СПРАВКА
Источник публикации
М.: ИПК Издательство стандартов, 2000
Примечание к документу
Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880).
Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимых для применения и исполнения Федерального закона "Технический регламент на молоко и молочную продукцию" и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 15.12.2008 N 1866-р).
С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 N 184-ФЗ.
Документ введен в действие с 1 января 2001 года.
Название документа
"ГОСТ Р 51469-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Казеины и казеинаты. Фотометрический метод определения массовой доли лактозы"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 N 624-ст)
"ГОСТ Р 51469-99. Государственный стандарт Российской Федерации. Казеины и казеинаты. Фотометрический метод определения массовой доли лактозы"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 N 624-ст)
Содержание
Постановлением Госстандарта России
от 22 декабря 1999 г. N 624-ст
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
КАЗЕИНЫ И КАЗЕИНАТЫ
ФОТОМЕТРИЧЕСКИЙ МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ МАССОВОЙ ДОЛИ ЛАКТОЗЫ
Caseins and caseinates. Photometric method
for determination of lactose content
ГОСТ Р 51469-99
ОКС 67.100.10;
ОКСТУ 9209
Дата введения
1 января 2001 года
1. Разработан Государственным учреждением Всероссийским научно-исследовательским институтом молочной промышленности (ГУ ВНИМИ).
Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 186 "Молоко и молочные продукты".
2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 624-ст.
3. Настоящий стандарт гармонизирован с международным стандартом ИСО 5548-80 "Казеины и казеинаты. Определение содержания лактозы. Фотометрический метод".
4. Введен впервые.
Настоящий стандарт распространяется на казеины и казеинаты массовой долей углеводов не более 2%. Стандарт устанавливает фотометрический метод определения массовой доли лактозы и других растворимых углеводов.
Метод основан на растворении навески продукта в горячей воде или растворе, осаждении осадка фильтрации, окраске безбелкового осадка углеводов, фотометрического измерения и определения массовой доли лактозы в соответствии с калибровочным графиком.
В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:
ГОСТ 61-75 Кислота уксусная. Технические условия
ГОСТ 199-78 Натрий уксуснокислый 3-водный. Технические условия
ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия
ГОСТ 3118-77 Кислота соляная. Технические условия
ГОСТ 4201-79 Натрий углекислый кислый. Технические условия
ГОСТ 4204-77 Кислота серная. Технические условия
ГОСТ 6859-72 Приборы для отмеривания и отбора жидкостей. Технические условия
ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия
ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия
ГОСТ 19814-74 Кислота уксусная синтетическая и регенерированная. Технические условия
ГОСТ 23519-93 Фенол синтетический технический. Технические условия
ИС МЕГАНОРМ: примечание. Взамен ГОСТ 24104-88 Постановлением Госстандарта России от 26.10.2001 N 439-ст с 1 июля 2002 года введен в действие ГОСТ 24104-2001. |
ГОСТ 24104-88 Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия
ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры
ГОСТ 26809-86 Молоко и молочные продукты. Правила приемки, методы отбора и подготовки проб к анализу
ГОСТ 29227-91 Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1
ГОСТ 29251-91 Посуда лабораторная стеклянная. Бюретки. Часть 1. Общие требования
ИСО 707-97 <*> Молоко и молочные продукты. Методы отбора проб.
--------------------------------
<*> Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе соответствующего ИСО.
В настоящем стандарте применяют следующий термин с соответствующим определением.
Массовая доля лактозы в казеинах и казеинатах: отношение массы растворимых углеводов к массе навески продукта, умноженное на 100.
Дозаторы серной кислоты по ГОСТ 6859 вместимостью 10 см3.
Весы лабораторные по ГОСТ 24104 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г и ценой поверочного деления 0,001 г.
Устройство измельчающее, без нагрева пробы при измельчении и без потери или поглощения влаги.
Колбы конические по ГОСТ 25336 вместимостью 100 и 500 см3.
Сито из проволочной сетки диаметром 200 мм, размером стороны ячейки 500 мкм.
Пробирки с притертыми пробками по ГОСТ 1770 вместимостью 40 см3.
Пипетки по ГОСТ 29227 исполнения 2, 1-го и 2-го класса точности, вместимостью 1, 2 и 10 см3.
