--------------------------------

<*> Дату введения стандарта в действие на территории государств устанавливают их национальные органы по стандартизации.

Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

Сведения о стандарте

1 РАЗРАБОТАН Государственным бюджетным учреждением Ярославской области "Ярославский государственный институт качества сырья и пищевых продуктов" (ГБУ ЯО "ЯГИКСПП")

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 12 ноября 2015 г. N 82-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2015 г. N 2082-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 23452-2015 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2016 г.

5 ВЗАМЕН ГОСТ 23452-79

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

1. Область применения

Настоящий стандарт распространяется на молоко и молочные продукты и устанавливает методы определения содержания хлорорганических пестицидов (альфа-, бета- и гамма-изомеров гексахлорциклогексана (ГХЦГ), 4,4'-дихлордифенилтрихлорэтана (ДДТ), 4,4'-дихлордифенилдихлорэтилена (ДДЭ), 4,4'-дихлордифенилдихлорэтана (ДДД):

- методом хроматографии в тонком слое в диапазоне измерений массовой концентрации хлорорганических пестицидов 0,05 - 5,0 мг/кг;

- методом газожидкостной хроматографии с использованием газового хроматографа с электронозахватным детектором в диапазоне измерений массовой концентрации хлорорганических пестицидов 0,005 - 0,5 мг/кг.

2. Нормативные ссылки

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

ГОСТ 12.1.010-76 Система стандартов безопасности труда. Взрывобезопасность. Общие требования

ГОСТ 12.1.018-93 Система стандартов безопасности труда. Пожаровзрывобезопасность статического электричества. Общие требования

ГОСТ 12.1.019-2009 <**> Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты

--------------------------------

<**> В Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009 "Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты".

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

ГОСТ OIML R 76-1-2011 Государственная система обеспечения единства измерений. Весы неавтоматического действия. Часть 1. Метрологические и технические требования. Испытания

ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 1277-75 Реактивы. Серебро азотнокислое. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ ISO 3890-1-2013 Молоко и молочные продукты. Определение остаточного содержания хлорорганических соединений (пестицидов). Часть 1. Общие положения и методы экстракции

ГОСТ ISO 3890-2-2013 Молоко и молочные продукты. Определение остаточного содержания хлорорганических соединений (пестицидов). Часть 2. Методы очистки экстракта и подтверждение

ГОСТ ИСО 5725-1-2003 <*> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения

--------------------------------

<*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-1-2003 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 1. Основные положения и определения".

ГОСТ ИСО 5725-3-2002 <**> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерения

--------------------------------

<**> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-3-2002 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 3. Промежуточные показатели прецизионности стандартного метода измерения".

ГОСТ ИСО 5725-4-2003 <***> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений

--------------------------------

<***> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-4-2003 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 4. Основные методы определения правильности стандартного метода измерений".

ГОСТ ИСО 5725-6-2003 <4*> Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике

--------------------------------

<4*> В Российской Федерации действует ГОСТ Р ИСО 5725-6-2003 "Точность (правильность и прецизионность) методов и результатов измерений. Часть 6. Использование значений точности на практике".

ГОСТ 5867-90 <5*> Молоко и молочные продукты. Методы определения жира

--------------------------------

<5*> В Российской Федерации действуют ГОСТ Р 51331-99 "Йогурты. Общие технические условия", ГОСТ 29247-91 "Консервы молочные. Методы определения жира", ГОСТ Р ИСО 2446-2011 "Молоко. Метод определения содержания жира".

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 9293-74 Азот газообразный и жидкий. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

ГОСТ 26809.2-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, отбор проб и подготовка их к анализу. Часть 2. Масло из коровьего молока, спреды, сыры и сырные продукты, плавленые сыры и плавленые сырные продукты

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов и классификаторов на территории государства по соответствующему указателю стандартов и классификаторов, составленному по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3. Термины и определения

В настоящем стандарте применены термины в соответствии с [1] и [2], а также следующие термины с соответствующими определениями:

3.1 тонкослойная хроматография: Метод разделения и анализа смеси веществ, основанный на использовании тонкого слоя адсорбента в качестве неподвижной фазы, где разделяемые вещества, в зависимости от сорбционной способности, по-разному распределяются между сорбирующим слоем и протекающим через него элюентом.

