Редакционная коллегия:

Калинин В.А. - к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. - к.б.н.

Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. - зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. - к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Хлорсульфоксим-N-(O-хлорфенилсульфонил)-N'-(4-диметиламино-6-изопропилидениминоокси-1,3,5-триазин-2-ил) - мочевина является действующим веществом гербицидного препарата "Круг", НИИХСЗР.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: .

Молекулярная масса: 427,5.

Белое кристаллическое вещество без запаха, Т. пл. 198 °C. Препарат плохо растворим в воде, растворяется в диметилсульфоксиде.

Применяется в качестве гербицида и регулятора роста растений на кукурузе и льне при нормах расхода 20 - 50 г/га. ПДК в воде 0,005 мг/л, МДУ для кукурузы 0,005 мг/кг.

2.1.1. Принцип метода

Методика основана на определении хлорсульфоксима в почве, в зерне зерновых культур способом тонкослойной и газожидкостной хроматографии после экстракции из проб и очистки экстракта.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Минимально-детектируемое количество "Круга" 0,2 - 0,5 мкг.

Диапазон определяемых концентраций:

Почва (мг/кг): ГЖХ 0,004 - 0,04; ТСХ 0,01 - 0,1.

Зерно зерновых культур (мг/кг): ГЖХ 0,005 - 0,05; ТСХ 0,01 - 0,1.

Среднее значение определения 90,0 - 95,0%.

Суммарная погрешность определения - +/- 16 - 20%.

Хлорсульфоксим (НИИХСЗР), 96,43%-ный препарат.

Натрия сульфат, х.ч., ГОСТ 4328-77.

Азот газообразный, ГОСТ 9283-74, в баллоне с редуктором.

Ацетон, ч., ГОСТ 2603-79.

Хлороформ, ч., ГОСТ 20015-74.

Кислота хлористоводородная, х.ч., ГОСТ 3118-78, 1 Н водный раствор (1:1).

Этиловый спирт, 96%-ный, ТУ 6-09-19100-77.

Хромосорб-750, 3% OV-17.

Эфирный раствор диазометана.

О-толидин, ТУ 6-09-2232-75.

Азотнокислое серебро, ч.д.а., ГОСТ 1277-81.

Аммиак водный, ч.д.а., ГОСТ 3760-79.

Метанол, х.ч., ТУ 6-09-1709-77.

Калия гидрат окиси, ГОСТ 9285-78.

Гидразин-гидрат, х.ч., ГОСТ 5832-65.

Бензол, х.ч., ГОСТ 5955-81.

Гексан, х.ч., ТУ 6-09-3375-78.

Кислота уксусная, х.ч., ГОСТ 18290-72, 5%-ный водный раствор.

Кислота лимонная, х.ч., ГОСТ 3652-74, 2%-ный водный раствор.

Бромфеноловый синий, ч.д.а., ТУ 6-09-3719-83.

Кальций хлористый, х.ч., ГОСТ 4460-77.

Вода дистиллированная, ГОСТ 7602-72.

Пластинки "Силуфол" (Kavalier, ЧССР).

Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.

Вата гигроскопическая.

Лампа ртутно-кварцевая IIРК-4, ТУ 16-535-280-74.

Весы аналитические, ВЛА-200 М.

Испаритель ротационный ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

Баня водяная, ТУ 64-1-2850-76.

Вакуумный водоструйный насос, ГОСТ 10396-75.

Колбы грушевидные, вместимостью 50 - 100 мл (для отгонки растворителя), ГОСТ 10394-72.

Колбы мерные, цилиндры, мензурки, пробирки, ГОСТ 1770-74.

Колбы конические плоскодонные, ГОСТ 25336-82.

Воронки химические, диаметр 5 - 6 см, ГОСТ 8613-75.

Воронки делительные, вместимостью 250 мл, ГОСТ 8613-75.

Пипетки на 1, 5, 10 мл, ГОСТ 20292-74.

Микропипетки на 0,1; 0,2 мл, ГОСТ 20292-74.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-74.

Скальпель.

Камера для хроматографирования, ГОСТ 10565-75.

Камера для опрыскивания, ТУ 25-11-430-70.

Колба КГУ-2-1-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.

Колба ОГ-2-100-14/23 ТС, ГОСТ 25336-82.

Холодильник ХШ-1-200-14/23 ХС, ГОСТ 25336-82.

Воронка ВК-50 ХС, ГОСТ 25336-82 (с байпасом).

Трубка ТХ 45° - 14/23, ГОСТ 25336-82.

