Разработано: Мурашко С.В. ВНИИГИНТОКС г. Киев.

1. Вводная часть.

Ажил, 100% концентрат эмульсии.

ф. "Сиба", Швейцария.

Пропаквизафоп.

2-изопропилиденамино-оксиэтил(R)-2-[4-(6-хлорхиноксамин-2-окси) фенокси] пропионат (ИЮПАК).

C₂₂H₂₂ClN₃O₅

М.м. 443,89

Кристаллическое вещество, Tпл. 62,5 °C. Растворимость в воде - 1,0·10^-3 г/л (1,9 ppm). Растворимость в органических растворителях:

10 - 50 г/л - гептан, технический этиловый спирт, изопропанол;

> 100 г/л - хлороформ, метанол, диметилсульфоксид, диоксан;

> 250 г/л - толуол, ацетон, ацетонитрил, ксилол, циклогексанон.

Давление паров: 1,2·10^-7 Pa (25 °C) или 9,00·10^-10 мм рт. ст.

Ажил - гербицид, эффективный против широкого спектра злаковых сорняков в посевах сахарной свеклы, льна, хлопчатника при норме расхода 1,5 - 2,0 л/га.

Пропаквизафоп относится к малоопасным препаратам. Острая оральная ЛД₅₀ для крыс 2800 мг/кг, дермальная 2000 мг/кг. Наблюдается умеренное раздражение глаз и кожи у кроликов. Токсичен для рыб. Отрицательного действия для птиц и других организмов не было обнаружено.

2. Методика определения.

2.1.1. Принцип метода.

Метод основан на извлечении пропаквизафопа из исследуемого объекта ацетоном и хроматографическом (ТСХ) разделении в тонком слое пластинок "Силуфол" в подвижной фазе гексан:этилацетат:уксусная кислота и проявлении реагентом на основе бромфенолового синего.

Газохроматографический метод (ГЖХ) определения пропаквизафопа основан на извлечении его метаболита после гидролиза экстракта в кислой среде органическим растворителем и последующим определении с детектором постоянной скорости рекомбинации в виде ацильного производного.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода.

2.2. Реактивы и растворы.

Ацетон, осч., ТУ 6-09-3513-86.

Гексан, ТУ 6-09-3375-78.

Диэтиловый эфир (медицинский).

Этилацетат, чда., ГОСТ 22300-76.

Уксусная кислота, ГОСТ 61-75.

0,1 N HCl (фиксанал).

1,0 N HCl (фиксанал).

1,0 N NaOH (фиксанал).

Хлороформ.

Ацетонитрил, ТУ 6-09-3634-87.

Сульфат натрия безводный, ч., ГОСТ 4166-76.

Ажил (производство фирмы Сиба-Гейги, 99,9%).

Окись алюминия II ст. активности.

Силикагель марки КСК.

Уголь активированный марки OV-"A".

Бензол, хч., ГОСТ 5955-78.

Пентафторбензилбромид, ч., 1% раствор в ацетоне (реактив по заказу синтезирует институт органической химии СО АН СССР: 630090, г. Новосибирск, проспект Лаврентьева, д. 9).

Углекислый калий, хч., ГОСТ 4221-76, 30%-ный водный раствор, промытый бензолом.

Азот в баллоне, особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Неподвижная фаза - 5% XE-60 на Хроматоне N-AW-DMCS.

2.3. Приборы и посуда.

Ротационный испаритель типа ИР-1М, ТУ 25-11-917-76.

Колбы грушевидные (круглодонные) емкостью 50, 250, 100, 50 мл, ОКШ 500-29150-14, ГОСТ 10384-72.

Колбы мерные на шлифах, вместимостью 50, 100 мл, ГОСТ 1770-74.

Пробирки мерные на шлифах, вместимостью 5 и 10 мл, ГОСТ 1770-74.

Аппарат для встряхивания, ТУ 25-11-917-79.

Колба Бунзена, ГОСТ 6514-63.

Воронка Бюхнера, ГОСТ 6574-63.

Делительная воронка вместимостью 500 мл.

Холодильник Либиха.

Баня водяная.

Колбы конические, емкостью 500 мл, ГОСТ 1770-74.

Микрошприц на 10 мкл, МШ-10, TYSE-2833.024.

Секундомер СД Спр.1.2000, ГОСТ 5072-79.

Газовый хроматограф серии "Цвет" с ДПР.

Колонки стеклянные длиной 2 м и внутренним диаметром 3,5 мм.

Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.

Пластинки хроматографические "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).

2.4. Отбор, хранение и подготовка проб.

Отбор, хранение и доставка проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденных заместителем Главного государственного санитарного врача СССР N 2051-79 от 21.08.79 г.

2.5. Подготовка к определению.

