1. Разработан Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП).

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей".

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 30 декабря 1997 г. N 442.

3. Методическая часть стандарта полностью соответствует методической части европейского стандарта EN 1141-94 "Плодовые и овощные соки. Определение пролина".

4. Введен впервые.

Настоящий стандарт распространяется на плодовые и овощные соки и устанавливает фотометрический метод определения пролина.

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 4166-76 Натрий сернокислый. Технические условия

ГОСТ 5556-81 Вата медицинская гигроскопическая. Технические условия

ГОСТ 5848-73 Кислота муравьиная. Технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 14919-83 Электроплиты, электроплитки и жарочные электрошкафы бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 22300-76 Бутиловый эфир уксусной кислоты. Технические условия

ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 26313-84 Продукты переработки плодов и овощей. Правила приемки, методы отбора проб

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

ГОСТ 29030-91 Продукты переработки плодов и овощей. Пикнометрический метод определения относительной плотности и содержания растворимых сухих веществ

ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

Метод основан на проведении реакции пролина с нингидрином с образованием цветного комплексного соединения, экстракции его н-бутилацетатом и измерении оптической плотности окрашенного экстракта.

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104 наибольшим пределом взвешивания 20 г 2-го класса точности.

Спектрофотометр диапазоном измерения, позволяющим проводить исследования при длине волны 509 нм, допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента пропускания не более 1%; кюветы стеклянные или кварцевые рабочей длиной 10 мм.

Узкополосный линейчатый фотометр с ртутной лампой и фильтром на 509 нм (фотоколориметр), допускаемой абсолютной погрешностью измерений коэффициента светопропускания 1% (допускается использовать взамен спектрофотометра); кюветы стеклянные или кварцевые рабочей длиной 10 мм.

Секундомер механический или электрический допускаемой погрешностью измерения времени не более 2 с.

Термометр жидкостный стеклянный по ГОСТ 28498 допускаемой погрешностью измерения температуры +/- 2 °C в диапазоне измерений 0 - 100 °C.

Баня водяная [1].

Электроплитка по ГОСТ 14919.

Колбы мерные по ГОСТ 1770 исполнения 2 номинальной вместимостью 250 и 100 см3.

Пипетки по ГОСТ 29227 типа 3 исполнения 1 1-го класса точности номинальной вместимостью 1, 2 и 10 см3.

Пробирки градуированные по ГОСТ 1770 исполнения 2 номинальной вместимостью 20 или 25 см3 с пластмассовыми пробками.

Воронка лабораторная по ГОСТ 25336 типа В диаметром 56 мм и высотой 80 мм.

Фильтры бумажные обеззоленные марки ФОМ по ГОСТ 12026.

Вата медицинская гигроскопическая по ГОСТ 5556.

Пролин ч.д.а. из набора аминокислот N 2 [2].

Монометиловый эфир этиленгликоля [3], х.ч.

Нингидрин 1-водный [4], раствор в монометиловом эфире этиленгликоля массовой концентрацией 30 г/дм3.

Кислота муравьиная по ГОСТ 5848, ч.д.а.

Бутиловый эфир уксусной кислоты по ГОСТ 22300, х.ч. (бутилацетат).

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166, х.ч., прокаленный.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

Допускается использование других средств измерений с метрологическими характеристиками, оборудования и вспомогательных устройств с техническими характеристиками, реактивов и материалов с качественными характеристиками, не уступающими перечисленным выше.

Отбор проб - по ГОСТ 26313.

При исследовании концентрированных соков пробу разводят до заранее заданной относительной плотности (см. Приложение А), которую определяют в соответствии с ГОСТ 29030.

Соки предполагаемой массовой концентрации пролина более 50 мг/дм3 разбавляют водой следующим образом:

- при массовой концентрации пролина от 50 до 500 мг/дм3 включительно к одному объему пробы добавляют девять объемов воды;

- при массовой концентрации пролина свыше 500 до 1000 мг/дм3 включительно к одному объему пробы добавляют 19 объемов воды.

Соки с интенсивной окраской и предполагаемой массовой концентрации пролина менее 50 мг/дм3 разбавляют водой в 2 - 5 раз по объему в зависимости от интенсивности окраски пробы.

При разведении пробы рассчитывают фактор разведения F, определяемый как отношение объема пробы после разведения к исходному объему пробы, взятому для разведения.

6.1. Приготовление основного и рабочих растворов пролина

Навеску пролина массой 25 мг количественно переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3. В колбу вносят небольшое количество воды. Содержимое колбы перемешивают до полного растворения кристаллов пролина, после чего объем в колбе доводят водой до метки, содержимое колбы тщательно перемешивают. Получают основной раствор пролина массовой концентрации 100 мг/дм3.

Рабочие растворы пролина готовят разведением основного раствора. Для этого в мерные колбы вместимостью 100 см3 вносят 5, 10, 25, 40 и 50 см3 основного раствора и доводят объемы в колбах водой до метки. Содержимое колб тщательно перемешивают. Массовая концентрация пролина в полученных рабочих растворах составляет соответственно 5, 10, 25, 40 и 50 мг/дм3.

Срок годности основного и рабочих растворов - 20 сут при хранении в холодильнике.