3.2 газожидкостная хроматография: Метод разделения и анализа смеси веществ, основанный на их различных температурах кипения и взаимодействия с неподвижной жидкой фазой в потоке газа-носителя.

4. Сокращения

В настоящем стандарте использованы следующие сокращения:

гексахлорциклогексана.

гексахлорциклогексана.

гексахлорциклогексана.

ДДТ-4,4'-дихлордифенилтрихлорэтан.

ДДЭ-4,4'-дихлордифенилдихлорэтилен.

ДДД-4,4'-дихлордифенилдихлорэтан.

5. Сущность метода

5.1 Метод тонкослойной хроматографии

Метод основан на предварительной экстракции хлорорганических пестицидов, очистке экстракта, разделении аналитов в тонком слое адсорбента хроматографической пластины и их количественном определении путем визуального сопоставления интенсивности окраски пятен и измерения площади пятна на пластине испытуемого экстракта и площади пятна рабочего градуировочного раствора.

5.2 Метод газожидкостной хроматографии

Метод основан на предварительной экстракции хлорорганических пестицидов, очистке экстракта и последующем количественном определении пестицидов с помощью газожидкостной хроматографии с электронозахватным детектором методом абсолютной калибровки.

6. Отбор проб

Отбор и подготовка проб к анализу - по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 26809.2.

До начала проведения измерений пробы всех молочных продуктов, за исключением молочных консервов и других молочных продуктов в запаянных или закатанных банках, хранят при температуре от 4 °C до 8 °C, пробы мороженого - при температуре не выше 2 °C.

7. Условия проведения измерений

При выполнении измерений в лаборатории следует соблюдать следующие условия:

8. Метод тонкослойной хроматографии

8.1 Средства измерения, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

Камера для хроматографирования: сосуд с плоским дном, закрывающийся пришлифованной крышкой.

Облучатель хроматографический типа УФС 254/365 по нормативной документации.

Весы по ГОСТ OIML R 76-1, обеспечивающие точность взвешивания с пределом допускаемой абсолютной погрешности +/- 0,0005 г.

Шкаф сушильный лабораторный любого типа, поддерживающий температуру до 200 °C с погрешностью +/- 5 °C по ГОСТ 14919.

Микрошприц вместимостью 10 мм³ с относительной погрешностью дозирования не более 5%.

Линейка 300 по ГОСТ 427.

Пластины для тонкослойной хроматографии Сорбфил (тип сорбента - силикагель СТХ-1А, зернение 5 - 17 мкм, толщина слоя 90 - 130 мкм, связующее - силиказоль, УФ индикатор-254, тип подложки - ПЭТФ, размер пластины 100 x 100 мм).

Груша резиновая медицинская вместимостью 100 см³.

Шпатель металлический.

Пипетки 1-2-2-1, 1-2-2-2, 1-2-2-5, 1-2-2-10 по ГОСТ 29227.

Колба мерная с притертой пробкой 2-100-2 по ГОСТ 1770.

Колбы круглодонные К-25-29/32 по ГОСТ 25336.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а.

н-Гексан х.ч. или ч.д.а.

Ацетон ч.д.а. по ГОСТ 2603.

Серебро азотнокислое по ГОСТ 1277, ч.д.а.

массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

ДДТ массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

ДДД массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

ДДЭ массовой долей основного вещества не менее 97,0%.

Допускается применение других средств измерения и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающим необходимую точность измерения, а также реактивов и материалов по качеству не хуже вышеуказанных.

8.2 Подготовка к проведению измерений

8.2.1 Приготовление градуировочных растворов хлорорганических пестицидов

8.2.1.1 Приготовление градуировочных растворов пестицидов массовой концентрацией 100 мкг/см³

Градуировочные растворы готовят объемно-весовым способом для каждого пестицида отдельно.

В мерную колбу вместимостью 100 см³ вносят (0,010 +/- 0,001) г пестицида и добавляют 10 - 15 см³ н-гексана, растворяют содержимое и доводят объем в колбе н-гексаном до метки.

Срок хранения градуировочных растворов пестицидов в склянках с плотно завинчивающимися крышками при температуре (4 +/- 2) °C - не более 6 мес.

