Главная // Актуальные документы // ПравилаСПРАВКА
Источник публикации
М.: МП "Рарог", 1992
Примечание к документу
Документ утратил силу на территории Российской Федерации в связи с изданием
Постановления Главного государственного санитарного врача РФ от 27.07.2020 N 23.
Взамен Методических указаний по определению токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек N 3239-85 и Методических
указаний по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции Sporotrichlella N 1829-78.
Название документа
"Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек"
(утв. Минздравом СССР 31.12.1987 N 4541-87)
"Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек"
(утв. Минздравом СССР 31.12.1987 N 4541-87)
Утверждаю
Заместитель главного
государственного
санитарного врача СССР
А.И.ЗАИЧЕНКО
N 4541-87
31 декабря 1987 г.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ
ТОКСИЧНОСТИ ЗЕРНА (РЖИ, ПШЕНИЦЫ) С РОЗОВОЙ
ОКРАСКОЙ ОБОЛОЧЕК <*>
--------------------------------
<*> С выходом в свет Санитарных правил "Определение токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек" отменяется действие "Методических указаний по определению токсичности зерна (ржи, пшеницы) с розовой окраской оболочек" N 3239-85 и "Методических
указаний по определению токсичности зерновых культур и продуктов их переработки, пораженных грибами рода Фузариум секции Sporotrichlella" N 1829-78.
Санитарные правила предназначаются для контроля безвредности зерна в лабораториях республиканских, краевых и областных СЭС.
В условиях повышенной влажности в период созревания хлебных злаков (при дождливом лете и на поливных землях) возможно поражение зерновых культур, особенно ржи и пшеницы, микроскопическими грибами. Грибы могут также развиваться в зерне запоздалой уборки, а также в убранном своевременно, но недостаточно просушенном или хранившемся при высокой влажности. Отдельные представители микроскопических грибов, развиваясь на зерне, образуют продукты жизнедеятельности - микотоксины, ядовитые для человека, вследствие чего зерно приобретает токсические свойства. Особую опасность представляют грибы рода Fusarium. Термическая обработка (выпечка хлебов, варка пищи) не разрушает ядовитые вещества, образованные фузариями. Поэтому употребление в пищу фузариозного зерна и продуктов его переработки может стать причиной заболевания людей (алиментарно-токсическая алейкия, расстройства функции кишечного тракта и др.). Поражение зерна грибами рода Fusarium обычно приводит к появлению розовой окраски оболочек отдельных зерен, так как многие представители фузариев при своем росте на зерне образуют наряду с токсинами красно-розовый пигмент. Поэтому розовоокрашенные оболочки рассматриваются как косвенный признак фузариозного поражения. Однако розовую окраску оболочек зерна могут формировать и другие микроскопические грибы помимо фузариев.
Исследования, проведенные в Институте питания АМН СССР, показали, что токсическими свойствами может обладать не только розовоокрашенное зерно с признаками фузариоза, но также зерно без признаков фузариозного поражения, если содержание в испытуемом образце розовоокрашенных зерен превышает 3%.
В связи с этим для решения вопроса о путях использования розовоокрашенного зерна без признаков фузариоза все партии зерна с содержанием зерен с розовоокрашенными оболочками свыше 3% должны быть исследованы на токсичность.
Поскольку в зерне с розовой окраской оболочек, пораженном микроскопическими грибами, может накапливаться целый ряд токсических грибных метаболитов, природа которых не всегда известна, для выявления токсичности такого зерна необходимо использовать биологические методы определения, позволяющие выявить в зерне весь комплекс токсических компонентов, независимо от его химической природы.
Биологические методы исследования токсичности зерна с розовой окраской оболочек включают биопробы с культурами дрожжей - Saccharomyces lactis ВКМУ-459, бактерии Bacillus megaterium ВКМВ-44 и испытания на растущих крысятах.
В качестве микромодели для выявления фузариотоксинов в зерне используют штамм дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459, чувствительный к Т-2 токсину.
Культура Bacillus megaterium ВКМВ-44 чувствительна к действию афлатоксинов, а также к действию метаболитов грибов рода Aspergillus - продуцентов охратоксинов.
