1. Подготовлены ФГБНУ "Научно-исследовательский институт медицины труда" (Л.Г. Макеева, Н.С. Горячев, Н.Л. Полуэктова, Е.Н. Грицун).

2. Утверждены Руководителем Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Главным государственным санитарным врачом Российской Федерации А.Ю. Поповой 18 октября 2019 г.

3. Введены впервые.

Разработаны сотрудниками ООО "Алгама" (Н.П. Сергеюк), АО "Всесоюзный научный центр по безопасности биологически активных веществ" (М.И. Голубева, Л.И. Крымова), ФГБУ "Научный центр биомедицинских технологий ФМБА" (А.Ю. Савченко), ООО "ФНЦ "ИннофармаТех" (И.Е. Шохин), АНО "Международная ассоциация клинических фармакологов" (Г.В. Раменская).

Свидетельство о государственной метрологической аттестации N 205-23/RA.RU.311787-2016/2017.

1.1. Настоящие методические указания устанавливают порядок применения метода спектрофотометрии для измерений массовой концентрации маннитола в воздухе рабочей зоны в диапазоне массовых концентраций 5,0 - 20,0 мг/м³.

1.2. Методические указания по измерению массовых концентраций вредных веществ в воздухе рабочей зоны предназначены для лабораторий Роспотребнадзора, санитарных лабораторий промышленных предприятий при осуществлении контроля за содержанием вредных веществ в воздухе рабочей зоны, а также научных и других организаций, осуществляющих исследования содержания вредных веществ в воздухе рабочей зоны.

1.3. Методические указания носят рекомендательный характер.

2.1. Физико-химические свойства маннитола:

Структурная формула:

Эмпирическая формула: C₆H₁₄O₆.

Молекулярная масса: 182,17.

Регистрационный номер CAS: 69-65-8.

Маннитол - бесцветный кристаллический порошок сладкого вкуса, без запаха, температура плавления 166 - 168 °C, растворим в воде 220 г/дм³ (20 °C), очень легко растворим в горячей воде, растворим в спирте (12,05 г/дм³), пиридине, глицерине (55,56 г/дм³), нерастворим в эфире. Агрегатное состояние в воздухе - аэрозоль.

2.2. Токсикологическая характеристика маннитола:

- шестиатомный углеводородный спирт из группы сахаров, моносахарид, стереоизомер сорбитола;

- малоопасное вещество, используется в качестве диуретического средства, широко применяется в фармацевтической и пищевой промышленности (пищевая добавка E42).

3.1. При соблюдении всех регламентированных условий и проведении анализа в точном соответствии с данной методикой при выполнении измерений массовой концентрации маннитола метрологические характеристики не превышают значений, представленных в табл. 1 (при доверительной вероятности P = 0,95).

4.1. Измерение массовой концентрации маннитола выполняют методом спектрофотометрии.

Метод определения основан на окислении маннитола йодной кислотой до муравьиной кислоты и формальдегида, взаимодействии последнего с фуксинсернистым реактивом и последующем измерении относительной оптической плотности продукта реакции, окрашенного в сине-фиолетовый цвет.

Измерение производят при длине волны 570 нм.

Отбор проб проводят с концентрированием на аналитические аэрозольные фильтры.

Минимально определяемое содержание маннитола в анализируемом объеме пробы - 300 мкг.

Нижний предел измерений массовой концентрации маннитола в воздухе - 5,0 мг/м³ (при отборе 200 дм³ воздуха).

Метод специфичен в условиях производства лекарственных форм, содержащих маннитол. Определению не мешают вспомогательные вещества: целлюлоза микрокристаллическая, аэросил, тальк, магния стеарат, титана диоксид.

Примечание. Допускается использование средств измерений с аналогичными или лучшими характеристиками.

Примечание. Допускается использование реактивов с более высокой квалификацией.

Примечание. Допускается применение оборудования, вспомогательных устройств и материалов с аналогичными или лучшими техническими характеристиками.

6.1. При работе с реактивами соблюдают требования безопасности, установленные для работы с токсичными, едкими и легковоспламеняющимися веществами, по ГОСТ 12.1.007, ГОСТ 12.1.005.

