Редакционная коллегия:

Калинин В.А. - к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. - к.б.н.

Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. - зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. - к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Имазетапир - действующее вещество гербицида пивот, ф. Цианамид, США.

Химическое название: (RS)-5-этил-2-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2- имидозолин-2-ил) никотиновая кислота.

Молекулярная формула: .

Структурная формула:

М.м. 289,34.

Химически чистый препарат пивота представляет собой порошок от белой до желтой окраски с легким кисловатым запахом. Т. пл. 169 - 173 °C, Т. кип. 180 °C. Растворимость при 25 °C (г/100 мл): в ацетоне - 4,82; диметилсульфоксиде - 42,25; метаноле - 10,5; пропаноле - 1,73; воде - 0,14. Давление паров - .

Препарат малотоксичен для теплокровных. для кроликов и мышей при оральном введении 5000 мг/кг. При прямом контакте не оказывает раздражающего действия на кожу.

МДУ пивота в бобах сои - 0,5 мг/кг, ПДК пивота в почве - 0,1 мг/кг, в воде - 0,7 мг/л, ОБУВ в воздухе рабочей зоны - 2,0 мг/м3, в атмосферном воздухе - 0,04 мг/м3.

Пивот применяется в борьбе с сорной растительностью в посевах бобовых культур.

2.1.1. Принцип метода

Метод определения имазетапира основан на извлечении гербицида из бобов и травы сои подкисленным водным этанолом, из травы лекарственных культур и гороха (зерно) - 70% водным ацетоном,из почвы смесью ацетона и 0,05 н , очистке экстрактов путем переэкстракции с последующим определением вещества тонкослойной хроматографией.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

I. В качестве проявляющего реагента - О-толидин. Минимально определяемое количество имазетапира в пробе - 0,5 мкг. Нижний предел определения пивота в лекарственном сырье (трава) и горохе (зерно) - 0,08 мг/кг, в почве - 0,05 мг/кг, в воде - 0,01 мг/кг, % обнаружения пивота в сырье - 68 - 70%, в почве - 75 - 80%.

II. В качестве проявляющего реагента - бромфеноловый синий. Минимально определяемое количество пивота в пробе - 3 мкг. Нижний предел обнаружения пивота в сырье бобов сои - 0,3 мг/кг, в траве - 0,30 мг/кг, в почве - 0,15 мг/кг, в воде - 0,07 мг/кг.

2.1.3. Избирательность метода

Метод селективен. Прочие пестициды не мешают определению.

Ацетон, х.ч., ГОСТ 22300-76.

Хлороформ, х.ч., ГОСТ 22300-76, перегнанный.

Имазетапир, ан. станд., фирма Цианамид.

Н-гексан, ч.д.а., ТУ 6-09-3375-78.

Сульфат натрия, х.ч., ТУ 6-09-3675-74, безводный.

Соляная кислота, ч., ГОСТ 3118-77.

О-толидин, ТУ 6;09-2223-75.

Этиловый спирт, ректиф., ГОСТ 5962-67.

Уксусная кислота, ч., ГОСТ 18270-72, ледяная.

Перманганат калия, ГОСТ 20490-75.

Четыреххлористый углерод.

Йодид калия, ч., ГОСТ 4222-74.

Серная кислота.

Азотнокислое серебро, ч.д.а., ГОСТ 1277-81.

Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-113-2.

Проявляющие реагенты: I. Растворяют 0,16 г о-толидина в 30 мл ледяной уксусной кислоты, доводят до 500 мл дистиллированной водой и прибавляют 1 г йодида калия. Раствор хранят в темной склянке. Годен к употреблению в течение длительного времени. II. 0,05 г бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона и доводят до 100 мл 1% раствором нитрата серебра в водном ацетоне (ацетон - вода, 3:1).

Экстрагирующая смесь: 1 часть 1 M HCl, 39 частей и 60 частей этанола.

Стандартные растворы имазетапира в ацетоне с содержанием 100 мкг/мл и 10 мкг/мл.