8.2.1.2 Приготовление проявляющего реактива

В мерной колбе вместимостью 100 см³ растворяют 0,5 г азотнокислого серебра в 5 см³ дистиллированной воды, добавляют 7 см³ раствора аммиака и доводят объем в колбе ацетоном до метки.

Проявляющий реактив готовят непосредственно перед проведением анализа.

8.2.2 Подготовка пластины для хроматографирования

Пластину для хроматографирования помещают в хроматографическую камеру, на дно которой налито небольшое количество аммиака, и оставляют. После подъема фронта аммиака до конца пластины ее вынимают из камеры и сушат в вытяжном шкафу до исчезновения запаха аммиака.

Перед использованием пластину активируют в сушильном шкафу при температуре (65 +/- 2) °C в течение 4 мин.

Пластину для хроматографирования готовят непосредственно перед проведением анализа.

8.2.3 Подготовка хроматографической камеры

В хроматографическую камеру наливают смесь подвижных растворителей н-гексана-ацетона в соотношении 6:1 по объему для насыщения ее парами. Объем подвижного растворителя должен находиться на высоте не более, чем 0,5 см от уровня дна камеры.

Хроматографическую камеру готовят за 1 ч до начала хроматографирования.

8.2.4 Подготовка пробы продукта

Подготовку пробы продукта, экстракцию хлорорганических пестицидов и очистку экстракта осуществляют по ГОСТ ISO 3890-1, ГОСТ ISO 3890-2.

8.3 Проведение измерений

Сухой очищенный остаток, полученный по 8.2.4 непосредственно перед проведением измерений, растворяют в круглодонной колбе вместимостью 25 см³, вносят пипеткой 1 см³ н-гексана и перемешивают. Отбирают 0,01 см³ полученного раствора и наносят на линию старта хроматографической пластины, находящуюся от края на расстоянии 2,0 см. Слева и справа от пробы на расстоянии не менее 10 мм наносят по 0,02 см³ градуировочных растворов хлорорганических пестицидов, приготовленных по 8.2.1.1, массовой концентрации 2 мкг/см³ каждого пестицида соответственно.

Пластины с нанесенными растворами пестицидов помещают в камеру для хроматографирования.

После того, как фронт растворителя поднимется на 1 см, пластину вынимают из камеры и оставляют на несколько минут до исчезновения запаха. Затем пластину орошают проявляющим реактивом и подвергают действию ультрафиолетового света в течение 10 - 15 мин на расстоянии 20 см от источника света.

При наличии хлорорганических пестицидов на белом фоне пластинки появляются пятна серо-черного цвета, которые располагаются в следующем порядке (снизу вверх): (Rf <*> = 0,21), (Rf = 0,26), (Rf = 0,30), ДДД (Rf = 0,32), ДДЭ (Rf = 0,66), ДДТ (Rf = 0,89).

--------------------------------

<*> Rf - отношение расстояния от линии старта до центра зоны вещества к расстоянию от линии старта до фронта растворителя. Величина Rf величина постоянная для соответствующего пестицида и описанной выше системы и зависит от ряда условий: способа элюирования, качества и активности сорбента, толщины слоя, качества растворителей, количества нанесенного вещества, длины пробега растворителей, положения стартовой линии и пр.

По значениям соответствующих Rf определяют наличие хлорорганических пестицидов, присутствующих в продукте.

Для количественного определения пестицидов каждый образец анализируют не менее двух раз, проведя предварительную оценку содержания пестицидов пробы и градуировочных растворов. Объемы градуировочных растворов и их концентрации подбираются в зависимости от интенсивности окраски сравниваемых пятен и их площадей.

8.4 Обработка результатов измерений

Расчет массовой концентрации пестицидов в пробе проводят путем сопоставления площади пятна испытуемого экстракта и площади пятна градуировочного раствора, наиболее близкого по интенсивности окраски к пятну экстракта.

Массовую концентрацию каждого из хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе X, мг/кг, вычисляют по формуле

где m - количество пестицида в 1 см³ стандартного раствора пестицида, мкг;

m₁ - масса анализируемой пробы по 8.2.4 продукта, г;

S₁ - площадь пятна, полученного при нанесении анализируемого экстракта, см²;

S₂ - площадь пятна, полученного при нанесении градуировочного раствора, см²;

V₁ - объем экстракта, в котором перерастворен сухой остаток, см³;

V₂ - объем анализируемого экстракта, нанесенного на пластину, см³;

k - коэффициент извлечения.

