1. Разработан и внесен Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП), Институтом Питания РАМН и Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей".

Разработчики:

В.И. Рогачев, д-р техн. наук; С.Ю. Гельфанд, канд. техн. наук; Т.Н. Медведева, канд. техн. наук; В.Ю. Громаков; Л.Л. Белко; В.А. Тутельян, д-р мед. наук; Е.Н. Степанова, канд. сельхоз. наук

2. Утвержден и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 26.01.93 N 23.

3. Срок проверки - 1998 г.; периодичность проверки - 5 лет.

4. Введен впервые.

5. Ссылочные нормативно-технические документы:

Настоящий стандарт распространяется на продукты переработки плодов и овощей и устанавливает фотометрический метод определения содержания витамина PP (ниацина).

Отбор проб - по ГОСТ 26313, подготовка проб к анализу - по ГОСТ 26671.

Метод основан на освобождении витамина PP путем гидролиза, очистке гидролизата от мешающих определению веществ, количественном получении окрашенного глутаминового альдегида, интенсивность окраски которого измеряют фотометрически.

Колориметр фотоэлектрический лабораторный по ГОСТ 12083 с пределами измерений оптической плотности 0 - 2 и пределом допускаемой основной абсолютной погрешности при измерении коэффициента пропускания не более +/- 1%, со светофильтром с длиной волны, соответствующей максимуму пропускания (400 - 425) нм, и кварцевыми кюветами рабочей длиной 30 мм; или спектрофотометр с диапазоном измерения, позволяющим проводить измерения оптической плотности раствора при длине волны 420 нм с допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%, снабженный кварцевыми кюветами с рабочей длиной 10 мм.

Весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г, 2-го класса точности.

Весы лабораторные общего назначения с метрологическими характеристиками по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 1 кг, 3-го класса точности.

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919 или газовая горелка.

Баня водяная.

Баня ледяная.

Бюретки по ГОСТ 20292 исполнений 1-2-25-0,1 или 2-2-25-0,1, или 3-2-25-0,1; исполнений 1-2-50-0,1 или 2-2-50-0,1, или 3-2-50-0,1.

Колбы по ГОСТ 1770 2-100-2, 2-250-2, 2-500-2, 2-1000-2.

Колбы по ГОСТ 25336 Кн-1-100-14/23 ТС, Кн-1-1000-24/29 ТС.

Цилиндры по ГОСТ 1770 1-50, 1-100.

Стаканы по ГОСТ 25336 13-1-1000 ТС, В-1-2000 ТС.

Воронки Бюхнера по ГОСТ 9147 2, 3 или 4.

Воронки по ГОСТ 25336 В-36-80 ХС или В-56-80 ХС.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 с пределами измерения 0 - 100 °C, с пределом допускаемой погрешности 2 °C

Пипетки по ГОСТ 20292 6-1-5, 6-1-10.

Пипетки по ГОСТ 20292 2-1-1 или 3-1-1, 2-1-2 или 3-1-2.

Эксикатор по ГОСТ 25336 с подходящим агентом для сушки.

Палочки из химико-лабораторного стекла по ГОСТ 21400.

Пробирки по ГОСТ 1770 2-20-14/23 ХС, 2-25-14/23 ХС.

Ступка по ГОСТ 9147 N 2.

Витамин PP (ниацин) по ФС 42-2357.

Кислота серная по ГОСТ 4204, х.ч., растворы , и .

Кислота соляная по ГОСТ 3118, х.ч., растворы c (HCl) = 0,5 моль/дм3 и c (HCl) = 5 моль/дм3.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328, х.ч., растворы c (NaOH) = 4,0 моль/дм3, c (NaOH) = 10 моль/дм3.

Бром по ГОСТ 4109, х.ч.

Калий роданистый по ГОСТ 4139, х.ч., или аммоний роданистый по ГОСТ 27067, х.ч., растворы массовой концентрации 100 г/дм3 и 10 г/дм3.

Кальций углекислый по ГОСТ 4530, х.ч.

Кальция гидроокись по ГОСТ 9262, ч.

Метол по ГОСТ 25664, перекристаллизованный, раствор массовой концентрации 80 г/дм3 в соляной кислоте c (HCl) = 0,5 моль/дм3.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Цинк сернокислый по ГОСТ 4174, х.ч., раствор массовой концентрации 800 г/дм3.

Фенолфталеин по ГОСТ 4919.1 раствор массовой концентрации 10 г/дм3.