Ротационный вакуумный испаритель ИР-1М ТУ 11-97-76.

Лампа УФ света МРТУ 42-1618.

Хроматографическая камера с пришлифованной крышкой.

Мерные колбы, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 мл.

Делительные воронки, ГОСТ 25336-82, вместимостью 500 мл, 250 мл.

Пульверизаторы стеклянные.

Чашки Петри, ГОСТ 25336-82.

Эксикатор, ГОСТ-25336-82.

Пипетки градуированные, ГОСТ 20292-74 на 10, 1 и 0,1 мл.

Градуированные пробирки, ГОСТ 1770-74, с пробками на шлифах, вместимостью 10 мл.

Колбы плоскодонные, ГОСТ 25335-82, вместимостью 500 и 250 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74, вместимостью 100 и 25 мл.

Микрошприцы на 100 мкл, ГОСТ 20292.

Почвенное сито.

Хроматографические пластинки "Silufol", Чехословакия.

Хроматографические пластинки "Сорбфил", ТУ 26-11-17-89 ПКБ Пластмаш, МВС АН России, г. Краснодар.

Зерновая мельница или кофемолка.

2.4.1. Подготовка камеры для хлорирования

Хлорирующий раствор готовят быстрым смешиванием четыреххлористого углерода, 3% раствора перманганата калия и 12% раствора HCl (1:1:1).

2.4.2. Подготовка хроматографических камер

Хроматографическая камера заполняется смесью подвижных растворителей: I. Н-гексан - хлороформ - уксусная кислота - этиловый спирт (20:2:2:4) (для лекарственного сырья).

II. Н-гексан - этанол - хлороформ - уксусная кислота (30:10:5:1) (для сои). Для насыщения камеры парами подвижных растворителей необходимо 1 - 1,5 часа при температуре не менее 20 - 25 °C.

Отбор проб для проведения определения проводится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, продуктов питания и объектов внешней среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Минздравом СССР 21 августа 1979 года N 2051-79.

Сухое сырье (траву) лекарственных культур, трав и бобы сои, зерна гороха измельчают на зерновой мельнице или кофемолке, сырое сырье режут ножницами, навеску бобов (сырую) растирают в ступке.

Сырую почву растирают в ступке, а сухую просеивают через сито.

Лекарственное сырье (трава), горох (зерно).

Навеску сырой травы 50 г или сухой 10 г, зерен гороха (сухой) - 10 г помещают в плоскодонную колбу вместимостью 250 мл. Пробу заливают 100 и 50 мл 70% подкисленного HCl ацетона соответственно и оставляют на ночь. Экстракт фильтруют и повторяют экстракцию 2 раза по 50 и 25 мл растворителя.

Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, добавляют 50 мл дистиллированной воды, подкисляют концентрированной до pH = 2 и приливают 30 мл гексана. Содержимое взбалтывают в течение 2-х минут. Гексановую фракцию отбрасывают, в делительную воронку к оставшейся водно-ацетоновой фракции добавляют 30 мл хлороформа и пивот экстрагируют путем встряхивания в течение 2-х минут.

Повторяют экстракцию еще 2 раза по 25 мл. Хлороформные экстракты объединяют и переносят в делительную воронку, приливают 25 мл 50% водного раствора бикарбоната натрия, встряхивают содержимое в течение 2-х минут. После разделения слоев хлороформ отбрасывают, а в бикарбонат добавляют 1 M до pH = 2. Жидкость перемешивают до полной дегазации.

Далее в бикарбонатный раствор добавляют 25 мл хлороформа и 10 г хлористого натрия. Воронку встряхивают. После разделения фаз хлороформный слой переносят в отгонную колбу, пропуская его через слой безводного сернокислого натрия. Повторяют экстракцию порциями хлороформа по 15 мл. Хлороформ отгоняют под вакуумом при 40 °C досуха.

Сухой остаток растворяют в 0,5 мл ацетона.

Соя, (трава, бобы). Навеску бобов сои 50 г сырых и 20 г сухих заливают экстрагирующей смесью (, (1:39:60)) 100 и 50 мл соответственно и оставляют на ночь.