Капилляр 14/23.

Шланг резиновый.

Микрошприц МШ-10.

Стакан полиэтиленовый.

Пипетка П-2-10, ГОСТ 1770-74 Е.

Мельница электрическая лабораторная, ТУ 46-22-236-79.

2.4.1. Отбор и подготовка проб

Отбор проб производят в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.79 г. N 2051-79.

2.4.2. Приготовление стандартного и рабочих растворов хлорсульфоксима

Стандартный раствор хлорсульфоксима с концентрацией 100 мкг/мл готовят растворением навески препарата 10,3 г в ацетоне в мерной колбе на 100 мл. Раствор хранят в холодильнике. Годен к употреблению в течение 30 дней.

Рабочие растворы препарата с концентрацией 2,5; 5,0; 10,0; 20,0 мкг/мл готовят в градуированных пробирках, вместимостью 10 мл соответствующим разбавлением ацетоном стандартного раствора. Хранят рабочие растворы в холодильнике. Годны к употреблению в течение 3 - 5 дней.

2.4.3. Проявляющий реагент

Готовят два раствора: 1-й - 0,5% водно-ацетоновый (1:3) раствор азотнокислого серебра, 2-й - 10 мл 0,05%-ного раствора бромфенолового синего (БФС) в ацетоне. Раствор 2 разбавляют раствором 1 до объема 100 мл. Хранят в темном прохладном месте. Годен к употреблению в течение 3 - 5 дней.

После обработки хроматограмм бромфеноловым реагентом осветляют фон обработкой пластин 2%-ным водным раствором лимонной кислоты или 5%-ным водным раствором уксусной кислоты. В качестве проявляющего реагента можно использовать раствор о-толидина в ацетоне.

После опрыскивания пластинки следует облучать УФ-светом.

2.4.4. Получение диазометана

В круглодонную двугорлую колбу вместимостью 100 мл, снабженную капельной воронкой с байпасом и обратным холодильником, помещают 12 г (0,2 моля) гидрата окиси калия, 6,1 г (0,12 моля) гидразин-гидрата и 6 мл (0,17 моля) метанола. Затем, охлаждая колбу до +5° смесью воды со льдом, начинают медленно прибавлять из капельной воронки 10 мл или 14,9 г (0,12 моля) хлороформа, постепенно увеличивая скорость подачи. Реакционная масса приобретает желтую окраску.

Выделяющийся в ходе реакции диазометан через обратный холодильник, соединенный с капилляром резиновым шлангом, поступает в двугорлую грушевидную колбу вместимостью 100 мл и растворяется в 50 мл осушенного диэтилового эфира. Предварительно эту колбу, заполненную диэтиловым эфиром, укрепляют в полиэтиленовом стакане с водой и помещают в морозильную камеру холодильника (T = -12 - 18 °C на 6 - 8 часов).

По окончании прибавления хлороформа реакционную колбу нагревают до +40 °C на водяной бане для полного удаления диазометана из реакционной массы. Когда реакционная масса и поверхность холодильника обесцветятся, реакцию считают завершенной. Выход диазометана 25% от теоретического.

2.4.5. Подготовка пластин "Силуфол"

Пластинку "Силуфол" помещают в хроматографическую камеру, содержащую смесь ацетон - 25%-ный аммиак в соотношении 7:3 (по объему). Глубина погружения пластинки в растворитель составляет 0,5 см. После подъема фронта растворителя до верхнего края пластинки ее вынимают из камеры и выдерживают на воздухе до испарения растворителей. После этого пластинка готова к употреблению. Хранят подготовленные пластинки в эксикаторе.

2.5.1. Экстракция и очистка

Зерно (30 - 50 г) предварительно измельчают на электрической мельнице. Почву (50 - 100 г) просеивают через сито. Навеску помещают в коническую колбу с пришлифованной пробкой, прибавляют 50 - 100 мл ацетона и настаивают в течение 1 часа. Экстракт фильтруют через бумажный фильтр. Остаток зерна (почвы) в колбе встряхивают дважды с 50 мл растворителя в течение 15 - 20 мин. В объединенные экстракты приливают 100 мл 1 н HCl, содержимое перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр в делительную воронку и препарат экстрагируют трижды хлороформом по 20 - 25 мл. Хлороформный экстракт пропускают через слой прокаленного безводного сульфата натрия и упаривают досуха.