Уголь активированный.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.

Фильтры обеззоленные по ТУ 6-09-1678.

Примечание. Допускается использование другой аппаратуры, реактивов и материалов с техническими и метрологическими характеристиками не ниже указанных.

4.1. Приготовление основного стандартного раствора витамина PP концентрации 0,1 мг/см3

Навеску витамина PP массой 0,050 г помещают в мерную колбу вместимостью 500 см3, добавляют 300 см3 воды и 5 см3 раствора серной кислоты . После растворения витамина PP доводят объем до метки водой, тщательно перемешивают и переносят в склянку из темного стекла с притертой пробкой. Хранят раствор в холодильнике не более 3 мес.

4.2. Приготовление рабочего стандартного раствора витамина PP концентрации 2 мкг/см3

В день проведения анализа 2 см3 основного стандартного раствора витамина PP (п. 4.1) пипеткой вносят в мерную колбу вместимостью 100 см3, объем доводят водой до метки и тщательно перемешивают.

4.3. Приготовление бромной воды

За 5 дней до проведения анализа в склянку темного стекла с притертой пробкой вносят 100 см3 воды и (в вытяжном шкафу) 5 - 6 см3 брома, энергично встряхивают. Склянку с бромной водой хранят в вытяжном шкафу в защищенном от света эксикаторе.

4.4. Приготовление роданбромидного раствора

Роданбромидный раствор готовят в вытяжном шкафу непосредственно перед применением.

К охлажденной на льду бромной воде (п. 4.3), взятой в объеме, необходимом для анализа, прибавляют по каплям охлажденный раствор роданистого калия или аммония массовой концентрации, вначале 100 г/дм3, затем 10 г/дм3 до полного обесцвечивания брома.

После этого постепенно, небольшими порциями вносят углекислый кальций до прекращения выделения пузырьков газа и образования осадка. Раствор фильтруют в склянку из темного стекла с притертой пробкой и оставляют на ледяной бане.

4.5. Перекристаллизация метола

В стакане вместимостью 1000 см3 нагревают до кипения 500 см3 раствора серной кислоты , добавляют 100 г метола и продолжают нагревать смесь до начала кипения. Если раствор сильно окрашен, то к нему добавляют 10 г активированного угля, перемешивают и сразу же фильтруют через воронку для горячего фильтрования или воронку Бюхнера, предварительно нагретую кипящей водой, в химический стакан вместимостью 2000 см3.

К фильтрату добавляют 700 см3 этилового спирта, перемешивают, стакан помещают в ледяную баню и оставляют в темноте на 4 - 5 ч. Выпавший осадок фильтруют через воронку Бюхнера, кристаллы на фильтре промывают небольшими (по 30 - 40 см3) количествами охлажденного спирта и высушивают на воздухе в темноте.

Перекристаллизованный метол сохраняют в склянке из темного стекла с притертой пробкой в защищенном от света месте.

4.6. Приготовление раствора метола

Непосредственно перед применением в мерной колбе вместимостью 100 см3 растворяют 8,0 г перекристаллизованного метола в растворе соляной кислоты c (HCl) = 0,5 моль/дм3. Доводят объем до метки раствором соляной кислоты.

5.1. В зависимости от вида исследуемого продукта для освобождения связанных форм витамина PP используют различные способы гидролиза.

5.1.1. При анализе продуктов переработки плодов и овощей без и с добавлением круп, молока и творога применяют щелочной гидролиз.

Навеску пробы массой 1,0 - 10,0 г растирают в фарфоровой ступке с 1,5 г гидроокиси кальция. Затем количественно переносят содержимое ступки в коническую колбу вместимостью 100 см3, смывая 50 - 60 см3 воды небольшими порциями. Колбу с пробой нагревают в течение 90 мин на кипящей водяной бане, предварительно закрыв горлышко колбы маленькой воронкой или специальной стеклянной пробкой-вкладышем, периодически встряхивая. После нагревания колбу охлаждают до комнатной температуры. Затем объем гидролизата доводят водой до 75 см3, перемешивают, охлаждают 2 ч на ледяной бане или оставляют на ночь в холодильнике. Охлажденный гидролизат фильтруют или центрифугируют.

25 см3 фильтрата помещают в цилиндр вместимостью 50 см3, добавляют 1 - 2 капли раствора фенолфталеина и по каплям раствор серной кислоты до обесцвечивания. Далее проводят обработку, как указано в п. 5.2.

