1. Разработан Временным творческим коллективом, образованным в рамках договора N М98 42 002 Е 4075 между АФНОР и ВНИЦСМВ с участием членов Технического комитета по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, БВД, премиксы".

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 4 "Комбикорма, БВД, премиксы".

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 575-ст.

3. Настоящий стандарт за исключением 2, 5.2, 5.4, 6 представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 6491-98 "Корма для животных. Определение содержания фосфора. Спектрометрический метод".

4. Введен впервые.

Настоящий стандарт распространяется на все виды кормов, комбикормов, комбикормовое сырье и устанавливает спектрометрический метод определения массовой доли фосфора.

Метод применим к кормам с содержанием фосфора менее 50 г/кг. Он особенно подходит для анализа продуктов с относительно низким содержанием фосфора. Для продуктов с более высоким содержанием фосфора следует применять гравиметрический метод, используя хинолин фосфомолибдат.

ГОСТ 13496.0-80 <*> Комбикорма, сырье. Методы отбора проб

ГОСТ Р 51419-99 (ИСО 6498-98) Корма, комбикорма, комбикормовое сырье. Подготовка испытуемых проб

ИСО 3696-87 <**> Вода для проведения лабораторных анализов.

--------------------------------

<*> Действует до введения ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО 6497 [1].

<**> Действует до введения ГОСТ Р, разработанного на основе ИСО.

Навеску испытуемой пробы озоляют в присутствии извести и экстрагируют кислотой при нагревании (для кормовых средств, представляющих органическое вещество) или озоляют мокрым способом смесью серной и азотной кислот (для минерального сырья и жидких кормов). Аликвотную часть кислого раствора смешивают с молибдованадатным реактивом и измеряют поглощение полученного окрашенного в желтый цвет раствора при длине волны 430 нм.

Используют реактивы квалификации х.ч. и ч.д.а.

4.1. Вода по ИСО 3696.

4.2. Кальций углекислый.

4.3. Кислота хлористоводородная, молярной концентрации c (HCl) = 6 моль/дм3.

4.4. Кислота азотная молярной концентрации .

4.5. Кислота азотная молярной концентрации , .

4.6. Кислота серная молярной концентрации , .

4.7. Раствор гептамолибдата аммония.

В горячей воде растворяют 100,0 г 4-водного гептамолибдата аммония . Добавляют 10 см3 аммиака молярной концентрации [, ] и разбавляют водой до 1000 см3.

4.8. Раствор монованадата аммония.

В 400 см3 горячей воды растворяют 2,35 г монованадата аммония . При постоянном помешивании медленно добавляют 7 см3 азотной кислоты и разбавляют до 1000 см3 водой.

4.9. Молибдованадатный реактив.

В мерной колбе вместимостью 1000 см3 смешивают 200 см3 раствора гептамолибдата аммония, 200 см3 раствора монованадата аммония и 135 см3 азотной кислоты. Объем раствора доводят до метки водой. Если раствор мутный, его фильтруют.

4.10. Раствор сравнения (нулевой раствор).

10 см3 молибдованадатного реактива разбавляют 10 см3 воды.

4.11. Стандартный раствор фосфора массовой концентрации .

В мерной колбе вместимостью 1000 см3 растворяют в воде 4,394 г однозамещенного фосфорнокислого калия , предварительно высушенного при 103 °C в течение 1 ч. Объем раствора доводят до метки водой.

Используют обычное лабораторное оборудование.

5.1. Тигли для озоления кварцевые или фарфоровые.

5.2. Печь электрическая муфельная, обеспечивающая поддержание температуры (550 +/- 20) °C.

5.3. Колба Кьельдаля вместимостью 250 см3.

5.4. Колбы мерные с одной меткой вместимостью 500 и 1000 см3, с допускаемой относительной погрешностью +/- 0,2%.

5.5. Спектрометр с кюветами длиной просвечиваемого слоя 10 мм и обеспечивающий измерения при длине волны 430 нм.

5.6. Пробирки стеклянные вместимостью 25 - 30 см3 со стеклянными притертыми пробками.

5.7. Баня песчаная.

5.8. Пипетки градуированные.

Отбор проб по ГОСТ 13496.0.

Важно, чтобы в лабораторию поступила действительно представительная проба без повреждений или изменений при транспортировании или хранении.

Испытуемую пробу готовят по ГОСТ Р 51419.

Если анализируемый продукт представляет твердое вещество, лабораторную пробу (обычно 500 г) размалывают до полного прохода через сито с отверстиями диаметром 1 мм. Тщательно перемешивают.

8.1. Выбор способа озоления

Если испытуемая проба содержит органические вещества и свободна от фосфатов, переходящих в нерастворимое состояние при озолении, озоление проводят по 8.2.

Если испытуемая проба представляет минеральное соединение или жидкое кормовое средство, ее озоляют по 8.3.