6.2. При проведении анализов горючих и вредных веществ должны соблюдаться требования противопожарной безопасности по ГОСТ 12.1.004. Должны быть в наличии средства пожаротушения по ГОСТ 12.4.009. Необходимо провести обучение работающих правилам безопасности труда согласно ГОСТ 12.0.004.

6.3. При выполнении измерений с использованием спектрофотометра соблюдают правила электробезопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.019 и инструкцией по эксплуатации прибора.

6.4. Помещение лаборатории должно быть оборудовано приточно-вытяжной вентиляцией. Содержание вредных веществ в воздухе не должно превышать гигиенических нормативов <9>.

--------------------------------

<9> ГН 2.2.5.3532-18 "Предельно допустимые концентрации (ПДК) вредных веществ в воздухе рабочей зоны"; ГН 2.2.5.2308-07 "Ориентировочные безопасные уровни воздействия (ОБУВ) вредных веществ в воздухе рабочей зоны".

Измерения в соответствии с настоящей методикой может выполнять специалист, имеющий опыт работы на спектрофотометре, освоивший данную методику и подтвердивший экспериментально соответствие получаемых результатов нормативам контроля погрешности измерений.

8.1. Условия приготовления растворов и подготовки проб к анализу

8.2. Выполнение измерений на спектрофотометре проводят в условиях, рекомендованных технической документацией к прибору.

9.1. Перед выполнением измерений проводят следующие работы: приготовление растворов, подготовка спектрофотометра, установление градуировочной характеристики, контроль стабильности градуировочной характеристики, отбор проб воздуха.

9.2. Приготовление основного раствора маннитола: основной раствор маннитола с массовой концентрацией 5 000 мкг/см³ готовят растворением 0,5000 +/- 0,0002 г маннитола в воде дистиллированной в мерной колбе вместимостью 100 см³. Срок хранения раствора - в течение недели в холодильнике.

9.3. Приготовление 5% раствора серной кислоты в воде (по объему): в коническую колбу вместимостью 500 см³ наливают 190 см³ дистиллированной воды и осторожно при перемешивании добавляют 10 см³ концентрированной серной кислоты. Срок хранения раствора - в течение недели в холодильнике.

9.4. Приготовление 10% раствора серной кислоты в воде (по объему): в коническую колбу вместимостью 250 см³ наливают 90 см³ дистиллированной воды и осторожно при перемешивании добавляют 10 см³ концентрированной серной кислоты. Срок хранения раствора - в течение недели в холодильнике.

9.5. Приготовление 20% раствора натрия сернистокислого в воде: навеску натрия сернистокислого в количестве 2,0 г вносят в мерную пробирку вместимостью 20 см³ и добавляют 10 см³ воды дистиллированной, перемешивают до растворения вещества. Готовится в день проведения анализа.

9.6. Приготовление 2,5% раствора калия йоднокислого мета в 5% растворе серной кислоты: навеску калия йоднокислого мета в количестве 0,25 г вносят в мерную пробирку вместимостью 20 см³ и добавляют 10 см³ 5% раствора серной кислоты, перемешивают до растворения вещества. Готовится в день проведения анализа.

9.7. Приготовление фуксинсернистого реактива: навеску фуксина основного для фуксинсернистой кислоты в количестве 0,1 г растворяют в мерной колбе вместимостью 100 см³, содержащей 50 см³ дистиллированной воды, при нагревании на кипящей водяной бане. Охлаждают и добавляют 2,5 г кристаллического сульфита натрия, 1,5 см³ концентрированной соляной кислоты, перемешивают и доводят дистиллированной водой до метки. Через 2 - 3 часа раствор окрашивается в желтовато-розовый цвет. Раствор готов к употреблению через сутки хранения в темном месте при комнатной температуре. Срок хранения раствора в темной склянке - в течение трех недель.

9.8. Подготовку спектрофотометра проводят в соответствии с руководством по его эксплуатации.

9.9. Градуировочную характеристику, выражающую зависимость относительной оптической плотности раствора от содержания маннитола, устанавливают по шести сериям измерений по шести концентрациям вещества в каждой серии и контрольного раствора N 0 согласно табл. 2.