Коэффициент извлечения k для каждого хлорорганического пестицида определяют отдельно с использованием контрольной пробы, в которую заранее вносят известное количество пестицида и проводят через все стадии анализа.

Коэффициент извлечения k рассчитывают по формуле

где X - массовая концентрация пестицида в пробе с добавкой, мг/кг;

X_пр - массовая концентрация пестицида в пробе, мг/кг;

X_доб - массовая концентрация добавки пестицида, мг/кг.

Площади пятен, мм², полученных при нанесении анализируемого экстракта S₁ и полученных при нанесении стандартного раствора S₂ вычисляют по формулам

где D₁ - диаметр пятна, полученного при нанесении анализируемого экстракта, см;

D₂ - диаметр пятна, полученного при нанесении стандартного раствора, см.

При нанесении всей пробы V₁ = V₂.

В случае, когда необходимо определить массовую концентрацию хлорорганических пестицидов в пересчете на массовую долю жира, вычисляют по формуле

где 100 - коэффициент пересчета на 1 кг жира.

B - массовая доля жира в продукте, %.

Массовую долю жира продукта определяют по ГОСТ 5867.

Вычисление массовой концентрации хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе проводят до третьего десятичного знака. Окончательный результат округляют до второго десятичного знака.

8.5 Метрологические характеристики

Метод тонкослойной хроматографии обеспечивает получение результатов измерения с метрологическими характеристиками (при P = 0,95), не превышающими значений, приведенных в таблице 1.

8.6 Обработка результатов определения

Результат определения представляют в виде

где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, (мг/кг);

U - абсолютная расширенная неопределенность измерений при коэффициенте охвата k = 2, %, рассчитываемая по формуле

где U_отн - относительная расширенная неопределенность измерений (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2, определенная по таблице 1, %.

Числовое значение результата определения должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности измерений.

Допускается результат измерений представлять в виде

При условии U_лаб <= U, где U_лаб - значение расширенной неопределенности измерений, установленное при реализации настоящего метода в лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов измерений в лаборатории.

Числовое значение результата определения должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности измерений.

9. Метод газожидкостной хроматографии

9.1 Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

Вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы - по 8.1 со следующим дополнением:

Хроматограф газовый, оснащенный электронозахватным детектором, и программным обеспечением для сбора и обработки данных.

Колонки капиллярные кварцевые для хроматографического разделения длиной 25 - 50 м и внутренним диаметром от 0,25 мм до 0,50 мм с нанесенной неподвижной фазой средней полярности типа (95%)-диметил-(5%)-дифенилполисилоксана и толщиной пленки 0,25 - 0,5 мкм.

Допускается использование набивных колонок длиной 1 - 3 м и внутренним диаметром 3 - 4 мм с использованием в качестве сорбента хроматон зернением 0,16 мм - 0,20 мм с нанесенной неподвижной фазой типа SE или OV и толщиной пленки 0,5 мкм.

Подготовка набивной колонки приведена в приложении А.

Колбы мерные с притертыми пробками 2-10-2, 2-25-2 по ГОСТ 1770.

Насос вакуумный.

Стекловата или стекловолокно.

Азот газообразный по ГОСТ 9293, ос.ч.

Емкости для жидких проб стеклянные (виалы), вместимостью 2 см³, снабженные крышками с силиконовой мембраной.

9.2 Подготовка к проведению измерений

9.2.1 Подготовка реактивов и материалов

9.2.1.1 Приготовление основных градуировочных растворов хлорорганических пестицидов массовой концентрации 100 мкг/см³

Приготовление основных градуировочных растворов хлорорганических пестицидов массовой концентрации 100 мкг/см³ - по 8.2.1.1.

9.2.1.2 Приготовление промежуточных градуировочных растворов хлорорганических пестицидов N 1 массовой концентрации 10 мкг/см³

Промежуточный градуировочный раствор N 1 для каждого пестицида готовят отдельно.

В мерную колбу вместимостью 25 см³ пипеткой вносят 2,5 см³ основного градуировочного раствора пестицида по 9.2.1.1 и доводят до метки н-гексаном и перемешивают.

