Цели и принципы стандартизации Российской Федерации установлены Федеральным законом от 27 декабря 2002 г. N 184-ФЗ "О техническом регулировании", а правила применения национальных стандартов Российской Федерации - ГОСТ Р 1.0-2004 "Стандартизация в Российской Федерации. Основные положения".

1. Разработан Государственным научным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом пищевых ароматизаторов, кислот и красителей Российской академии сельскохозяйственных наук (ГНУ ВНИИПАКК Россельхозакадемии).

2. Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 154 "Пищевые добавки и ароматизаторы".

3. Утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 30 ноября 2010 г. N 704-ст.

4. Введен впервые.

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячно издаваемых информационных указателях "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячно издаваемом информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет.

Настоящий стандарт распространяется на фруктовые консервы: плодово-ягодные консервированные компоты (далее - компоты) и устанавливает хроматографический метод определения наличия и идентификации синтетических красителей эритрозина и флоксина B (далее по тексту - красители).

По данному методу предел обнаружения красителей составляет не менее 0,0012%.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ Р ИСО 7886-1-2009 Шприцы инъекционные однократного применения стерильные. Часть 1. Шприцы для ручного использования

ГОСТ 61-75 Реактивы. Кислота уксусная. Технические условия

ГОСТ 427-75 Линейки измерительные металлические. Технические условия

ГОСТ 1770-74 (ИСО 1042-83, ИСО 4788-80) Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 2603-79 Реактивы. Ацетон. Технические условия

ГОСТ 3760-79 Реактивы. Аммиак водный. Технические условия

ГОСТ 4517-87 Реактивы. Методы приготовления вспомогательных реактивов и растворов, применяемых при анализе

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 8756.0-70 Продукты пищевые консервированные. Отбор проб и подготовка их к испытанию

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 18300-87 Спирт этиловый ректификованный технический. Технические условия

ГОСТ 21241-89 Пинцеты медицинские. Общие технические требования и методы испытаний

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26671-85 Продукты переработки плодов и овощей, консервы мясные и мясорастительные. Подготовка проб для лабораторных анализов

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Примечание. При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодно издаваемому информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по соответствующим ежемесячно издаваемым информационным указателям, опубликованным в текущем году. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1. Сущность метода

Метод анализа основан на водно-спиртовой экстракции красителей из измельченной твердой части анализируемых компотов и сорбции из экстракта и жидкой части компотов твердыми сорбентами, десорбции аммиаком и отделением последнего выпариванием с последующей идентификацией красителей хроматографированием в тонком слое сорбента (ТСХ).

Идентификацию красителей проводят методом сравнения значений (отношение расстояния от центра пятна обнаруженного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) каждого обнаруженного синтетического красителя со значениями (отношение расстояния от центра пятна стандартного синтетического красителя до линии старта к расстоянию линии миграции элюента до линии старта) контрольных образцов красителей (КО).

В качестве КО используют водно-спиртовые растворы синтетических стандартных красителей эритрозина и флоксина B.

3.2. Условия проведения анализа

При подготовке и проведении анализа должны быть соблюдены следующие условия:

Помещение, где проводят работы с реактивами, должно быть оснащено приточно-вытяжной вентиляцией.

Все операции с реактивами проводят в вытяжном шкафу.

3.3. Средства измерений, вспомогательное оборудование, посуда, реактивы и материалы

3.3.1. Весы лабораторные с пределами допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг и +/- 100 мг.

3.3.2. Воронка лабораторная типа В-36-80 ХС по ГОСТ 25336.

3.3.3. Пластина для тонкослойной хроматографии с силикагелем на полимерной подложке размером сторон 10 x 10 см.

3.3.4. Камера хроматографическая размером сторон 12 x 12 x 5 см.

3.3.5. Патрон для твердофазной экстракции с сорбентом оксида алюминия.

