку вносят по 0,4 см³ физиологического раствора и по 0,4 см³ гемолитической системы.

Одновременно в штатив устанавливают три пробирки для контроля. В первую пробирку вносят: 0,2 см³ комплемента в разведении 1 : 20, 0,2 см³ 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и 0,6 см³ физиологического раствора; во вторую пробирку - 0,2 см³ 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана, 0,2 см³ гемолитической сыворотки в удвоенном титре и 0,6 см³ физиологического раствора; в третью пробирку - 0,2 см³ 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана и 0,8 см³ физиологического раствора. Первая пробирка служит для контроля гемолитических свойств комплемента, вторая - для контроля гемолитической сыворотки, а третья - для установления резистентности эритроцитов барана.

Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню при температуре 37 °C - 38 °C на 10 мин. Схема титрования комплемента в гемолитической системе представлена в таблице 2.

Количество доз комплемента К во флаконе (ампуле) в зависимости от установленного титра рассчитывают по формуле

где a - количество физиологического раствора, необходимое для растворения содержимого одного флакона (ампулы), см³;

20 - кратность разведения исходного раствора комплемента при титровании.

Пример - При a = 2 см³ и титре 0,10 количество доз комплемента во флаконе (ампуле) равно:

Комплемент считают активным при титре не ниже 0,14 при отсутствии гемолиза эритроцитов в контрольных пробирках.

7.1 Комплемент транспортируют всеми видами крытого транспорта.

7.2 Допускается транспортирование комплемента при температуре не выше 20 °C, при этом срок транспортирования не должен превышать 5 сут.

7.3 Комплемент хранят в чистом сухом темном помещении в упаковке производителя при температуре от 2 °C до 8 °C в пределах срока годности.

7.4 Срок годности комплемента - три года с даты выпуска. Датой изготовления считают дату окончания лиофилизации комплемента. Датой выпуска комплемента считают дату подписания документа о качестве.