Срок хранения промежуточных градуировочных растворов пестицидов N 1 в склянках с плотно завинчивающимися крышками при температуре (4 +/- 2) °C - не более 2 мес.

9.2.1.3 Приготовление промежуточных градуировочных растворов хлорорганических пестицидов N 2 массовой концентрации 1 мкг/см³

Промежуточный градуировочный раствор N 2 для каждого хлорорганического пестицида готовят отдельно.

В мерную колбу вместимостью 25 см³ пипетками вносят 2,5 см³ промежуточного градуировочного раствора N 1 по 9.2.1.2 и доводят до метки н-гексаном и перемешивают.

Срок хранения промежуточных градуировочных растворов пестицидов N 2 в склянках с плотно завинчивающимися крышками при температуре (4 +/- 2) °C - не более 2 мес.

9.2.1.4 Приготовление рабочих градуировочных растворов хлорорганических пестицидов

Для приготовления рабочих градуировочных растворов пестицидов массовой концентрации 0,02 мкг/см³, 0,05 мкг/см³, 0,1 мкг/см³, 0,2 мкг/см³ и 2,0 мкг/см³ отбирают пипетками по 0,2 см³, 0,5 см³, 1 см³, 2 см³ промежуточного раствора N 2 соответственно для каждого пестицида и переносят в мерные колбы на 10 см³, а для раствора массовой концентрации 2,0 мкг/см³ отбирают пипеткой 2 см³ промежуточного раствора N 1 в мерную колбу на 10 см³, доводят н-гексаном до метки и перемешивают.

Срок хранения рабочих градуировочных растворов пестицидов в склянках с плотно завинчивающимися крышками при температуре (4 +/- 2) °C - не более одного месяца.

9.2.2 Подготовка хроматографа

Подготовку хроматографа к работе проводят в соответствии с руководством (инструкцией) по эксплуатации.

Условия хроматографирования, обеспечивающие наилучшее разделение пиков, для конкретного хроматографа и колонки подбираются индивидуально.

Рекомендуемые условия хроматографирования приведены ниже:

а) при работе с капиллярными колонками:

температура детектора - от 270 °C до 290 °C;

температура испарителя - 230 °C;

программирование температуры - двухступенчатое: начальная температура колонки - 150 °C и время анализа при этой температуре - 2 мин; скорость повышения температуры - 5 °C/мин; конечная температура колонки - 250 °C и время поддержания конечной температуры - 20 мин;

газ-носитель - азот;

давление газа-носителя - 0,8 кгс/см²;

скорость прохождения газа-носителя через колонку - 1 - 2 см³/мин;

скорость потока газа-носителя на сбросе - от 38 см³/мин до 39 см³/мин;

скорость газа-поддува в детектор - 40 см³/мин;

инжектируемый объем пробы - 1 мм³;

б) при работе с набивными стеклянными колонками:

температура детектора - 250 °C;

температура испарителя - 230 °C;

температурный режим - изотермический;

температура колонки - 200 °C;

газ-носитель - азот;

скорость газа-носителя - 30 см³/мин;

инжектируемый объем пробы - 1 мм³.

9.2.3 Градуировка хроматографа

Градуировка хроматографа заключается в определении времен удерживания и площадей пиков анализируемых пестицидов и выполняется путем анализа рабочих градуировочных растворов пестицидов по 9.2.1.4 в порядке возрастания массовой концентрации компонентов и условий, приведенных в 9.2.2. Каждый из градуировочных растворов анализируют не менее трех раз.

Расхождение между максимальным и минимальным значениями времен удерживания определяемых компонентов не должны отличаться друг от друга более чем на 1%.

На основании полученных результатов с помощью компьютерной системы сбора и обработки данных методом наименьших квадратов устанавливается уравнение градуировочного графика, и определяются градуировочные коэффициенты для каждого хлорорганического пестицида отдельно.

Примечание - Градуировочные коэффициенты для каждого хлорорганического пестицида признаются приемлемыми, если они получены с коэффициентом корреляции не ниже 0,99.

Периодическую проверку градуировочных характеристик проводят, анализируя 1 - 2 градуировочных раствора не менее одного раза в две недели.