2.5.1. Приготовление стандартных растворов.

Основной стандартный раствор (ОСР) ажила с концентрацией 100 мкг/мл готовят взятием навески 10 мг (0,0100 г) и растворением в ацетоне в мерной колбе емкостью 100 мл. Хранить в холодильнике в течение 3-х месяцев. Рабочие стандартные растворы с содержанием 10 мкг/мл и 1,0 мкг/мл готовят соответствующим разбавлением ОСР ацетоном. Хранить в холодильнике в течение 2-х месяцев.

2.5.2. Приготовление проявляющего реактива.

1) 0,05%-ный раствор бромфенолового синего в ацетоне (10 мл) разбавляют до 100 мл 1%-м водно-ацетоновым (1:3) раствором азотнокислого серебра; 2) 5% раствор уксусной кислоты.

2.5.3. Подвижная фаза для ТСХ.

Гексан:этилацетат:уксусная кислота = 33:16,5:0,5

2.6. Описание определения.

2.6.1. Экстракция, очистка экстрактов.

2.6.1.1. Вода. К 200 мл H₂O прибавляют 20 г хлористого натрия и экстрагируют 50 мл хлороформа в течение 1 часа на Шуттель-аппарате. Отделяют органический слой. Экстракцию повторяют. Объединенные экстракты сушат безводным сульфатом натрия и упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл 0,1 N HCl, колбу закрывают пробкой и проводят гидролиз при 100 °C в течение 40 минут. Охлаждают и водный слой подщелачивают 1,0 N NaOH до pH 9 - 10.

Экстрагируют 2 x 10 мл гексана, экстракт выбрасывают. К водной фазе прибавляют 1,0 N HCl до pH 1 - 2 и экстрагируют 3 x 10 мл смесью гексан:эфир = 4:1. Экстракт упаривают досуха. Далее проводят бензилирование.

2.6.1.2. Почва. 25,0 г анализируемой пробы помещают в плоскодонную колбу, емкостью 500 мл, заливают 80 мл ацетона. Смесь перемешивают на аппарате для встряхивания в течение 2-х часов, фильтруют на воронке Бюхнера с фильтром "синяя лента". Остаток на фильтре тщательно промывают 50 мл ацетона. Объединенный фильтрат упаривают досуха в вакууме водоструйного насоса при температуре водяной бани 40 °C и проводят очистку на колонке (l = 50 см, d = 0,5 см), заполненную в следующей последовательности: 10 г окиси алюминия II ст. активности, 5 г силикагеля марки КСК и 2 г безводного сульфата натрия. Остаток после упаривания растворяют в 2 мл гексана и переносят на колонку.

Затем проводят элюирование 70 мл смеси гексан:этилацетат (9:1), эту фракцию выбрасывают. Элюируют вещество 200 мл гексан:этилацетат (7:3), элюат упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл 0,1 N HCl, закрывают пробкой и проводят гидролиз при 100 °C в течение 40 минут. Охлаждают и экстрагируют 3 x 10 мл смесью гексан:эфир (4:1). Объединенные экстракты упаривают досуха и проводят бензилирование.

2.6.1.3. Растительный материал. 10 г измельченной зелени помещают в плоскодонную колбу емкостью 300 мл, заливают 100 мл ацетона, экстрагируют в течение 1 часа. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера с фильтром "синяя лента". Экстракцию повторяют. Остаток на фильтре тщательно промывают 50 мл ацетона. Объединенный экстракт упаривают досуха. Остаток растворяют в 2 мл гексана и проводят очистку на колонке (l = 50 см, d = 0,5 см), заполненную 10 г окиси алюминия II ст. активности, 5 г силикагеля марки КСК, 2 г безводного сернокислого натрия.

Элюируют 70 мл смеси гексан:этилацетат (9:1), эту фракцию выбрасывают. Затем проводят элюирование 200 мл смеси гексан:этилацетат 7:3, его упаривают досуха в вакууме водоструйного насоса. К остатку прибавляют 50 мл 0,1 N HCl, колбу закрывают пробкой и проводят гидролиз при температуре водяной бани 100 °C в течение 40 мин. Охлаждают и экстрагируют 3 x 10 мл смесью гексан:эфир 4:1. Экстракт упаривают досуха и проводят бензилирование.

2.6.1.4. Хлопковые семена. 25 г хлопковых семян, освобожденных от волокон и измельченных, заливают 50 мл ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 2-х часов. Экстракт фильтруют на воронке Бюхнера и упаривают до 2 - 3 мл. К остатку прибавляют 100 мл 10%-ого водного раствора NaCl и экстрагируют 3 x 50 мл гексаном. Затем проводят реэкстракцию объединенных гексановых экстрактов 3 x 40 мл ацетонитрилом. Ацетонитрильный экстракт упаривают досуха и проводят очистку на колонке, размером 50 см x 0,4 см, заполненную в следующей последовательности: 10 г Al₂O₃ II ст. активности, 5 г силикагеля марки КСК, 2 г безводного сульфата натрия.