Биопробы с дрожжами Saccharomyces lactis ВКМУ-459 и бактериями Bacillus megaterium ВКМВ-44 позволяют быстро провести предварительную проверку наличия у зерна токсических свойств, связанных с возможным загрязнением вышеперечисленными микротоксинами. В случае обнаружения токсичности по биопробам необходимо провести анализ зерна на содержание конкретных микотоксинов химическими методами.
В связи с тем что розовоокрашенное зерно может содержать токсические метаболиты грибов неизвестной природы, кроме проверки с дрожжевыми и бактериальными тестами, токсичность зерна должна быть проверена в опытах на высших животных. В качестве животных, чувствительных к действию комплекса токсических компонентов розовоокрашенного зерна, предлагаются крысята вместо рекомендованных ранее голубей, так как голуби избирательно чувствительны только к фузариотоксинам.
Исследования на штаммах бактерий и дрожжей должны проводиться в бактериологической лаборатории СЭС, определение токсичности зерна в опытах на крысятах должно выполняться в токсикологической лаборатории СЭС.
Определение токсичности розовоокрашенного зерна следует проводить по прилагаемой схеме.
1. Схема проведения исследования
Проба зерна (500 г)
350 г смолоть
2. Посуда. Аппаратура. Реактивы
Посуда
2. Пипетки на 1 и 10 мл, градуированные, ГОСТ 28336-82
3. Микропипетки на 0,1 мл градуированные
5. Банки стеклянные с притертой пробкой емк. 1,0 л
6. Фарфоровые чашки (диаметр - 13 мм)
7. Стеклянные палочки
10. Пробойник металлический (диаметр 6 - 7 мм)
11. Микробиологическая петля
Аппаратура
12. Горелка спиртовая или газовая
13. Весы торговые со стрелками на 200 г
14. Весы технические
15. Кофемолка или лабораторная мельница
16. Оптический стандарт мутности ГИСК им. Тарасевича
17. Ареометр АСТ-2
19. Шприц медицинский на 1 мл
20. Иглы для шприца N 11 с напаянной на конце оливой
21. Ножницы
22. Скальпель глазной
23. Пинцеты - глазной и анатомический
24. Холодильник бытовой
25. Термостат на 28 °C +/- 1 °C и 35 +/- 1 °C
Реактивы
| | ИС МЕГАНОРМ: примечание. Взамен ГОСТ 975-75 Постановлением Госстандарта СССР от 10.06.1988 N 1711 с 1 июля 1989 года введен в действие ГОСТ 975-88. | |
26. Глюкоза х.ч., ГОСТ 975-75
| | ИС МЕГАНОРМ: примечание. Постановлением Госстандарта России от 13.08.1997 N 274 с 1 января 1998 года введен в действие ГОСТ 17206-96. | |
27. Агар микробиологический, ГОСТ 17206-71
28. Подсолнечное масло пищевое
29. Хлороформ медицинский
30. Пикриновая кислота, насыщенный водный раствор
31. Спиртовая настойка йода медицинская
33. Сусло пивное
35. Натрий едкий очищенный,
ГОСТ 11078-78 - 10-процентный раствор
1. Мясо-пептонный агар с глюкозой:
Мясо-пептонный бульон - 1000 мл
Агар - 20 г
Стерилизовать в течение 20 мин. при 120 °C.
В остуженный до 60 °C мясо-пептонный агар ввести 25 мл 40-процентного стерильного раствора глюкозы, размешать и использовать для постановки опыта с Bacillus megaterium или разлить в стерильные пробирки по 5 мл для приготовления скошенного агара. Пробирки со средой выдержать 24 ч в термостате при 37 °C, отбраковать проросшие, остальные хранить в холодильнике не более 1 мес. и использовать для пересева культуры Bacillus megaterium.
2. Картофельный агар:
Картофель тертый - 200 г
Агар - 20 г
Вода водопроводная - 1000 мл
Картофель варят 1 ч, фильтруют через марлю, доливают водой до первоначального объема, добавляет агар. Стерилизуют 30 мин. при 120 °C и разливают по 5 мл в стерильные пробирки для приготовления скошенного агара. Хранят в холодильнике не более 1 мес., используют для пересева культуры Bacillus megaterium.