Градуировочная зависимость признается стабильной, если выполняется условие

где - среднеарифметическое значение полученных массовых концентраций пестицида, мкг/см³;

C - заданное значение массовой концентрации пестицида в растворе, используемом для контроля стабильности градуировочной характеристики, мкг/см³.

Если условие стабильности градуировочной характеристики не выполняется, то выясняют причины полученного отрицательного результата и процедуру контроля повторяют.

9.2.4 Подготовка пробы продукта

Подготовку пробы продукта, экстракцию хлорорганических пестицидов и очистку экстракта осуществляют по ГОСТ ISO 3890-1, ГОСТ ISO 3890-2.

9.3 Проведение измерений

Для оценки фона (чистоты аналитической системы) каждый раз перед началом измерения инжектируют в прибор 1 мм³ чистого растворителя (н-гексана) и записывают хроматограмму, на которой не должны присутствовать посторонние пики.

Сухой очищенный остаток, полученный по 9.2.4, непосредственно перед проведением измерений, растворяют в круглодонной колбе вместимостью 25 см³, вносят пипеткой 2 см³ н-гексана и перемешивают. Переносят в виалу и отбирают 1 мм³ анализируемой пробы продукта, вводят ее в испаритель газового хроматографа и выполняют хроматографическое разделение в условиях, приведенных в 9.2.3.

По каждой анализируемой пробе проводят два параллельных измерения в условиях повторяемости.

9.4 Обработка результатов измерений

Идентификацию хлорорганического пестицидов на полученной хроматограмме, из очищенного экстракта анализируемой пробы, проводят, сравнивая время удерживания полученных пиков с временем удерживания пиков, полученных по градуировочным растворам хлорорганических пестицидов.

Массовую концентрацию каждого хлорорганического пестицида в анализируемой пробе, X, мг/кг, вычисляют по формуле

где C - массовая концентрация хлорорганического пестицида в анализируемой пробе, найденная по градуировочному графику мкг/см³;

V - конечный объем экстракта пробы, см³;

m - масса пробы, используемой для экстракции, г;

k - коэффициент извлечения.

Коэффициент извлечения k для каждого пестицида определяется исполнителем отдельно с использованием контрольной пробы, в которую заранее вносят известное количество пестицида и проводят через все стадии анализа.

Коэффициент извлечения k рассчитывают по формуле

где X - массовая концентрация пестицида в пробе с добавкой, мг/кг;

X_пр - массовая концентрация пестицида в пробе, мг/кг;

X_доб - массовая концентрация добавки пестицида в пробу, мг/кг.

В случае, когда необходимо определить массовую концентрацию хлорорганических пестицидов в пересчете на массовую долю жира, применяют формулу

где 100 - коэффициент пересчета на 1 кг жира.

B - массовая доля жира в продукте, %.

Массовую долю жира продукта определяют по ГОСТ 5867.

Вычисление массовой концентрации хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе проводят до третьего десятичного знака.

9.5 Метрологические характеристики

Метод газожидкостной хроматографии обеспечивает получение результатов измерения с метрологическими характеристиками (при P = 0,95), не превышающими значений, приведенных в таблице 2.

9.6 Оформление результатов определения

Результаты определения представляют в виде

где - среднеарифметическое значение результатов двух параллельных определений, (мг/кг);

U - абсолютная расширенная неопределенность измерений при коэффициенте охвата k = 2, %, рассчитываемая по формуле

где U_отн - относительная расширенная неопределенность измерений (в относительных единицах) при коэффициенте охвата k = 2 определенная по таблице 2, %.

Допускается результат измерений представлять в виде

при условии U_лаб <= U, где U_лаб - значение расширенной неопределенности измерений, установленное при реализации настоящего метода в лаборатории и обеспечиваемое контролем стабильности результатов измерений в лаборатории.

Числовое значение результата измерений должно оканчиваться цифрой того же разряда, что и значение расширенной неопределенности измерений.

9.7 Контроль качества результатов измерений

Контроль качества результатов измерений предусматривает:

- оценку погрешности измерений при реализации отдельной контрольной процедуры проводят методом добавок с использованием стандартных образцов для контроля, сравнивая результат контрольной процедуры с нормативом контроля по [3];

- контроль стабильности результатов измерений проводят на основе контроля стандартного отклонения промежуточной прецизионности и контроля стабильности показателя правильности по ГОСТ ИСО 5725-6 с применением контрольных карт Шухарта.

