1. Разработан Всероссийским научно-исследовательским институтом жиров и МТК 238 "Масла растительные и продукты их переработки".

Внесен Госстандартом России.

2. Принят Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (Протокол от 12 ноября 1998 г. N 14).

За принятие проголосовали:

3. Постановлением Государственного комитета Российской Федерации по стандартизации и метрологии от 29 апреля 1999 г. N 156 введен в действие непосредственно в качестве государственного стандарта Российской Федерации с 1 января 2000 г.

4. Введен впервые.

5. Переиздание. Январь 2002 г.

Настоящий стандарт распространяется на растительные масла и устанавливает метод обнаружения фальсификации растительных масел концентратом витамина D.

Метод основан на измерении оптической плотности окрашенного продукта колориметрической реакции витамина D с треххлористой сурьмой в присутствии хлористого ацетила.

Стандарт предназначен для использования в качестве экспресс-методики при обнаружении подмены растительного масла.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

--------------------------------

<*> С 1 июля 2002 г. вводится в действие ГОСТ 24104-2001.

Отбор проб растительных масел - по ГОСТ 5471.

Весы лабораторные общего назначения - по ГОСТ 24104, с наибольшим пределом взвешивания до 200 г, не ниже 2-го класса точности.

Спектрофотометр или фотоколориметр с диапазоном измерения, позволяющим проводить исследования при длине волны 480 - 530 нм, кюветы с рабочей длиной 10 мм.

Баня водяная.

Электроплитка по ГОСТ 14919, закрытого типа.

Колба К-1-250-29/32 по ГОСТ 25336.

Колба мерная 2-50(100)-2-10/19 по ГОСТ 1770.

Пробирки П-4-10-14/23 ХС по ГОСТ 25336.

Цилиндры 1-250 или 3-250 по ГОСТ 1770.

Воронка В-25-38 ХС или В-36-50 ХС по ГОСТ 25336.

Колба Кн-2-250-34 ТСХ по ГОСТ 25336.

Воронка ДВ-1-500 по ГОСТ 25336.

Пипетка 2-1-1-1 по ГОСТ 29227.

Испаритель ротационный ИР-1М или установка, состоящая из колбы К-1-100-29/32 ТС по ГОСТ 25336, холодильника ХЛТ-1-400/600/-14/23 по ГОСТ 25336, алонжа АКП-14/23 ТС по ГОСТ 25336, перехода П-10-29/32-14/23 ТС по ГОСТ 25336, колбы К-1-250-14/23 ТС по ГОСТ 25336, насоса водоструйного по ГОСТ 25336.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498, позволяющий измерять температуру в интервале (0 - 100) °C и ценой деления 1 °C.

Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363, ч., ч.д.а.

Кальций хлористый обезвоженный [1].

Калий марганцовокислый по ГОСТ 20490, ч., ч.д.а.

Натрий сернокислый по ГОСТ 4166, ч., ч.д.а.

Сурьма треххлористая, ч., ч.д.а., по нормативному документу.

Ангидрид уксусный по ГОСТ 5815.

Эфир этиловый очищенный [2] или эфир медицинский [3].

Ацетил хлористый по ГОСТ 5829, ч.д.а.

Эргокальциферол (витамин ) [4].

Фенолфталеин [5], спиртовый раствор с массовой долей индикатора 1%, приготовленный по ГОСТ 4919.1.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Хлороформ по ГОСТ 20015.

Допускается применение другой аппаратуры или реактивов, по качеству и метрологическим характеристикам не уступающих указанным выше.

5.1. Подготовка растворов и реактивов

5.1.1. Приготовление безводного сернокислого натрия

Натрий сернокислый нагревают в фарфоровой чашке при температуре (100 +/- 5) °C до тех пор, пока не образуется рыхлый порошок.

5.1.2. Очистка диэтилового эфира

В склянку с корковой пробкой взвешивают (5,0 +/- 1,0) г марганцовокислого калия и (10,0 +/- 1,0) г гидроокиси калия, заливают 1 дм3 диэтилового эфира и оставляют на сутки в темном месте. Затем эфир перегоняют при температуре 33 - 35 °C.

5.1.3. Приготовление сухого хлороформа

Хлороформ сушат над хлористым кальцием в течение суток, затем перегоняют при температуре 60 - 61 °C и хранят в склянке из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике не более 1 мес.

5.1.4. Приготовление спиртового раствора гидроокиси калия концентрации c (KOH) = 2 моль/дм3

(120 +/- 5) г гидроокиси калия растворяют в 1 дм3 спирта. Полученный раствор хранят в закрытом сосуде в холодильнике. Срок годности спиртового раствора гидроокиси калия - 1 мес.

5.1.5. Приготовление раствора треххлористой сурьмы (реагент Карр-Прайса)

В конической колбе взвешивают (20,0 +/- 0,5) г треххлористой сурьмы. Результат взвешивания записывают до второго десятичного знака. Добавляют 100 см3 хлороформа и растворяют, нагревая на водяной бане (температурой не выше 50 °C), периодически встряхивая. Раствор охлаждают, добавляют 2 - 3 см3 уксусного ангидрида, колбу плотно закрывают и оставляют на 16 - 24 ч при комнатной температуре для отстаивания. Затем верхнюю прозрачную часть раствора осторожно сливают через бумажный фильтр в темную склянку с притертой пробкой. Раствор выдерживают сутки при комнатной температуре. Раствор треххлористой сурьмы хранят в холодильнике не более 1 мес.