3. Сусло-агар:
Пивное сусло 14 Ball - 100 мл
Вода водопроводная - 100 мл
Агар - 4 г
В пивном сусле определяют содержание сахара ареометром и разводят водопроводной водой до нужной концентрации (7 Ball). Определяют pH и доводят 10-процентным раствором NaOH до 5,8 - 6,0. Добавляют агар по 2 г на 100 мл разведенного сусла. Стерилизуют 30 мин. при 112 °C. Перед использованием в опыте с дрожжами расплавить на кипящей водяной бане, охладить до 50 °C и разлить в чашки Петри по 20 мл или в стерильные пробирки для приготовления скошенного агара. Хранить пробирки со средой в холодильнике не более 1 мес. и использовать для пересева дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459.
1. Культура дрожжей - Saccharomyces lactis - ВКМУ-459.
Культуру засевают штрихом на скошенный сусло-агар в пробирки микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, инкубируют при 28 °C 24 ч. Выросшую односуточную культуру хранят в холодильнике и пересевают на свежие косяки сусло-агара 1 раз в мес.
2. Культура бактерий - Bacillus megaterium ВКМВ-44.
Культуру засевают штрихом на скошенный картофельный агар в пробирки микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, и инкубируют при 28 °C 24 ч. Выросшую односуточную культуру хранят в холодильнике и пересевают на свежие косяки картофельного агара через каждые 2 недели.
5. Отбор зерна и его паспортизация
Пробы отбирают от каждой поступающей партии зерна в соответствии с
ГОСТ 13586.3-83.
Отобранные образцы должны быть паспортизированы. На этикетках указывается:
а) место отбора зерна (область, район, колхоз, совхоз и т.д.);
б) наименование зерновых культур (пшеница, рожь, просо и др.);
в) количество зерна, от которого взята проба (или размер партии);
г) содержание розовоокрашенных зерен;
д) откуда взят образец (снят на корню, из валков, из зернохранилища и т.д.);
е) дата отбора пробы;
ж) вес взятого образца;
з) фамилия ответственного за отбор проб.
Отобранные образцы направляют на исследование в областную, краевую и республиканскую санитарно-эпидемиологическую станции.
6. Подготовка материала для исследования
Из поступившего на исследование образца зерна отбирают среднюю пробу около 500 г, подсушивают ее при температуре 40 - 50 °C, из них 350 г измельчают на лабораторной мельнице или кофемолке в течение 2 мин., делят на две порции по 100 г ("А") и 250 г ("Б") и помещают в две стеклянные банки с притертыми пробками. Порции заливают хлороформом в количестве: порцию "А" - 300 мл, порцию "Б" - 800 мл, взбалтывают, оставляют на 24 ч. Отфильтровывают через бумажный фильтр порцию "А" в фарфоровую чашку, порцию "Б" - в банку с притертой пробкой емкостью 1 л. Для приготовления экстрактов зерна используют чисто вымытую нестерилизованную посуду и нестерильные фильтры. Выпаривают порции "А" и "Б" каждую отдельно в фарфоровых чашках в токе воздуха при комнатной температуре до исчезновения следов хлороформа, определяемых по реакции с йодом.
Примечание. Постановка йодной реакции на остаточный хлороформ в экстракте зерна, на дно пустой фарфоровой чашки наносят стеклянной палочкой каплю выпаренного экстракта и каплю 5-процентного спиртового раствора йода. Появление розовой окраски свидетельствует о присутствии хлороформа и необходимости дальнейшего выпаривания. Отсутствие порозовения свидетельствует о полном удалении хлороформа из экстракта.
Полученный таким образом сгущенный экстракт порции "А" используют для постановки опыта с культурой дрожжей Saccharomyces lactis ВКМУ-459 и бактерий Bacillus megaterium. Если остаток экстракта затвердел, его слегка разводят добавлением 0,4 мл стерильного подсолнечного масла.
Сгущенный экстракт из порции "Б" разводят 50 мл стерильного подсолнечного масла и получают масляный экстракт зерна, который хранят в холодильнике в стерильных колбочках емкостью 50 мл и используют для введения экспериментальным крысятам.
В качестве контроля готовят, как описано выше, для порции "Б" масляный экстракт доброкачественного зерна нормальной окраски.
7. Определение токсичности зерна при помощи
чувствительного к фузариотоксинам штамма дрожжей
Saccharomyces lactis ВКМУ-459
Для проведения исследования культуру дрожжей из исходной пробирки, хранящейся в холодильнике, пересевают штрихом микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, на скошенный сусло-агар в пробирки и инкубируют при температуре 28 °C в течение 24 ч.