2.5.2. Хроматографирование

2.5.2.1. Метод тонкослойной хроматографии

Сухой остаток в колбе растворяют в 1 мл ацетона, закрывают колбу герметично пробкой, перемешивают содержимое и 0,2 мл полученного раствора наносят микропипеткой на подготовленную пластинку "Силуфол". Рядом с пробой наносят по 0,2 мл каждого рабочего раствора хлорсульфоксима, что соответствует содержанию в пятне 0,5; 1,0; 2,0; 4,0 мкг препарата. Пластинку помещают в хроматографическую камеру, куда за 10 - 15 мин до хроматографирования наливают подвижный растворитель: бензол-ацетон (4:1) или гексан-ацетон (1:1) в таком количестве, чтобы глубина погружения пластинки в растворитель составила 0,5 см. После подъема фронта растворителя от линии старта на высоту 10 см хроматографирование прекращают. Пластинку выдерживают в вытяжном шкафу до испарения растворителя, обрабатывают бромфеноловым реагентом, а затем раствором лимонной (или уксусной) кислоты. О наличии хлорсульфоксима в пробе свидетельствует проявление на хроматограмме серо-синего пятна препарата.

В альтернативном случае обрабатывают пластинку раствором о-толидина. Сразу же после опрыскивания ее облучают УФ-светом. О наличии препарата в пробе свидетельствует проявление на хроматограмме синего пятна. Величина при использований системы бензол-ацетон (4:1), при использовании системы гексан-ацетон (1:1) этот показатель равен 0,53.

2.5.2.2. Метод прямого газохроматографического определения

3 - 5 мкл ацетонового экстракта вводят в испаритель газового хроматографа "Цвет-106" с детектором постоянной скорости рекомбинации (ДПР). Проводят хроматографирование при следующих условиях:

Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм.

Твердый носитель - Хромосорб-750.

Жидкая фаза - 5% OV-17.

Газ-носитель - азот особой чистоты.

Скорость движения диаграммной ленты - 240 мм/час.

Скорость потока азота через колонку - 60 мл/мин.

Скорость потока азота через детектор - 150 мл/мин.

Рабочая шкала электрометра - .

Время выхода аналитического пика - 7 мин. 30 сек.

2.5.2.3. Метод газохроматографического определения с использованием диазометана

К сухому остатку в грушевидной колбе приливают 5 мл эфирного раствора диазометана и реакционную массу выдерживают 30 минут. Затем эфир отгоняют на ротационном испарителе досуха, остаток растворяют в 1 мл ацетона и 1 - 5 мкл раствора вводят в испаритель газового хроматографа. Проводят хроматографирование при следующих условиях:

Колонка стеклянная - 1000 x 3 мм.

Твердый носитель - Хромосорб-750.

Жидкая фаза - 5% OV-17.

Газ-носитель - азот особой чистоты.

Скорость движения диаграммной ленты - 240 мм/ч.

Скорость потока азота через колонку - 60 мм/мин.

Скорость потока азота через детектор - 150 мл/мин.

Рабочая шкала электрометра - .

Время удерживания метильного производного хлорсульфоксима 3 мин 45 сек.

2.6.1. Газохроматографический метод

Для количественного анализа измеряют площадь пиков проб и стандартных растворов. Содержание хлорсульфоксима в зерне пшеницы рассчитывают по формуле:

где X - содержание препарата в зерне, мг/кг;

G - содержание препарата в стандартном растворе, мкг;

- площадь пика анализируемой пробы, мм2;

V - общий объем пробы, мл;

- площадь пика стандартного раствора, мм2;

- объем хроматографируемой пробы, мкл;

P - навеска пробы, г;

- объем стандартного раствора, введенного в хроматограф, мкл.

2.6.2. Тонкослойная хроматография

Количественная оценка проводится путем сравнения площадей и интенсивности окраски пятен пробы и рабочих растворов.

Содержание хлорсульфоксима в анализируемой пробе рассчитывают по следующей формуле:

X - содержание препарата в исследуемой пробе, мг/кг;

A - количество препарата, найденное путем сравнения со стандартами, мкг;

p - навеска исследуемой пробы, г;

V - конечный экстракт пробы, мл.

Соблюдать все необходимые требования безопасности при работе в химических лабораториях. Работу с ядовитыми и взрывчатыми веществами следует проводить в вытяжном шкафу, строго соблюдая правила производственной санитарии и личной гигиены.

Разработчики: Н.И. Рева, А.М. Шмигидина, Н.П. Писаненко, В.И. Боброва (УкрНИИГИНТОКС г. Киев).