Навеску травы сои 50 г сырой и 50 г сухой также заливают экстрагирующей смесью и оставляют на ночь.

Экстракты фильтруют через воронку Бюхнера, промывая пробу экстрагирующей смесью дважды по 50 мл.

Объединенные экстракты переносят в делительную воронку, доводят pH раствора до 1 - 2 и приливают 30 мл смеси гексана. Далее определение проводят так, как в случае лекарственного сырья.

Почва. Навеску сырой почвы 100 г, навеску сухой/почвы 50 г заливают смесью ацетона и 0,05 н (2:1) и оставляют на ночь.

Количество смеси: 100 мл в случае сырой почвы, 50 мл в случае сухой.

Экстракт фильтруют в делительную воронку. Экстракцию повторяют еще 2 раза по 50 и 25 мл растворителя. Объединенные в делительной воронке экстракты подкисляют 1 M до pH = 2, добавляют 50 мл хлороформа и пивот экстрагируют при перемешивании в течение 2-х минут.

Далее определение вещества проводят аналогично описанному для лекарственного сырья.

Вода. 200 мл воды помещают в делительную воронку на 500 мл, подкисляют конц. до pH = 2. Имазетапир экстрагируют трижды по 30 мл хлороформа. Объединенные хлороформные экстракты пропускают через слой безводного сернокислого натрия. Растворитель упаривают досуха при температуре t = 40 °C. Остаток растворяют в 0,5 мл ацетона.

2.7.1. Хроматографирование

На хроматографические пластинки "Силуфол" и "Сорбфил" с помощью микропипетки на 0,1 мл наносят 0,1 мл раствора. Справа и слева наносят серию стандартных растворов имазетапира с содержанием вещества 0,4; 0,5; 0,6; 0,8; 1,0 мкг в случае проявляющего реагента о-толидина. Градуировочные растворы готовят в мерных пробирках на 10 мл согласно таблице 1.

В случае проявляющего реагента бромфенолового синего стандартные растворы определяемого соединения наносятся с содержанием 2; 3; 4; 5; 7 мкг. Градуировочные растворы готовят в мерных пробирках на 10 мл согласно таблице 2.

Хроматографирование осуществляют в системах:

I. Н-гексан - хлороформ - уксусная кислота - этанол (20:2:2:1) (для лекарственного сырья, почвы и воды).

II. Н-гексан - этанол - хлороформ - уксусная кислота (30:10:5:1) (для сои, почвы и воды).

При подъеме фронта растворителя на 10 см на пластинках "Силуфол" и на 5 см на пластинках "Сорбфил" пластинки вынимают из хроматографической камеры, сушат на воздухе. Далее пластинки обрабатывают проявляющим реагентом:

I. Пластинку помещают под УФ-лампу на 10 минут, а затем на 10 - 15 минут в хлорирующую камеру. После удаления избытка хлора пластинку обрабатывают из пульверизатора о-толидином.

II. Пластинку обрабатывают бромфеноловым синим, подсушивают и опрыскивают 2% раствором лимонной кислоты.

Пивот проявляется в виде синего пятна на желтоватом фоне. Окраска сохраняется в течение 5 - 10 минут.

препарата 0,35. Если температура будет ниже 20 °C, то значение может быть ниже указанной величины.

Количественное определение содержания имазетапира в пробе проводят путем сравнения площади интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартных растворов.

Содержание имазетапира в анализируемой пробе (X) мг/кг вычисляют по формуле:

C - содержание имазетапира, найденное в хроматографируемой пробе, мкг;

V - общий объем раствора, мл;

- объем аликвоты, нанесенной на пластинку, мл;

P - навеска анализируемой пробы в г.

Соблюдать требования техники безопасности, принятые для работы с растворителями, легковоспламеняющимися жидкостями и пестицидами.

Разработчики: Г.П. Пушкина, НПО "ВИЛАР", Киевский институт усовершенствования врачей.