Затем в пробирку с выросшей односуточной культурой дрожжей наливают 10 мл стерильной водопроводной воды и стерильной петлей взбалтывают дрожжи в воде до получения суспензии. Суспензию переносят стерильной пипеткой на 5 мл в пустую стерильную пробирку и разводят стерильной водой до мутности, соответствующей 5 единицам мутности (5 млн. клеток в 1 мл) стандарта мутности. По 2 мл приготовленной суспензии дрожжевых клеток наливают в заранее приготовленные стерильные чашки Петри (2 мл суспензии на 1 чашку) и заливают расплавленным и охлажденным до 50 °C сусло-агаром из расчета 20 мл на чашку и тщательно перемешивают. В застывшей пластинке агара пробочным пробойником диаметром 6 - 7 мм, обработанным методом фламбирования, делают лунки по 3 лунки на чашку согласно схеме. В лунку вносят по 0,1 мл экстракта порции "А" стерильными микропипетками. Для каждого образца закапывают две лунки. В качестве контроля в третью лунку вносят стерильное подсолнечное масло. Чашки, не перевертывая вверх дном, ставят в термостат и инкубируют сутки при 28 °C. Отмечают появление зон угнетения роста дрожжей вокруг лунок. Для каждой пробы зерна проводят два параллельных исследования. В контроле стерильные зоны отсутствуют. При наличии стерильных зон в контроле опыт повторяют со свежей культурой.
Далее зерно исследуют в опытах с Bacillus megaterium и на крысятах.
8. Определение контаминации зерна микотоксинами при помощи
чувствительного штамма бактерий Bacillus megaterium ВКМВ-44
Для проведения анализа культуру бактерий Bacillus megaterium ВКМВ-44 на картофельном агаре из пробирки, хранящейся в холодильнике, пересевают штрихом микробиологической петлей, обожженной в пламени горелки, на скошенный МПА с 1% глюкозы или картофельный агар <*> и инкубируют при температуре 28 °C 24 ч. Готовят суспензию клеток из выросшей односуточной культуры бактерий в стерильном физиологическом растворе NaCl (0,85%) по эталону мутности N 5, что соответствует 5 единицам мутности стандарта мутности.
--------------------------------
<*> Картофельный агар обеспечивает лучший рост культуры, чем МПА с 1% глюкозы.
В расплавленный и охлажденный до 50 °C МПА с 1% глюкозы или картофельный агар вносят приготовленную клеточную суспензию в количестве 15 мл на 100 мл агара и разливают в приготовленные чашки Петри из расчета 20 мл на чашку. В застывшей пластинке агара пробочным пробойником диаметром 6 - 7 мм, обработанным методом фламбирования, делают лунки, по 3 лунки на чашку согласно схеме. В две лунки вносят по 0,1 мл экстракта порции "А" стерильными микропипетками на 0,1 мл.
В третью лунку в качестве контроля вносят стерильное подсолнечное масло. Чашки, не перевертывая вверх дном, ставят в термостат и инкубируют сутки при 28 °C. Отмечают появление зон угнетения роста бактерий вокруг лунок.
В контроле стерильные зоны вокруг лунок не образуются. В случае появления стерильных зон вокруг лунок в контроле опыт повторяют со свежей культурой бактерий.
Затем зерно исследуют в опытах с крысятами.
9. Биологическая проба на крысятах
Используют молодых крысят линии Вистар, самцов весом 50 - 70 г в количестве 6 - 7 животных на каждую пробу зерна.
Животных осматривают, отбраковывают больных, взвешивают, метят пикриновой кислотой, в соответствии с меткой записывают номер животного, помещают по 5 штук в клетку. Клетки маркируют - "опыт", "контроль", ставят дату начала опыта.
Ежедневно крысятам вводят в пищевод через рот по 0,5 мл масляного экстракта исследуемой пробы зерна. Для введения используют медицинский шприц, рассчитанный на дозу объемом 1 мл, и иглу для шприца N 11, на конец которой напаивается олива. Экстракт вводят ежедневно 1 раз в сутки утром натощак, для чего с вечера убирают из клетки обычный виварный корм, оставляя воду для питья. После введения экстракта ставят в клетку виварный корм. Длительность опыта с введением масляного экстракта зерна 8 сут. В качестве контроля используют 6 - 7 крысят того же возраста и веса, которым вводят в течение опыта ежедневно натощак по 0,5 мл масляного экстракта, приготовленного из доброкачественного зерна нормальной окраски, а также в качестве дополнительного контроля отсаживают 7 животных, которым не делают никаких введений (контроль - интактные крысята).