6.2. Определение градуировочного коэффициента

Готовят пять исследуемых растворов и пять растворов сравнения. В пробирки для приготовления исследуемых растворов вносят по 1 см3 каждого рабочего раствора пролина, 1 см3 раствора муравьиной кислоты и 2 см3 раствора нингидрина. В пробирки для приготовления растворов сравнения вносят по 1 см3 каждого рабочего раствора пролина, 1 см3 раствора муравьиной кислоты и 2 см3 монометилового эфира этиленгликоля. Содержимое всех пробирок тщательно перемешивают после добавления каждого реактива. Пробирки помещают на кипящую водяную баню, при этом уровень воды в бане должен быть выше уровня жидкости в пробирках. Необходимо следить за тем, чтобы вода в бане постоянно кипела. Пробирки с исследуемыми жидкостями выдерживают на водяной бане в течение 15 мин, после чего охлаждают в воде температурой около 20 °C от 5 до 10 мин. В пробирки вносят по 10 см3 бутилацетата, закрывают пробками и интенсивно встряхивают. После разделения слоев из каждой пробирки отбирают пипеткой верхний слой и фильтруют его через воронку с ватным тампоном и нанесенным на него слоем сульфата натрия толщиной от 1 до 2 см. По истечении 15 мин после окончания фильтрации измеряют оптическую плотность фильтрата исследуемого раствора относительно соответствующего раствора сравнения в кюветах рабочей длиной 1 см на спектрофотометре или на фотоколориметре при длине волны 509 нм. По полученным значениям оптической плотности строят градуировочный график, откладывая по оси абсцисс массовую концентрацию пролина в рабочем растворе, мг/дм3, по оси ординат - соответствующее значение оптической плотности. При правильном выполнении всех предшествующих операций градуировочный график представляет собой прямую линию, проходящую через начало координат.

Градуировочный коэффициент рассчитывают следующим образом. В трех различных точках градуировочного графика (например при массовых концентрациях пролина 10, 25 и 40 мг/дм3) определяют соответствующие значения оптической плотности. Для этих точек рассчитывают градуировочные коэффициенты K, мг/дм3 · ед. оптической плотности по формуле

где C - массовая концентрация пролина в рабочем растворе, мг/дм3;

D - оптическая плотность, ед. оптической плотности.

Из полученных значений рассчитывают среднее арифметическое значение, которое принимают за окончательный результат определения градуировочного коэффициента.

Градуировочный коэффициент следует определять при испытании каждой серии образцов.

Для каждой пробы проводят одновременно два параллельных определения. При каждом определении готовят исследуемый раствор и раствор сравнения. В пробирку для приготовления исследуемого раствора вносят 1 см3 пробы, 1 см3 раствора муравьиной кислоты и 2 см3 раствора нингидрина. В пробирку для приготовления раствора сравнения вносят 1 см3 пробы, 1 см3 раствора муравьиной кислоты и 2 см3 монометилового эфира этиленгликоля. Содержимое обеих пробирок тщательно перемешивают после добавления каждого реактива. Пробирки помещают на кипящую водяную баню. Уровень воды в бане должен быть выше уровня жидкости в пробирках. Необходимо следить за тем, чтобы вода в бане постоянно кипела. Пробирки с исследуемыми жидкостями выдерживают в водяной бане в течение 15 мин, после чего пробирки охлаждают в воде температурой около 20 °C от 5 до 10 мин. В пробирки вносят по 10 см3 бутилацетата, закрывают пробками и интенсивно встряхивают. После разделения слоев из каждой пробирки отбирают пипеткой верхний слой и фильтруют его через воронку с ватным тампоном и нанесенным на него слоем сульфата натрия толщиной от 1 до 2 см. По истечении 15 мин после окончания фильтрации измеряют оптическую плотность фильтрата исследуемого раствора относительно соответствующего раствора сравнения в кюветах рабочей длиной 1 см на спектрофотометре или на фотоколориметре при длине волны 509 нм.

Массовую концентрацию пролина X, мг/дм3, рассчитывают по формуле

где D - оптическая плотность исследуемого раствора, ед. оптической плотности;

K - градуировочный коэффициент, мг/дм3 · ед. оптической плотности;

F - фактор разведения пробы.

Вычисления проводят до первого десятичного знака.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое значение результатов двух параллельных определений, округленное до целого значения. Для концентрированных соков при представлении результата испытания следует указывать значение относительной плотности, до которого была разведена проба перед испытанием.

Абсолютное расхождение между результатами двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать значения показателя сходимости d. Значение показателя сходимости при вероятности P = 0,95 составляет 0,8 мг/дм3 при массовой концентрации пролина до 50 мг/дм3, 5,5 мг/дм3 при массовой концентрации пролина свыше 50 до 500 мг/дм3 включительно, 35 мг/дм3 при массовой концентрации пролина свыше 500 до 1000 мг/дм3 включительно.

Абсолютное расхождение между результатами двух измерений, выполненных в двух лабораториях, не должно превышать значения показателя воспроизводимости D. Значение показателя воспроизводимости при вероятности P = 0,95 составляет 2,0 мг/дм3 при массовой концентрации пролина до 50 мг/дм3, 11 мг/дм3 при массовой концентрации пролина свыше 50 до 500 мг/дм3 включительно, 73 мг/дм3 при массовой концентрации пролина свыше 500 до 1000 мг/дм3 включительно.

Абсолютная погрешность измерения при соблюдении всех условий, регламентируемых настоящим стандартом, при вероятности P = 0,95 не превышает 1,4 мг/дм3 при массовой концентрации пролина до 50 мг/дм3, 7,8 мг/дм3 при массовой концентрации пролина свыше 50 до 500 мг/дм3 включительно, 52 мг/дм3 при массовой концентрации пролина свыше 500 до 1000 мг/дм3 включительно.