Остаток растворяют в 2 мл гексана и проводят хроматографию на колонке: элюируют 70 мл смеси гексан:этилацетат (9:1) и эту фракцию отбрасывают, собирают фракцию 200 мл гексан:этилацетат (7:3), ее упаривают досуха. К сухому остатку прибавляют 50 мл 0,1 N HCl, закрывают пробкой и проводят гидролиз при 100 °C в течение 40 минут. Охлаждают, прибавляют 1,0 N NaOH до pH 9 - 10 и экстрагируют 2 x 10 мл гексаном, органический слой выбрасывают, к водному слою прибавляют 1,0 N HCl до pH 1 - 2 и экстрагируют 3 x 10 мл смесью гексан:эфир (4:1). Объединенные экстракты упаривают в вакууме водоструйного насоса при 40 °C досуха и проводят бензилирование.

2.6.1.5. Волокно хлопчатника. 10 г волокна хлопчатника измельчают, заливают 100 мл ацетона и экстрагируют на аппарате для встряхивания в течение 2-х часов. Дальнейшее определение проводят аналогично разделу 2.6.1.4.

2.6.2. Получение производного.

К сухому остатку прибавляют 10 мл ацетона, 0,2 мл 1% ацетонового раствора пентафторбензилбромида, 30 мкл 30%-ного водного раствора углекислого калия и 3 г безводного сульфата натрия. Бензилирование проводят в круглодонной колбе с обратным холодильником при температуре водяной бани 70 - 75 °C в течение 40 минут. Охлаждают и хроматографируют.

2.6.3. Условия хроматографирования.

2.6.3.1. ГЖХ.

Газовый хроматограф серии "Цвет" с ДПР.

Колонка хроматографическая стеклянная длиной 2,0 м и внутренним диаметром 3,5 мм.

Неподвижная фаза 5% XE-30 на Хроматоне N-AW-DMCS.

Температура колонки - 190 °C.

Температура испарителя - 230 °C.

Температура детектора - 260 °C.

Газ-носитель - азот с расходом 65 - 70 мл/мин.

Вводимый объем - 3 мкл.

Шкала множителя - 20·10¹².

Скорость диаграммной ленты - 240 мм/час.

Время удерживания - 7,14 мин.

2.6.3.2. ТСХ.

Пробу, сконцентрированную до 0,5 мл, количественно переносят на пластинку "Силуфол". Параллельно наносят серию стандартных растворов с содержанием 0,3, 0,5 и 1,0 мкг действующего вещества ажила. Хроматографируют в системе растворителей гексан:этилацетат:уксусная кислота = 66:33:1. После высушивания пластинку обрабатывают 0,05% раствором бромфенолового синего и обесцвечивают фон обработкой пластинки 5%-ным раствором уксусной кислоты. Ажил обнаруживается в виде синих пятен на желтом фоне. Rf = 0,50 +/- 0,02. Предел обнаружения - 0,3 мкг.

Определение содержания ажила в пробе проводят путем сравнения интенсивности окраски и размера пятен проб с пятнами стандартных растворов. Пропорциональная зависимость площади пятна от концентрации наблюдается в пределах 0,3 - 2 мкг. При больших концентрациях анализируют аликвоту экстракта.

2.6.4. Обработка результатов анализа.

2.6.4.1. ГЖХ.

Количественную оценку проводят методом абсолютной калибровки по сравнению со стандартом ажила.

Расчет результатов анализа проводят по формуле:

X - содержание пропаквизафопа в анализируемой пробе, мг/кг;

C - концентрация стандартного раствора для ГЖХ, вводимого в хроматограф, мкл/мл;

H₁ - высота пика стандартного раствора, мм;

H₂ - высота пика пробы, мм;

V₁ - объем бензилированного экстракта пробы, мл;

V₂ - объем стандартного бензилированного раствора, введенного в хроматограф, мкл;

V₃ - объем бензилированной пробы, введенный в хроматограф, мкл;

P - навеска анализируемой пробы, г (мл).

2.6.4.2. ТСХ.

Количество пропаквизафопа (X, мг/кг, л) в анализируемой навеске пробы вычисляют по формуле:

У - количество пестицида в хроматографируемом объеме пробы, мкг;

V - общий объем пробы, мл;

V₁ - объем пробы, взятый для хроматографирования, мл;

P - навеска пробы, г (мл).

3. Требования безопасности.

Соблюдать все требования техники безопасности, обычно рекомендуемые для работы с органическими растворителями и токсическими веществами.