Ежедневно следят за общим состоянием животных, отмечают вялость, расстройства пищеварения, тремор, взъерошенность шерсти как симптом возможного токсического действия испытуемых образцов зерна.
Признаком острой токсичности служит гибель животного в течение опытного периода.
При отсутствии острого токсического действия экстрактов зерна доброкачественность последнего оценивается на основе комплекса признаков, включающих клинические симптомы, весовые характеристики животных и состояние их органов.
Для получения перечисленных сведений по окончании опыта контрольных животных натощак взвешивают, забивают методом декапитации, вскрывают и исследуют визуально состояние органов, сначала у контрольных животных, затем у опытных. Отклонения регистрируются по сравнению с контрольными животными. Отмечают светлую окраску или желтизну, зернистую консистенцию печени, воспаление легких, вздутость кишечника, увеличение пейеровых бляшек в тонкой кишке и увеличение размеров мезентерального брыжеечного лимфоузла, гиперемированные кровеносные сосуды. Печень, тимус и селезенку взвешивают.
При визуально обнаруживаемых отклонениях в печени морфологические исследования выявляют наличие жировой и белковой дистрофии и другие нарушения микроструктуры органов; при визуально выявляемых отклонениях в лимфоузле морфологические исследования обнаруживают наличие кровоизлияний в этом органе, обеднение клеточного состава в фолликулярных центрах и другие нарушения микроструктуры; при визуальном осмотре пейеровых бляшек в тонкой кишке при токсическом действии наблюдаются увеличенные или уменьшенные размеры по сравнению с контролем, резкая гиперемия сосудов и изменения морфологической структуры органа; визуально обнаруживаемые изменения в кишечнике также сопровождаются нарушениями микроструктуры крипт, эпителия, субэпителиальных слоев с выраженной их инфильтрацией круглоклеточными элементами; кроме того, у этих животных обнаруживаются морфологическими методами нарушения в структуре тимуса, селезенке и почек. Морфологические исследования подтверждают правомочность суждения о наличии токсического действия по визуально выявляемым признакам патологических отклонений в органах забитых животных.
Результаты испытаний регистрируются в журнале по
форме N 1 и
2.
1. На основе полученных данных учитывают количество погибших животных и их процент; если гибели животных не отмечалось, то записывают - 0.
2. На основе взвешивания животных рассчитывают прирост массы тела в граммах и процентах к исходному весу:
а) прирост массы в г - масса конечная - масса начальная;
б) относительный прирост массы тела в % =

.
Пример. Нач. масса 50 г, конечная - 65 г
прирост в % =

.
Рассчитывают среднее арифметическое значение массы тела и прирост массы у всех животных за опытный период.
3. Подсчитывают средние весовые показатели массы печени и селезенки и высчитывают их относительную массу по следующей формуле:
Пример. Вес крысенка перед забоем 70 г
вес печени 3,5 г

на 100 г тела.
4. Подсчитывают количество животных, у которых были обнаружены клинические симптомы заболевания и при вскрытии визуально обнаружены изменения в вышеперечисленных органах, вычисляют процент отклонения. По
формам 1 и
2 заполняют и результаты обследования контрольных животных.
5. Затем составляют суммарную таблицу по
формам 3 и
4, где приводят полученные данные для всех исследованных опытных образцов зерна с розовой окраской оболочек и образцов контрольного зерна нормальной окраски.
6. Оценивают токсичность зерна по данным
форм 3 и
4. При токсичности зерна наблюдаются изменения одновременно по ряду признаков.