На аэрозольные фильтры, помещенные в бюксы, пипеткой вместимостью 1 см³ наносят основной раствор маннитола в соответствии с табл. 2. Фильтры подсушивают при комнатной температуре и с помощью пипетки вместимостью 5 см³ приливают по 5 см³ воды дистиллированной и оставляют на 10 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в пробирки мерные вместимостью 10 см³. Фильтры повторно обрабатывают 5 см³ водой дистиллированной и оставляют на 10 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Растворы объединяют в мерных пробирках вместимостью 10 см³ и доводят объем до 10 см³ водой дистиллированной. Аналогично обрабатывается чистый аэрозольный фильтр (контрольный раствор).

Пипеткой вместимостью 5 см³ отбирают по 3 см³ каждого градуировочного и контрольного раствора и переносят в мерные пробирки вместимостью 10 см³. В каждую пробирку наливают по 1 см³ 10% раствора серной кислоты и 0,5 см³ 2,5% раствора калия йоднокислого мета в 5% растворе серной кислоты, содержимое пробирок перемешивают. Через 30 минут в каждую пробирку добавляют по 0,2 см³ 20% раствора натрия сернистокислого для разрушения избытка йодной кислоты (растворы должны быть бесцветными), а затем добавляют по 1 см³ фуксинсернистого реактива и вновь перемешивают.

Через 30 минут измеряют относительную оптическую плотность полученных растворов в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 570 нм по отношению к контрольному раствору, не содержащему определяемого вещества (табл. 2, раствор N 0).

Строят градуировочную характеристику: на ось ординат наносят значения относительных оптических плотностей градуировочных растворов, на ось абсцисс - соответствующие им содержания маннитола в мкг.

9.10. Контроль стабильности градуировочной характеристики проводят не реже 1 раза в квартал, а также при смене реактивов и изменении условий анализа (после ремонта и поверки прибора). Стабильность результатов измерений контролируют перед проведением измерений, анализируя один из градуировочных растворов. Один раз в год градуировочную характеристику устанавливают заново.

Для контроля стабильности готовят три градуировочных раствора по п. 9.9 (соответствующих началу, середине и концу диапазона измерений) и анализируют в точном соответствии с методикой.

Градуировочную характеристику считают стабильной, если для каждого контрольного образца выполняется условие:

D_изм, D_гр - значение относительной оптической плотности образца маннитола для контроля, измеренное и найденное по градуировочной характеристике;

К_гр - норматив контроля, , где

- границы относительной погрешности, % (табл. 1).

Если условие стабильности не выполняется только для одного образца, то выполняют повторное измерение относительной оптической плотности этого образца с целью исключения результата, содержащего грубую ошибку.

Если градуировочная характеристика не стабильна (условие (1) не выполняется для двух или более образцов градуировочных растворов), выясняют причины нестабильности и повторяют контроль стабильности с использованием других образцов (табл. 2) для установления градуировочной характеристики, предусмотренных методикой. При повторном обнаружении нестабильности градуировочной характеристики ее устанавливают заново.

9.11. Отбор проб воздуха проводят в соответствии с ГОСТ 12.1.005 и приложением 9 к Р 2.2.2006-05.

Одновременно отбирают две пробы. При отборе проб фиксируется температура воздуха и атмосферное давление.

Воздух с объемным расходом 20,0 дм³/мин аспирируют через аналитический аэрозольный фильтр с площадью рабочей поверхности 20 см², помещенный в фильтродержатель, снабженный металлической сеткой. Для определения массовой концентрации маннитола на уровне 5,0 мг/м³ (1/2 ПДК) необходимо отобрать не менее 200 дм³ воздуха в течение 10 минут.

Срок хранения отобранных проб в бюксах - в течение недели в холодильнике.

10.1. Аэрозольный фильтр с отобранной пробой и чистый аэрозольный фильтр переносят в бюксы, приливают по 5 см³ воды дистиллированной и оставляют на 10 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой для лучшего растворения вещества. Затем фильтры тщательно отжимают, растворы сливают в другие бюксы. Фильтры повторно обрабатывают 5 см³ воды дистиллированной и оставляют на 10 минут, периодически помешивая стеклянной палочкой, затем фильтры тщательно отжимают и удаляют. Оба раствора последовательно фильтруют на химической воронке через фильтры бумажные средней плотности в мерные пробирки с пришлифованными пробками вместимостью 10 см³. Объем растворов доводят до 10 см³ водой дистиллированной и далее анализ проводят аналогично градуировочным растворам.