5.1.6. Приготовление стандартного раствора витамина D

250 мг эргокальциферола растворяют в 10 см3 хлороформа. Раствор содержит 1000 м. е. витамина D в 1 см3 хлороформа (1 м. е. витамина D соответствует 0,025 мкг эргокальциферола).

Срок годности стандартного раствора витамина D - 1 сут.

5.2. Построение градуировочного графика

Интенсивность окраски хлороформного раствора витамина D после проведения колориметрической реакции с треххлористой сурьмой измеряют в фотоколориметре или спектрофотометре при длине волны 480 - 530 нм.

Для построения градуировочного графика помещают в кювету рабочей длиной 10 мм 1,0; 0,75; 0,50 и 0,25 см3 хлороформного раствора витамина D, доводят хлороформом до объема 1 см3, затем добавляют 6 см3 раствора треххлористой сурьмы и три капли хлористого ацетила. Отношение объемов испытуемого раствора к раствору хлористой сурьмы должно составлять 1:6.

Измерение оптической плотности каждого раствора проводят через 4 мин после добавления последнего реактива. По полученным значениям строят график зависимости оптической плотности от концентрации витамина D. График представляет собой прямую линию.

Измерение оптической плотности продукта колориметрической реакции следует проводить быстро в течение 5 - 6 с.

Примечание. Градуировочный график строится для каждого спектрофотометра или фотоэлектроколориметра и проверяется при смене партий реактивов и приборов путем измерения оптической плотности стандартных растворов двух разных концентраций.

(0,5 +/- 0,05) г растительного масла взвешивают в колбе. Результат записывают в граммах до четвертого десятичного знака. Добавляют 50 см3 спиртового раствора гидроокиси калия концентрации c (KOH) = 2 моль/дм3.

Колбу соединяют с обратным воздушным холодильником и смесь кипятят на водяной бане в течение 30 мин. После этого содержимое колбы охлаждают и количественно переносят в делительную воронку, дважды ополаскивая колбу порциями дистиллированной воды по 50 см3. Неомыляемые вещества экстрагируют трижды порциями этилового эфира по 50 см3.

Объединенный эфирный экстракт переносят в делительную воронку и промывают дистиллированной водой порциями 50 - 100 см3 до нейтральной реакции по фенолфталеину.

Промытую эфирную вытяжку сливают в сухую колбу, добавляют (10 +/- 1) г сернокислого натрия и оставляют на 30 мин в темном месте, периодически взбалтывая. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр. Сернокислый натрий в колбе и фильтр промывают этиловым эфиром. Эфир собирают в колбе и отгоняют в вакууме при температуре не выше 30 °C. Остаток в колбе, представляющий неомыляемые вещества, после отгонки растворителя должен быть сухим. Если остаток влажный, растворяют его в 20 см3 этилового эфира, добавляют (2,0 +/- 0,5) г сернокислого натрия, оставляют на 30 мин в темном месте. Затем содержимое колбы фильтруют через бумажный фильтр, тщательно промывая фильтр и сернокислый натрий этиловым эфиром. Эфир отгоняют в вакууме при температуре не выше 30 °C. Остаток неомыляемых веществ растворяют в хлороформе в мерной колбе вместимостью 50 см3 (раствор 1) и объем раствора доводят до метки хлороформом. Затем к 1 см3 полученного раствора добавляют 9 см3 хлороформа (раствор 2).

Для колориметрического измерения 1 см3 раствора 2 помещают в кювету рабочей длиной 10 мм фотоколориметра или спектрофотометра, добавляют три капли хлористого ацетила и 6 см3 хлороформного раствора треххлористой сурьмы и точно через 4 мин после добавления последнего реактива измеряют оптическую плотность при длине волны 480 - 530 нм.

В качестве контроля используют раствор, состоящий из 1 см3 хлороформа, трех капель хлористого ацетила и 6 см3 раствора треххлористой сурьмы.

Значение оптической плотности 0,06 и ниже свидетельствует об отсутствии витамина D в растительном масле и о пригодности исследуемого растительного масла к непосредственному употреблению в пищу.

Присутствие витамина D в растительном масле характеризует оптическая плотность, значения которой выше 0,06 (фонового значения для растительного масла).

Массовую долю витамина D в растительном масле X, м. е./г, вычисляют по формуле

где c - концентрация витамина D в хлороформном растворе, определенная по градуировочному графику, м. е./см3;

V - объем хлороформного раствора с учетом разведения, см3 (500 см3);

m - навеска масла, г.

Вычисления проводят до первого десятичного знака с последующим округлением результата до целых чисел.

За окончательный результат измерений принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных (последовательных) измерений.

Метрологические характеристики метода при доверительной вероятности 0,95 приведены в таблице 1.

Если расхождение между двумя последовательными измерениями превышает указанное в таблице 1, измерение необходимо повторить.

При обнаружении витамина D свыше 10000 м. е./г исследуемая продукция опасна для употребления в пищу.