Зерно оценивается по 4-балльной системе:
1) резкотоксичное - при гибели одного или более экспериментальных животных - (++++ или 4+);
2) токсичное - при наличии клинических признаков токсичности и отклонений в макроскопических характеристиках одного органа у 100% опытных животных или при поражении двух, трех и более органов более чем у 50% опытных животных, что может сопровождаться потерей веса животными или резким снижением прироста массы тела по сравнению с контролем (например, шерстный покров взъерошен, все животные малоподвижны, прирост тела снижен: в опыте - 17%, в контроле - 30%, печень с желтизной и зернистостью - у 5 крысят; пневмония - у 4; лимфоузлы больше нормы - у 4; кишечник вздут - у 5 крысят) - (+++ или 3+);
3) слаботоксичное - клинических проявлений нет, прирост массы близок к контролю, но при вскрытии обнаруживаются визуально у 2 - 3 из 7 животных 1 или 2 признака патологических отклонений (пневмония и желтизна печени; или вздутый кишечник и увеличенные лимфоузлы с гиперемированными сосудами и увеличенные пейеровы бляшки и т.д.) - (++ или +).
При сопоставлении контрольных и опытных животных при взятии в опыт полноценных животных изменения в печени, кишечнике, лимфоузлах, а также свежая пневмония в контрольной группе животных не должны обнаруживаться более чем у одного животного. Если пневмония обнаружена у половины контрольных животных, то этот признак не может рассматриваться как свидетельство токсического действия исследуемого зерна при оценке показателей у опытных животных.
10. Рекомендации по использованию розовоокрашенного
зерна после проверки его токсичности
1. При наличии стерильных зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium и гибели опытных крысят (+4) зерно оценивается как резкотоксичное и может быть использовано только на технические цели.
2. При отсутствии стерильных зон угнетения роста дрожжей и Bacillus megaterium, но при гибели опытных крысят зерно также оценивается как резкотоксичное и может быть использовано только на технические цели.
3. При наличии стерильных зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium и токсическом действии на опытных крысят (+3) без гибели животных зерно оценивается как токсичное. Для окончательного решения необходимо определить содержание соответствующих микотоксинов <*> (Т-2 токсина, вомитоксина, афлатоксина, охратоксина) и по результатам принимается решение о подсортировке зерна с содержанием розовоокрашенных зерен от 3 до 10% доброкачественным зерном до содержания розовоокрашенных зерен не выше 3%. Токсичность подсортированного зерна повторно проверяется на животных. Токсичное зерно с содержанием розовоокрашенных зерен свыше 10% может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.
--------------------------------
<*> Вышеперечисленные микотоксины определяются химическими методами в соответствии с нижеперечисленными методическими указаниями и рекомендациями:
1. Методические
указания по обнаружению, идентификации и определению содержания Т-2 токсина в пищевых продуктах и продовольственном сырье. N 3184-84, М., 1984 г.
2. Методические
указания по обнаружению, идентификации и определению содержания дезоксиниваленола (вомитоксина) в зерне и зернопродуктах. N 3940-85, М., 1985 г.
3. Методические
рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания афлатоксинов в пищевых продуктах. N 2273-80, М., 1981 г.
4. Методические рекомендации по обнаружению, идентификации и определению содержания охратоксина А в пищевых продуктах. N 3245-85, М., 1985 г.
4. Если у зерна установлены слабые токсические свойства на животных (+2), но гибели экспериментальных животных не наблюдалось и не было выявлено зон угнетения роста дрожжей и Bacillus megaterium, зерно считается слабо токсичным. После анализа на вомитоксин зерно с содержанием розовоокрашенных зерен от 3 до 10% может быть использовано на продовольственные цели только с подсортировкой доброкачественным зерном нормальной окраски до содержания розовоокрашенных зерен не выше 3%. Зерно, содержащее свыше 10% розовоокрашенных зерен, может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.
5. Наличие зон угнетения роста дрожжей и/или Bacillus megaterium при отсутствии токсического действия на опытных крысят является показанием для проведения химического анализа зерна, как условно токсичного, на содержание соответствующих микотоксинов (Т-2 токсина, вомитоксина, афлатоксина и охратоксина). Если микотоксины не обнаруживаются, зерно считается не токсичным и реализуется как не токсичное (см. п. 6).
6. Если зерно, содержащее свыше 3% зерен с розовоокрашенными оболочками, в опытах по применяемой схеме не обнаруживает токсические свойства, то после определения содержания вомитоксина, зерно с содержанием розовоокрашенных зерен от 3 до 5% может быть использовано на продовольственные цели без ограничений, а при содержании розовоокрашенных зерен от 5 до 10% - с подсортировкой доброкачественным зерном до содержания розовоокрашенных зерен не выше 5%. Зерно, содержащее свыше 10% розовоокрашенных зерен, может быть использовано на фуражные и технические цели в соответствии с заключением ветеринарного надзора.