Микропипетки вместимостью 0,2 см3 и ценой деления 0,001 см3.
Баня водяная с возможностью установки температур (20 +/- 1) °C и от 60 °C до 70 °C.
Цилиндры мерные по ГОСТ 1770 2-го класса точности вместимостью 25 см3.
Фотоэлектроколориметр диапазоном измерения при длине волны 490 нм, с кюветами размером оптического пути от 1 до 2 см.
Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026.
Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.
Натрий углекислый кислый 
по ГОСТ 4201, ч.д.а.
по ГОСТ 4201, ч.д.а.Натрия трифосфат 
по технической документации, ч.д.а.
по технической документации, ч.д.а.Кислота соляная по ГОСТ 3118, раствор концентрации 0,1 моль/дм3, х.ч.
Кислота серная концентрированная по ГОСТ 4204, плотностью 1,84 г/см3, раствор концентрации 1 моль/дм3, х.ч.
Кислота уксусная по ГОСТ 61, раствор 100 г уксусной кислоты в 1 дм3 дистиллированной воды, х.ч.
Натрий уксуснокислый 
по ГОСТ 199, раствор концентрации 1 моль/дм3, ч.д.а.
по ГОСТ 199, раствор концентрации 1 моль/дм3, ч.д.а.Фенол по ГОСТ 23519, раствор с массовой долей фенола 80%.
Лактоза безводная, ч.д.а.
Кислота уксусная синтетическая и регенерированная по ГОСТ 19814.
Допускается применять другие средства измерений с метрологическими характеристиками и оборудование с техническими характеристиками не хуже, а также реактивы по качеству не ниже указанных.
Отбор и подготовка проб - по ГОСТ 26809, для экспортно-импортных операций - по ИСО 707.
6.1.1. В колбу вместимостью 250 см3 помещают (50 +/- 1) г казеина или казеината, закрывают колбу пробкой и перемешивают пробу десятикратным переворачиванием и встряхиванием колбы.
6.1.2. Тщательно перемешанную пробу переносят на лабораторное сито.
6.1.3. Если 50 г пробы полностью просеивается через сито, проба пригодна для дальнейшей работы.
6.1.4. Если проба полностью или частично не проходит, измельчают (50 +/- 5) г образца. Пробу просеивают и переносят в колбу вместимостью 250 см3, закрывают пробкой и тщательно перемешивают не менее чем десятикратным переворачиванием колбы. Во время проведения этих работ необходимо исключить попадание влаги в продукт и дальнейшее определение проводить как можно скорее.
В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают (2,000 +/- 0,001) г безводной лактозы, доливают дистиллированной водой до метки и перемешивают до полного растворения. Раствор хранят при температуре 0 °C.
6.2.2. Приготовление градуированных растворов
6.2.2.1. Раствор А
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 10 см3 раствора лактозы (по 6.2.1) и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора А содержится 2 мг безводной лактозы.
6.2.2.2. Раствор N 1
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 1 см3 раствора А и доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора содержится 20 мкг безводной лактозы.
6.2.2.3. Раствор N 2
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 2 см3 раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора содержится 40 мкг безводной лактозы.
6.2.2.4. Раствор N 3
В мерную колбу вместимостью 100 см3 пипеткой отмеряют 3 см3 раствора А, доливают дистиллированной водой до метки.
В 1 см3 раствора содержится 60 мкг безводной лактозы.
В колбу вместимостью 100 см3 вносят (0,100 +/- 0,001) г углекислого кислого натрия для кислотного казеина или (0,100 +/- 0,001) г трифосфата натрия - для сычужного казеина и доливают 25 см3 дистиллированной воды. Перемешивают встряхиванием и ставят на водяную баню при температуре (65 +/- 5) °C до полного растворения. Далее обработка раствора по 6.3.4.
6.3. Подготовка фильтрата в соответствии с требованиями, изложенными в Приложении А
6.3.1. Навеску массой (1,00 +/- 0,01) г казеина или казеината по 6.1 помещают в коническую колбу вместимостью 100 см3 и добавляют (кроме казеината):
- для кислотного казеина - (0,100 +/- 0,001) г углекислого кислого натрия 
;
;- для сычужного казеина - (0,100 +/- 0,001) г трифосфата натрия 
.