5.1.2. При анализе продуктов переработки овощей с добавлением мяса, рыбы, яиц применяют кислотный гидролиз.

Навеску пробы массой 1,0 - 10,0 г количественно переносят в коническую колбу вместимостью 100 см3, смывая 50 - 60 см3 раствора серной кислоты небольшими порциями.

Колбу с пробой нагревают в течение 90 мин на кипящей водяной бане, предварительно закрыв горлышко колбы маленькой воронкой или специальной стеклянной пробкой-вкладышем, периодически встряхивая. Затем колбу охлаждают до комнатной температуры. Объем гидролизата доводят водой до 75 см3, тщательно перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр (первые 5 - 6 см3 фильтрата отбрасывают). 25 см3 фильтрата помещают в цилиндр вместимостью 50 см3, добавляют 1 - 2 капли фенолфталеина и нейтрализуют раствором гидроокиси натрия c (NaOH) = 10 моль/дм3 до слабо-розового окрашивания и охлаждают. Избыток щелочи устраняют добавлением 1 - 2 капель раствора серной кислоты .

Далее проводят обработку, как указано в п. 5.2.

5.1.3. Если фильтраты интенсивно окрашены, то pH раствора доводят до 8 по универсальной индикаторной бумаге растворами кислоты или щелочи тех же концентраций, которые применялись при гидролизе.

5.2. Очистка фильтрата

В колбу с нейтральным фильтратом вносят 2 см3 раствора сернокислого цинка и затем раствор гидроокиси натрия c (NaOH) = 4 моль/дм3 по каплям до слабо-розового окрашивания. Тщательно перемешивают, удаляют розовое окрашивание добавлением 1 - 2 капель раствора серной кислоты , выдерживают в течение 10 мин, затем добавляют 1 - 2 капли этилового спирта для устранения пены. Объем доводят водой до метки, перемешивают и фильтруют через складчатый фильтр.

5.3. Проведение цветной реакции

Для проведения цветной реакции используют 8 пробирок или колб с притертыми пробками. В три пробирки пипеткой вносят по 5 см3 рабочего стандартного раствора витамина PP, приготовленного по п. 4.2. В 4 пробирки вносят пипеткой по 5 см3 полученного фильтрата, в контрольную пробирку - 5 см3 воды вместо фильтрата. Все пробирки закрывают пробками и нагревают на водяной бане при температуре 48 - 52 °C в течение 5 - 10 мин. Затем в пробирки со стандартным раствором витамина, в пробирку с водой и в две пробирки с испытуемым фильтратом добавляют из бюретки в вытяжном шкафу по 2 см3 роданбромидного раствора.

Все пробирки закрывают пробками, встряхивают и оставляют на водяной бане при температуре (50 +/- 2) °C 10 мин. Через 10 мин все пробирки охлаждают водой до комнатной температуры, оставляют на 10 мин в темном месте, затем в каждую из них добавляют по 3 см3 раствора метола, встряхивают и оставляют на 1 ч в темном месте. После этого измеряют оптическую плотность растворов на фотоэлектроколориметре или спектрофотометре. Контрольным раствором служит дистиллированная вода.

Если растворы, полученные по п. 5.3, мутные, то перед измерением оптической плотности их фильтруют в кювету через бумажный фильтр.

6.1. Массовую долю витамина PP (X) в процентах вычисляют по формуле

где - значение оптической плотности испытуемого раствора;

A - значение оптической плотности раствора для поправки на окрашенные посторонние вещества;

V - общий объем гидролизата, см3;

- объем раствора после очистки сернокислым цинком, см3;

m - масса витамина PP в 5 см3 рабочего стандартного раствора, мкг, m = 10 мкг;

- значение оптической плотности рабочего стандартного раствора витамина PP (среднее значение из трех параллельных определений);

B - значение оптической плотности контрольного раствора;

- масса навески, г;

- объем гидролизата, взятого на очистку, см3;

- объем очищенного гидролизата, взятого для проведения цветной реакции, см3.

6.2. За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений, рассчитанных до четвертого и округленных до третьего десятичного знака, расхождение между которыми при P = 0,95 не должно превышать 13% по отношению к среднему арифметическому значению.

6.3. Минимальная концентрация витамина PP, определяемая указанным методом, составляет 0,5 мкг в 1 см3 колориметрируемого раствора.

6.4. Допускаемое расхождение между результатами испытаний, выполненных в двух разных лабораториях при P = 0,95, не должно превышать 30% по отношению к среднему арифметическому значению.