3.3.6. Алюминия оксид активированный кислый pH = 4,5 +/- 0,5, зернением от 0,05 до 0,15 мм, удельной поверхностью 155 м2/г для колоночной хроматографии.

3.3.7. Шприц медицинский инъекционный вместимостью от 10 до 20 см3 по ГОСТ Р ИСО 7886-1.

3.3.8. Микрошприц типа МШ-1 или Газохром-101 вместимостью 1,0 мм3 (1 мкл) с ценой деления не более 0,02 мм3 (0,02 мкл).

3.3.9. Пипетки с одной меткой вместимостью 5 см3 1-го класса точности по ГОСТ 29169.

3.3.10. Пипетки градуированные вместимостью 1, 5, 10 см3 1-го класса точности по ГОСТ 29227.

3.3.11. Стаканы термостойкие вместимостью 50, 200 см3 по ГОСТ 25336.

3.3.12. Колбы мерные с пришлифованной пробкой вместимостью 25, 50, 100, 250 см3 1-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.13. Пробки стеклянные с конусом 29/32 по ГОСТ 1770.

3.3.14. Чашка выпарная круглодонная вместимостью 100 см3 по ГОСТ 25336.

3.3.15. Палочка стеклянная с оплавленным концом.

3.3.16. Термостат или баня водяная.

3.3.17. Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919.

3.3.18. Линейка металлическая по ГОСТ 427.

3.3.19. Пинцет медицинский по ГОСТ 21241.

3.3.20. Красители синтетические стандартные эритрозин и флоксин B массовой долей красящих веществ не менее 85% по 3.4.4.1.

3.3.21. Кислота уксусная по ГОСТ 61, х.ч., ледяная, раствор массовой концентрации 10 г/дм3 готовят по ГОСТ 4517.

3.3.22. Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

3.3.23. Аммиак водный по ГОСТ 3760, ч.д.а., раствор массовой концентрации 250 г/дм3.

3.3.24. Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.3.25. Ацетон по ГОСТ 2603, ч.д.а.

3.3.26. Метилэтилкетон (2-бутанон) для хроматографии.

3.3.27. Мешалка магнитная с максимальной скоростью вращения магнитного ротора 1400 об/мин.

3.3.28. Фильтры бумажные обеззоленные "Красная лента".

3.3.29. Цилиндр мерный вместимостью 100 см3, с ценой наименьшего деления 1 см3, 1-го класса точности по ГОСТ 1770.

3.3.30. pH-метр со стеклянным электродом диапазоном измерения от 1 до 14 ед. pH и пределами допускаемой абсолютной погрешности измерений +/- 0,05 ед. pH.

3.3.31. Фильтры стеклянные по ГОСТ 25336.

Допускается применение других средств измерений и вспомогательного оборудования, не уступающих вышеуказанным по метрологическим и техническим характеристикам и обеспечивающих необходимую точность измерения, а также реактивов по качеству не хуже вышеуказанных.

3.4. Подготовка к анализу

3.4.1. Приготовление элюента

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 50 см3 вносят пипетками, индивидуальными для каждого реактива, 6 см3 ацетона, 14 см3 метилэтилкетона, 0,1 см3 водного аммиака и 6 см3 дистиллированной воды. Колбу закрывают пробкой и тщательно перемешивают.

Элюент готовят за 1 ч до начала анализа. Не допускается повторное использование элюента.

3.4.2. Приготовление экстрагента

В мерную колбу (с пришлифованной пробкой) вместимостью 250 см3 вносят пипеткой 0,1 см3 водного аммиака и отмеряют цилиндром 50 см3 этилового спирта и 50 см3 дистиллированной воды. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед анализом.

3.4.3. Приготовление водно-спиртового раствора

В мерную колбу вместимостью 250 см3 отмеряют цилиндром 50 см3 этилового спирта и 50 см3 дистиллированной воды. Закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор готовят непосредственно перед анализом.