По вопросам практического внедрения биологических методов определения токсичности зерна следует обращаться в Институт питания Академии медицинских наук СССР (Москва, 109240, Устьинский проезд, дом 2/14, телефоны: 227-88-64, 297-74-43).
Культуры микроорганизмов Bacillus megaterium ВКМВ-44 и Saccharomyces lactis ВКМУ-459 можно выписать из Всесоюзной коллекции микроорганизмов по адресу: 142292, г. Пущино, Московской области, Институт биохимии и физиологии микроорганизмов АН СССР, телефон: 231-30-87, а также получить в Институте питания АМН СССР.
Для получения стандарта мутности для оптической стандартизации бактериальных взвесей обращаться в Институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича.
Форма N 1
Регистрация результатов испытаний зерна
на токсичность на крысятах
Дата опыта: | Образец зерна N |
N животного | Масса тела | Гибель животных | Клинические симптомы: вялость, поносы, выделения из носа, взъерошенность и т.д. | Масса органов |
начальная (г) | конечная (г) | прирост в % | печень | селезенка | тимус |
Масса печени в г | Относительная масса печени в г на 100 г тела | Масса селезенки в г | Относительная масса селезенки в г на 100 г тела | Масса тимуса в г | Относительная масса тимуса в г на 100 г тела |
1. | | | | | | | | | | | |
2. | | | | | | | | | | | |
3. | | | | | | | | | | | |
4. | | | | | | | | | | | |
5. | | | | | | | | | | | |
6. | | | | | | | | | | | |
7. | | | | | | | | | | | |
Среднее М | | | | Всего погибших | Всего с клинич. симпт. | Средние показатели по группе |
% погибших | % |
Форма N 2
Регистрация результатов испытаний зерна
на токсичность на крысятах.
Макроскопические изменения в органах
Дата опыта: | Образец N |
N животного | Визуально выявляемые изменения в органах | Результаты микроскопического изучения органов |
Легкие (пневмония) | Печень (желтизна, зернистость и др.) | Кишечник (вздутие, гиперемия сосудов и др.) | Пейеровы бляшки | Мезентеральный брыжеечный лимфоузел | Тимус | Печень | Селезенка | Почки | Кишечник | Брыжеечные лимфоузлы | Пейеровы бляшки |
1. | | | | | | |
2. | | | | | | |
3. | | | | | | |
4. | | | | | | |
5. | | | | | | |
6. | | | | | | |
7. | | | | | | |
Среднее по группе | | | | | | |
Кол-во животн. (в %) с измен. в органах | | | | | | |
Форма N 3
Сравнение характеристик опытных и контрольных животных,
полученных при испытании токсичности зерна на крысятах
Дата опыта:
N образца зерна | Характеристика образца (откуда получен, % розовоокрашенных зерен) | Кол-во погибших животных (в %) | Средний прирост массы тела выживших животных (в %) | Кол-во животных (в %) с клиническими симптомами | Средняя относительная масса органов животных по группе |
Печень (г/100 г массы тела) | Селезенка (г/100 г массы тела) | Тимус (г/100 г массы тела) |
1. 2. 3. и т.д. | | | | | |
Контроль - доброкачественное зерно | | | | | | | |
Контроль - интактные крысята | | | | | | | |
Форма N 4
Сравнение макроскопических и микроскопических изменений
в органах опытных и контрольных животных, полученных
при испытании токсичности зерна на крысятах
Дата опыта
N образца зерна | Характеристика образца (откуда получен, % розовоокрашенных зерен) | Количество животных (в %) с визуально выявляемыми изменениями в органах | Количество животных (в %) с микроскопическими изменениями в органах |
Пневмония | Печень | Кишечник | Пейеровы бляшки | Брыжеечный лимфоузел | Тимус | Печень | Селезенка | Почки | Кишечник | Пейеровы бляшки | Брыжеечные лимфоузлы |
1. 2. 3. и т.д. | | | | | | | | | | | | | |
Контроль - доброкачеств. зерно | | | | | | | | | | | | | |
Контроль - интактные крысята | | | | | | | | | | | | | |