При неудовлетворительных результатах контроля качества результатов измерений выясняют и устраняют причины отклонений.

9.8 Проверка приемлемости результатов измерений

9.8.1 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях повторяемости

Проверку приемлемости результатов измерений хлорорганических пестицидов, полученных в условиях повторяемости, проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6.

Результаты измерений, выполненные в условиях повторяемости, считаются приемлемыми, если выполняется условие:

Если данное условие не выполнено, то проводят повторные измерения и проверку приемлемости результатов измерений в условиях повторяемости в соответствии с требованиями ГОСТ ИСО 5725-6.

При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам анализа.

9.8.2 Проверка приемлемости результатов измерений, полученных в условиях воспроизводимости

Проверку приемлемости результатов измерений массовой концентрации хлорорганических пестицидов в анализируемой пробе, полученных в условиях воспроизводимости (в двух лабораториях), проводят с учетом требований ГОСТ ИСО 5725-6.

Результаты измерений, выполненные в условиях воспроизводимости, считаются приемлемыми, если выполняется условие

В случае если предел воспроизводимости превышен, необходимо выяснить, обусловлено ли расхождение в результатах низкой прецизионностью метода измерений и/или различием в анализируемых пробах. Для проверки прецизионности в условиях повторяемости каждая из лабораторий должна следовать процедурам, описанным в ГОСТ ИСО 5725-6.

10. Требования, обеспечивающие безопасность

При выполнении работ следует соблюдать следующие требования:

- помещение, в котором проводят анализ, должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с ГОСТ 12.4.021. Работу с реактивами необходимо проводить в вытяжном шкафу. Содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не должно превышать норм, установленных требованиями ГОСТ 12.1.005;

- требования электробезопасности - по ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации приборов;

- требования взрывобезопасности - по ГОСТ 12.1.010;

- помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожаробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004, ГОСТ 12.1.018 и быть оснащено средствами пожаротушения - по ГОСТ 12.4.009;

- при работе с концентрированными кислотами и щелочами необходимо использовать спецодежду, защитные очки и резиновые перчатки. При выполнении анализов соблюдают требования безопасности при работе с химическими реактивами по ГОСТ 12.1.007.

К выполнению работ допускаются лица, имеющие квалификацию инженер, техник или лаборант, владеющие знаниями в области газовой хроматографии, навыками проведения анализа и изучившие инструкцию по эксплуатации используемой аппаратуры.

Стеклянную колонку длиной 1 - 3 м и внутренним диаметром 3 - 4 мм последовательно промывают этиловым спиртом, ацетоном и хлороформом, сушат при температуре 100 °C - 120 °C в сушильном шкафу и заполняют носителем Хромосорб W-HP или Хроматон N-AW-DMCS (N-AW-HMDS или N-Super) (фракция 0,125 - 0,16 мм или 0,16 - 0,20 мм) с нанесенной неподвижной фазой SE-30, SE-54, OV-17 или SE-60.

Для заполнения хроматографической колонки один ее конец, который в дальнейшем будет подсоединяться к детектору, закрывают тампоном из стекловолокна, промытого последовательно ацетоном и н-гексаном, и присоединяют к вакуумному насосу. Затем включают насос и заполняют колонку носителем с фазой, добавляя последний небольшими порциями и постукивая колонку палочкой с резиновым концом при постоянно работающем насосе, следя за тем, чтобы носитель заполнял колонку равномерно без разрывов.

Заполненную сорбентом колонку устанавливают в термостат колонок и прогревают в потоке газа носителя для удаления летучих соединений, присоединяя один ее конец к устройству ввода пробы. Во избежание загрязнения детектора другой конец колонки к детектору не подсоединяют. Кондиционирование колонки целесообразно проводить следующим образом. Установив расход азота через колонку 35 - 45 см³/мин, выдерживают колонку при температуре 60 °C - 70 °C в течение 20 - 30 мин. Затем поднимают температуру термостата колонок со скоростью 2 - 3 град/мин от 230 °C до 250 °C и при такой температуре кондиционируют колонку в течение 8 ч.