1. Разработан Временным творческим коллективом, образованным в рамках договора N М98 42 002 Е 4075 между АФНОР и ВНИЦСМВ с участием членов Технического комитета по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, БВД, премиксы".

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, БВД, премиксы".

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 579-ст.

3. Настоящий стандарт за исключением 2, 5.3, 6 представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6866-85 "Корма для животных. Определение свободного и общего госсипола".

4. Введен впервые.

Настоящий стандарт устанавливает метод определения массовой доли свободного и общего госсипола и химически связанных веществ в кормах для животных.

Метод распространяется на семена хлопчатника, муку из семян хлопчатника, хлопковый жмых и комбикорма, содержащие эти продукты.

Нижний предел обнаружения свободного госсипола - 20 мг/кг, общего госсипола - 50 мг/кг.

ГОСТ 13496.0-80 <*> Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

--------------------------------

<*> Действует до введения в действие ГОСТ Р, разработанного на основе стандарта ИСО 6497 [1].

ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498-98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб

3.1 Свободный госсипол экстрагируют в присутствии 3-аминопропан-1-ола или смесью 2-пропанола и гексана, общий госсипол-диметилформамидом. Используя анилин, госсипол переводят в госсипол-дианилин. Оптическую плотность полученного раствора измеряют при максимальном поглощении (между 435 и 445 нм).

Все реактивы должны быть квалификации х.ч. или ч.д.а. Вода должна быть дистиллированной.

4.1. 2-Пропанол/п-гексан, смесь 60 + 40 по объему.

4.2. Растворитель A

В мерную колбу вместимостью 1000 см3 помещают приблизительно 500 см3 смеси 2-пропанол/гексан, 2 см3 3-аминопропан-1-ола, 8 см3 ледяной уксусной кислоты и 50 см3 дистиллированной воды. Объем раствора в колбе доводят до метки смесью 2-пропанол/гексана.

Реактив устойчив в течение одной недели.

4.3. Растворитель B

В мерную колбу вместимостью 100 см3 помещают 2 см3 3-аминопропан-1-ола и 10 см3 ледяной уксусной кислоты. Раствор охлаждают до комнатной температуры и его объем доводят до метки N,N-диметилформамидом.

Реактив устойчив в течение одной недели.

4.4. Анилин

Если оптическая плотность, определенная в холостом опыте, превышает 0,022, анилин перегоняют над цинковой пылью, отбрасывая первые и последние 10% дистиллята. Хранят в бутыли из темного стекла с притертой пробкой в холодильнике при температуре 0 - 4 °C.

Реактив устойчив в течение нескольких месяцев.

Используют обычную лабораторную аппаратуру.

5.1. Барабанный смеситель со скоростью вращения приблизительно 35 об/мин или шейкер.

5.2. Спектрометр, обеспечивающий измерения при длинах волн 435 - 445 нм с кюветами толщиной просвечиваемого слоя 10 мм.

5.3. Мерные колбы вместимостью 25 и 50 см3 и допускаемой относительной погрешностью +/- 0,2%.

5.4. Конические колбы вместимостью 50, 100 и 250 см3.

6.1. Отбор проб по ГОСТ 13496.0.

7.1. Испытуемую пробу готовят к анализу по ГОСТ Р 51419.

7.2. Взятие навески

Масса навески зависит от предполагаемого содержания госсипола. При определении свободного госсипола в семенах хлопчатника, муке из семян хлопчатника и жмыхе масса навески должна быть не более 1 г; для комбикормов она может быть до 5 г. При определении общего госсипола масса навески должна быть от 0,5 до 5 г.

Примечание. Масса навески должна быть достаточной, чтобы во взятой для анализа части фильтрата масса свободного госсипола была в пределах, указанных в 7.3.1.2, и общего госсипола - в пределах, указанных в 7.3.2.4.

7.3. Определение

7.3.1. Определение свободного госсипола

7.3.1.1. Навеску помещают в коническую колбу вместимостью 250 см3, дно которой покрыто стеклянными шариками. С помощью пипетки добавляют 50 см3 растворителя A, колбу закрывают и перемешивают на барабанном смесителе в течение 1 ч. Затем фильтруют через фильтровальную бумагу в коническую колбу вместимостью 100 см3. В процессе фильтрования воронку накрывают часовым стеклом.