3.4.4. Приготовление растворов КО

3.4.4.1. В необходимое число стаканов вместимостью 50 см3 каждый взвешивают по 0,05 г красителей по 3.3.20 на лабораторных весах (с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 0,1 мг), характеристики которых приведены в таблице 1.

3.4.4.2. В каждый стакан с 0,05 г стандартного красителя, подготовленного по 3.4.4.1, прибавляют 5 см3 раствора, полученного по 3.4.3, и перемешивают стеклянной палочкой до полного растворения. Для интенсификации растворения допускается нагревание раствора в стакане на водяной бане до температуры не более 70 °C. Затем раствор охлаждают до 20 °C и переносят в мерную колбу вместимостью 25 см3, доводят объем до метки раствором, полученным по 3.4.3, закрывают колбу пробкой и тщательно перемешивают.

Раствор КО хранят в склянках из темного стекла с завинчивающейся пробкой при комнатной температуре - не более 6 мес.

3.4.5. Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 8756.0.

3.4.6. Подготовка проб

Подготовку проб проводят по ГОСТ 26671, при этом жидкую и измельченную твердую части не объединяют и анализируют отдельно.

3.4.7. Извлечение красителей из анализируемых проб компотов методом твердофазной экстракции

3.4.7.1. Приготовление экстракта твердой части анализируемой пробы компотов

В стакане вместимостью 50 см3 взвешивают на лабораторных весах по ГОСТ Р 53228 с пределом допускаемой абсолютной погрешности однократного взвешивания +/- 100 мг не менее 5 г измельченной твердой части пробы компота, полученной по 3.4.6. Затем в стакан прибавляют экстрагент, приготовленный по 3.4.2 из расчета не менее 8 см3 на 1 г измельченной твердой части пробы. Содержимое стакана перемешивают на магнитной мешалке в течение 10 мин.

Полученную суспензию фильтруют через стеклянный или бумажный фильтр, твердую часть промывают экстрагентом по 3.4.2 из расчета не менее 10 см3 на 1 г измельченной твердой части компота.

3.4.7.2. Подготовка патрона для твердофазной экстракции красителей

Медицинским шприцем набирают от 10 до 20 см3 раствора ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3, соединяют шприц с патроном для твердофазной экстракции, заполненным оксидом алюминия. Патрон промывают раствором ледяной уксусной кислоты массовой концентрации 10 г/дм3 со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. Объем пропускаемого через патрон раствора ледяной уксусной кислоты должен быть не менее 25 см3. Затем патрон отсоединяют от шприца.

3.4.7.3. Сорбция красителей из экстракта

Измеряют при 20 °C на pH-метре со стеклянным электродом значение pH экстракта, полученного по 3.4.7.1. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (pH от 2,5 до 3,5 ед. pH) корректируют pH экстракта добавлением ледяной уксусной кислоты.

Медицинским шприцем набирают по 20 см3 экстракта и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.7.2. Пропускают анализируемый экстракт через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении нижней границей окрашенного слоя сорбента основания патрона, шприц отсоединяют от первого патрона, подсоединяют ко второму патрону и пропускают анализируемый экстракт через второй патрон. Объем пропускаемого через патрон экстракта должен быть не менее 40 см3. При необходимости используют от 1 до 3 патронов, подготовленных по 3.4.7.2. После этого промывают каждый патрон с сорбированным красителем 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.

3.4.7.4. Десорбция красителей из патронов водным аммиаком

Медицинским шприцем набирают 10 см3 водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим краситель, сорбированный из экстракта по 3.4.7.3. Пропускают водный аммиак через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. При необходимости промывание патрона водным аммиаком повторяют до полного обесцвечивания сорбента (оксида алюминия) в патроне. Элюат (раствор водного аммиака с красителем, извлеченным из патрона) собирают в выпарную чашку и выпаривают досуха на водяной бане с температурой от 80 °C до 90 °C. Сразу после испарения раствора аммиака чашку с сухим остатком (красителем) охлаждают.

Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см3 раствора, приготовленного по 3.4.3.

3.4.7.5. Сорбция красителей из жидкой части анализируемой пробы компота

Измеряют при 20 °C на pH-метре со стеклянным электродом значение pH жидкой части анализируемой пробы компота, полученной по 3.4.6. В случае отклонения измеренного значения от заданного интервала (pH от 2,5 до 3,5 ед. pH) доводят pH жидкой части анализируемой пробы компота добавлением ледяной уксусной кислоты.

Медицинским шприцем набирают от 5 до 10 см3 жидкой части анализируемой пробы компота и соединяют шприц с патроном, подготовленным по 3.4.7.2. Пропускают анализируемую жидкую часть компота через патрон по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту. По достижении нижней границей окрашенного слоя сорбента основания патрона, шприц отсоединяют от первого патрона, подсоединяют ко второму патрону и пропускают анализируемую жидкую часть через второй патрон. При необходимости используют от 1 до 2 патронов, подготовленных по 3.4.7.2. После этого промывают каждый патрон с сорбированным красителем 25 см3 раствора ледяной уксусной кислоты по одной капле со скоростью от 10 до 20 капель в минуту.

3.4.7.6. Десорбция красителей из патронов водным аммиаком

Медицинским шприцем набирают 10 см3 водного аммиака и соединяют шприц с патроном, содержащим сорбированный из жидкой части анализируемой пробы компота краситель по 3.4.7.5. Десорбцию красителей из патронов проводят водным аммиаком - по 3.4.7.4.

Краситель растворяют в чашке, добавляя пипеткой от 0,5 до 1,0 см3 раствора, приготовленного по 3.4.3.

3.4.8. Подготовка хроматографической камеры

В хроматографическую камеру вносят элюент по 3.4.1 в количестве, необходимом для погружения хроматографической пластины на глубину не более 0,5 см от нижнего края пластины. Камеру плотно закрывают и выдерживают в течение 1 ч.

3.4.9. Подготовка пластин для ТСХ анализа

На хроматографическую пластину карандашом наносят линию старта на расстоянии 1 см от края пластины и линию границы элюента на расстоянии 7 см от линии старта (параллельно рискам на обратной стороне пластины). На линию старта карандашом наносят точки с интервалом не менее 1 см.

3.5. Обнаружение и идентификация красителей

На хроматографическую пластину шириной 10 см, подготовленную по 3.4.9, микрошприцем наносят на линию старта в несколько приемов с промежуточным подсушиванием на воздухе от 0,3 до 1,0 мм3 растворов КО, приготовленных по 3.4.4.2, и от 0,5 до 3,0 мм3 анализируемых растворов красителей по 3.4.7.4 и 3.4.7.6. После нанесения растворов пластину подсушивают в течение от 3 до 4 мин и затем пинцетом помещают в хроматографическую камеру, подготовленную по 3.4.8, под углом примерно 45°. Камеру плотно закрывают. Элюирование заканчивают при достижении элюентом линии границы элюента - 7,0 см от линии старта. По окончании элюирования хроматографическую пластину вынимают и подсушивают.

Линейкой измеряют расстояние от центра каждого пятна красителя и линии границы элюента до линии старта.

4.1. Значение стандартного синтетического красителя вычисляют по формуле

где - расстояние до линии старта от центра пятна стандартного синтетического красителя, см;

- расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.

4.2. Значение обнаруженного красителя вычисляют по формуле

где - расстояние до линии старта от центра пятна обнаруженного синтетического красителя, см;

- расстояние до линии старта от линии границы элюента, см.

4.3. Сравнивают значения , рассчитанные по формуле 2, со значениями КО, рассчитанными по формуле 1, и при совпадении и цвета пятен обнаруженных красителей с и цветом пятен КО делают заключение о наличии или отсутствии эритрозина и флоксина B в анализируемом компоте.