.6.3.2. В колбу доливают 25 см3 дистиллированной воды, ставят на водяную баню температурой от 60 до 70 °C. Колбу периодически перемешивают встряхиванием.
6.3.3. Нагревание проводят в течение 10 - 15 мин до полного растворения навески.
- 15 см3 дистиллированной воды и перемешивают встряхиванием;
- 8 см3 раствора соляной кислоты или раствора серной кислоты концентрации 0,1 моль/дм3 и перемешивают встряхиванием;
- 1 см3 раствора уксусной кислоты и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют на 5 мин.
Затем добавляют 1 см3 раствора ацетата натрия и перемешивают встряхиванием.
Колбу оставляют до полного осаждения казеинового преципитата.
Раствор фильтруют через сухую фильтровальную бумагу.
7.1. В пробирку вместимостью 40 см3 отмеряют пипеткой 2 см3 фильтрата, добавляют микропипеткой 0,2 см3 раствора фенола массовой долей 80% и перемешивают встряхиванием.
Доливают концентрированную серную кислоту при помощи дозатора со скоростью 5 см3/с. Струю кислоты направляют на поверхность раствора, а не по стенке пробирки, при этом хорошо перемешивают.
Содержимое пробирки вновь тщательно перемешивают встряхиванием и оставляют в покое на 15 мин.
Охлаждают в течение 5 мин на водяной бане при температуре (20 +/- 2) °C и приступают к измерению.
Измеряют оптическую плотность раствора при длине волны 490 нм с использованием раствора сравнения, приготовленного по 6.2.2.5.
Если значение оптической плотности выше верхнего предела, указанного калибровочной кривой, повторяют измерение с использованием 2 см3 разбавленного раствора фильтрата вместо самого фильтрата.
Примечание. Если делается такое разбавление, то в формуле расчета по 8.1 проводят соответствующую корректировку.
7.2. Построение калибровочного графика
В четыре пробирки для анализа помещают 2 см3 каждого из трех градуировочных растворов по 6.2 и приливают к ним 2 см3 дистиллированной воды.
Измеряют оптическую плотность трех градуировочных растворов с использованием раствора сравнения, подготовленного по 6.2.2.5.
Строят калибровочный график нанесением значений массовой концентрации безводной лактозы и результатов измерения оптической плотности.
8.1. Массовую долю лактозы в навеске M, %, вычисляют по формуле
где c - массовая концентрация безводной лактозы, определенная по градуировочному графику, мкг/см3;
m - масса навески продукта, г;
50 - объем раствора казеина или казеината, см3.
9.1. Сходимость
Разность двух результатов определений, полученных при анализе одной и той же пробы одним и тем же лаборантом за короткий промежуток времени, не должна превышать 0,03% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности P = 0,95.
9.2. Воспроизводимость
Разность двух единичных и независимых результатов определений, полученных двумя лаборантами, работающими в разных лабораториях с одной и той же пробой, не должна превышать 0,04% при массовой доле лактозы менее или равной 0,2% и вероятности P = 0,95.
9.3. Если расхождение результатов двух параллельных определений (сходимость) превышает 0,03%, то повторно проводят два новых определения.
(обязательное)
Вид продукта | Масса навески, г | Бикарбонат натрия  | Пентанатрийтрифосфат  | Объем воды, см3 | Время выдержки при нагревании, мин | Объем воды, см3 | Объем HCl,  | Уксусная кислота, см3 | Время выдержки, мин | Ацетат натрия  (см3) |
Казеинаты | 1 г +/- 0,01 | 25 | 10 - 15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | ||
Кислотные казеины | 1 г +/- 0,01 | 0,1 +/- 0,001 | 25 | 10 - 15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | |
Сычужные казеины | 1 г +/- 0,01 | 0,1 +/- 0,001 | 25 | 10 - 15 | 15 | 8 | 1 | 5 | 1 | |
Раствор сравнения для кислотного казеина | 0,1 +/-0,001 | 25 | - | - | - | - | - | - | ||
Раствор сравнения для сычужного казеина | 0,1 +/- 0,001 | 25 | - | - | - | - | - | - |