7.3.1.2. В каждую из двух мерных колб вместимостью 25 см3 (C и D) при помощи пипетки переносят раствор фильтрата, содержащий от 50 до 100 мкг госсипола. Объем фильтрата, если это требуется, доводят до 10 см3 растворителем A.

7.3.1.3. Объем раствора в колбе C доводят до метки смесью 2-пропанол/гексан и перемешивают. Этот раствор служит нулевым раствором, относительно которого проводят измерения испытуемого раствора.

7.3.1.4. В каждую из двух мерных колб вместимостью 25 см3 (E и F) с помощью пипетки переносят по 10 см3 растворителя A.

7.3.1.5. Объем жидкости в колбе E доводят до метки смесью 2-пропанол/гексан и перемешивают. Этот раствор в дальнейшем используют как нулевой раствор, относительно которого проводят измерения раствора холостого опыта.

7.3.1.6. В колбы D и F добавляют 2 см3 анилина. Нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин для развития окраски.

7.3.1.7. Охлаждают до комнатной температуры, доводят объем раствора до метки смесью 2-пропанол/гексан, перемешивают и оставляют на 1 ч.

7.3.1.8. Измеряют оптическую плотность раствора холостого опыта (колба F) относительно нулевого раствора (колба E) и оптическую плотность испытуемого раствора (колба D) относительно нулевого раствора (колба C) на спектрометре при длине волны максимальной абсорбции (между 435 и 445 нм).

7.3.1.9. Чтобы получить значения корректированной оптической плотности из значения оптической плотности испытуемого раствора вычитают значение оптической плотности раствора холостого опыта.

7.3.2. Определение общего госсипола

7.3.2.1. Навеску пробы помещают в мерную колбу вместимостью 50 см3 и приливают 10 см3 растворителя B.

7.3.2.2. Помещают 10 см3 растворителя B во вторую мерную колбу вместимостью 50 см3.

7.3.2.3. Нагревают две колбы (7.3.2.1 и 7.3.2.2) в течение 30 мин на кипящей водяной бане. Охлаждают до комнатной температуры и доводят до метки смесью 2-пропанол/гексан. Перемешивают и оставляют на 10 - 15 мин, затем фильтруют в коническую колбу вместимостью 50 см3.

7.3.2.4. В каждую из двух черных колб вместимостью 25 см3 при помощи пипетки переносят по 2 см3 фильтрата, полученного при экстракции навески пробы, содержащего от 40 до 200 мкг госсипола и по 2 см3 фильтрата, полученного из второй колбы в каждую из двух других мерных колб вместимостью 25 см3.

Доводят до метки смесью 2-пропанол/гексан жидкость в одной из колб, содержащих фильтрат испытуемой пробы и одной из колб холостого опыта. Эти растворы служат нулевыми растворами.

7.3.2.5. Добавляют по 2 см3 анилина в оставшиеся две колбы, содержащие испытуемый раствор и раствор холостого опыта. Нагревают в течение 30 мин на кипящей водяной бане для развития окраски.

Охлаждают до комнатной температуры, доводят до метки смесью 2-пропанол/гексан, перемешивают и оставляют на 1 ч.

7.3.2.6. Измеряют оптическую плотность растворов по 7.3.1.8 и вычисляют корректированную оптическую плотность по 7.3.1.9.

7.4. Количество определений

При анализе каждой пробы выполняют два параллельных определения.

8.1. Массовую долю свободного или общего госсипола в испытуемой пробе X, мг/кг, вычисляют по формуле

где A - скорректированная оптическая плотность;

m - масса навески, г;

V - объем части фильтрата, взятый для анализа, см3;

a - коэффициент поглощения (для свободного госсипола - 62,5 и для общего госсипола - 60,0), .

За результат испытания принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений, если выполняется норматив сходимости (8.2).

8.2. Сходимость

Расхождение между результатами двух параллельных определений не должно превышать:

15% от среднего арифметического результата при массовой доле госсипола менее 500 мг/кг;

75 мг/кг при массовой доле госсипола не менее 500 и не более 750 мг/кг;

10% от среднего арифметического результата при массовой доле госсипола более 750 мг/кг.

9.1. В отчете об испытании должны быть указаны:

- используемый метод и полученный результат;

- все условия выполнения анализа, не установленные данным стандартом или рассматриваемые как необязательные, так же как любые обстоятельства, которые могли оказать влияние на результат анализа.

Отчет должен включать информацию, необходимую для полной идентификации пробы.

[1] ИСО 6497 Корма для животных. Методы отбора проб