Относительную оптическую плотность полученной анализируемой пробы измеряют в кювете с толщиной поглощающего слоя 10 мм при длине волны 570 нм по отношению к контрольному раствору, полученному при обработке чистого аэрозольного фильтра.

Устанавливают содержание маннитола в анализируемом объеме пробы по градуировочной характеристике (п. 9.9).

Примечание. Фильтрование анализируемых проб проводится для удаления нерастворимых в дистиллированной воде вспомогательных веществ, входящих в состав лекарственных форм, содержащих маннитол.

11.1. Массовую концентрацию маннитола в воздухе рабочей зоны, C, мг/м³, вычисляют по формуле:

а - содержание вещества в анализируемом объеме пробы, найденное по градуировочной характеристике, мкг;

B - общий объем пробы, см³;

б - анализируемый объем пробы, см³;

V₂₀ - объем воздуха, отобранный для анализа (дм³) и приведенный к стандартным условиям (см. прилож. 1).

За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, если выполняется условие приемлемости:

C₁, C₂ - результаты параллельных определений массовой концентрации маннитола в воздухе рабочей зоны, мг/м³;

r - значение предела повторяемости, % (табл. 1).

Если условие (3) не выполняется, выясняют причины превышения предела повторяемости, устраняют их и повторяют выполнение измерений в соответствии с требованиями методики измерений.

12.1. Результат количественного химического анализа представляют в виде:

- среднее арифметическое значение результатов n определений, признанных приемлемыми, мг/м³;

- границы относительной погрешности измерений, % (табл. 1).

Если полученный результат анализа ниже нижней (выше верхней) границы диапазона измерений, то производят следующую запись в журнале: "массовая концентрация маннитола менее 5,0 мг/м³ (более 20,0 мг/м³)".

13.1. Проверку приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости проводят:

а) при возникновении спорных ситуаций между двумя лабораториями;

б) при проверке совместимости результатов измерений, полученных при сравнительных испытаниях (при проведении аккредитации лабораторий и инспекционного контроля).

Для проведения проверки приемлемости результатов измерений в условиях воспроизводимости каждая лаборатория использует пробы, оставленные на хранение.

Приемлемость результатов измерений, полученных в двух лабораториях, оценивают сравнением разности этих результатов с критической разностью CD_0,95 по формуле:

C_ср1, C_ср2 - средние значения массовой концентрации маннитола, полученные в первой и второй лабораториях, мг/м³;

CD_0,95 - значение критической разности, % (табл. 1).

Если критическая разность не превышена, то приемлемы оба результата измерений, проводимых двумя лабораториями, и в качестве окончательного результата используют их среднее арифметическое значение. Если критическая разность превышена, то выполняют процедуры, изложенные в п. 5.3.3 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

При разногласиях руководствуются п. 5.3.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

13.2. Контроль качества результатов измерений в лаборатории при реализации методики осуществляют по ГОСТ Р ИСО 5725-6, используя контроль стабильности среднеквадратического (стандартного) отклонения повторяемости по п. 6.2.2 ГОСТ Р ИСО 5725-6, ГОСТ Р ИСО 5725-6 и показатель правильности по п. 6.2.4 ГОСТ Р ИСО 5725-6.

Рекомендуется устанавливать контролируемый период так, чтобы количество результатов контрольных измерений было от 20 до 30.

При неудовлетворительных результатах контроля, например, при превышении предела действия или регулярном превышении предела предупреждения, выясняют причины этих отклонений, в том числе проводят смену реактивов, проверяют работу оператора.

Приведение объема воздуха к стандартным условиям при температуре 293 К (20 °C) и атмосферном давление 101,33 кПа (760 мм рт. ст.):

V_t - объем воздуха, отобранный для анализа, дм³;

P - барометрическое давление, кПа (101,33 кПа = 760 мм рт. ст.);

t - температура воздуха в месте отбора пробы, °C.

Для удобства расчета V₂₀ следует пользоваться таблицей коэффициентов (прилож. 2 к настоящим методическим указаниям). Для приведения воздуха к стандартным условиям надо умножить V_t на соответствующий коэффициент.