8.2. Сухое озоление

На весах 2-го класса точности взвешивают навеску испытуемой пробы массой около 2,5 г и помещают в тигель для озоления. Навеску тщательно перемешивают с 1 г углекислого кальция. Озоляют в муфельной печи при температуре 550 °C до получения золы белого или серого цвета (небольшое количество угля не оказывает влияния на результат). Золу переносят, используя 20 - 50 см3 воды, в химический стакан вместимостью 250 см3. Приливают хлористоводородную кислоту до прекращения выделения пузырьков газа, после чего добавляют еще 10 см3 хлористоводородной кислоты. Стакан помещают на песчаную баню и его содержимое выпаривают досуха, чтобы перевести кремний в нерастворимое состояние. Затем стакан охлаждают, приливают 10 см3 азотной кислоты и кипятят на песчаной бане в течение 5 мин, не допуская при этом выпаривания содержимого досуха. Жидкость декантируют в мерную колбу вместимостью 500 см3, стакан несколько раз ополаскивают водой. После охлаждения объем раствора в колбе доводят до метки водой, перемешивают и фильтруют.

Далее поступают по 8.4.

8.3. Мокрое озоление

На весах 2-го класса точности взвешивают навеску испытуемого образца массой около 1 г и помещают в колбу Кьельдаля. Добавляют 20 см3 серной кислоты. Перемешивают, чтобы полностью смочить навеску кислотой и предотвратить прилипание частичек образца к стенкам колбы. Колбу нагревают до кипения и поддерживают это состояние в течение 10 мин. Затем колбу слегка охлаждают и в нее добавляют 2 см3 азотной кислоты, осторожно нагревают и опять слегка охлаждают. Добавляют еще немного азотной кислоты и опять нагревают до кипения. Эту процедуру повторяют до тех пор, пока жидкость в колбе станет бесцветной. После этого колбу охлаждают, добавляют немного воды и жидкость декантируют в мерную колбу вместимостью 500 см3. Колбу Кьельдаля ополаскивают горячей водой и сливают в ту же мерную колбу. Раствор охлаждают, разбавляют до метки водой, перемешивают и фильтруют.

8.4. Окрашивание и измерение поглощения окрашенного раствора

Аликвотную часть полученного раствора (8.2 или 8.3) разбавляют водой с таким расчетом, чтобы получить раствор с содержанием фосфора не более 40 мкг/см3. При помощи пипетки 10 см3 этого раствора переносят в пробирку. При помощи другой пипетки в пробирку добавляют 10 см3 молибдованадатного реактива. Перемешивают и оставляют на не менее чем 10 мин при 20 °C.

Часть полученного раствора переносят в измерительную кювету и измеряют поглощение окрашенного раствора на спектрометре при длине волны 430 нм относительно раствора сравнения.

8.5. Построение градуировочной кривой

8.5.1. Используя стандартный раствор фосфора, готовят растворы, содержащие фосфора 5, 10, 20, 30 и 40 мкг/см3 соответственно.

8.5.2. При помощи пипеток переносят 10 см3 каждого из этих растворов в серию из пяти пробирок. В каждую пробирку добавляют 10 см3 молибдованадатного реактива. Перемешивают и оставляют на не менее чем 10 мин при 20 °C. Измеряют поглощение каждого раствора по 8.4.

8.5.3. Строят градуировочный график, откладывая значения поглощения стандартных растворов фосфора против соответствующего содержания в них фосфора в мкг/см3. При содержании фосфора между 0 и 40 мкг/см3 график должен быть линейным.

8.6. Холостое определение

Одновременно с анализом испытуемого образца проводят холостое определение, используя те же процедуры и те же количества реактивов (исключая взятие навески испытуемого образца).

Массовую долю фосфора в испытуемой пробе , вычисляют по формуле

где - соответствующий коэффициент разбавления аликвотной части зольного раствора;

- коэффициент пересчета граммов в миллиграммы ;

- содержание фосфора в разбавленной аликвотной части зольного раствора, найденное по градуировочному графику, мкг/см3;

V - объемы градуировочных растворов, взятых для окрашивания в 8.5.2, см3 (V = 10 см3);

m - масса навески (8.2 или 8.3), г.

Результаты вычисляют с точностью 0,1 г/кг.

10.1. Межлабораторный опыт

Результаты межлабораторного опыта по определению точности метода обобщены в Приложении А. Данные, полученные в этом межлабораторном опыте, неприменимы для других диапазонов концентрации фосфора и другой матрицы, чем приведенные в Приложении А.

10.2. Сходимость

Абсолютная разница между двумя единичными результатами, полученными при использовании одного и того же метода на идентичной испытуемой пробе в той же лаборатории тем же оператором при использовании того же оборудования за короткий промежуток времени, в более чем 5% случаев не должна превышать 1 г/кг.

10.3. Воспроизводимость

Абсолютная разница между двумя единичными результатами, полученными при использовании одного и того же метода на идентичной испытуемой пробе в разных лабораториях разными операторами на разном оборудовании в более чем 5% случаев не должна превышать 7 г/кг.

Протокол испытания должен содержать:

- всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы;

- метод отбора пробы, если он известен;

- метод испытания со ссылкой на настоящий стандарт;

- все процедуры, не устанавливаемые настоящим стандартом или рассматриваемые как необязательные, и любые факторы, которые могли влиять на результаты испытания;

- полученный результат испытания или

- если контролировалась сходимость, конечный полученный результат.

Межлабораторный опыт организован ИСО/ТК 34/ПК 10 "Корма для животных" в 1987 году. В этом опыте участвовало 24 лаборатории; исследовались образцы корма из клейковины зерна, комбикорма, рыбной муки, комбикормового концентрата (два вида), премикса и дрожжей.

[1] ИСО 6497 Корма для животных. Методы отбора проб