Редакционная коллегия:

Калинин В.А. - к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. - к.б.н.

Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. - зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. - к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Тифенсульфурон-метил-метил 3-[[[[4-метокси-6-метил-1,3,5-триазин-2-ил) амино] карбонил] сульфонил]-2-тиофенкарбоксилат.

Торговое название Хармони, ф. Дюпон, США.

М.м. 378,40.

Белое, твердое вещество. Температура плавления 186 °C, степень чистоты 95%. Растворимость в ацетонитриле при 25 °C 7,3 мг/мл, в этилацетате при 25 °C 2,6 мг/мл, в воде при pH 6,0 - 2400 мг/мл.

для крыс 5000 мг/кг.

Препарат используется в качестве гербицида для зерновых культур.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на извлечении препарата из анализируемой пробы раствором гидрокарбоната натрия, очистке экстрактов реэкстракцией хлороформом и количественном определении хроматографическими методами (ГЖХ, ТСХ).

2.1.2. Метрологическая характеристика метода (табл. 1)

Диапазон определяемых концентраций 0,01 - 0,5 мг/кг (мг/л).

2.1.3. Определению не мешают наполнители технического препарата

Хлороформ, ч., ГОСТ 20015-74.

Тифенсульфурон-метил, аналит. стандарт, фирма Дюпон.

Соляная кислота, х., ГОСТ 3118-77, 0,1 н водный раствор.

Натрий углекислый, х.ч., ГОСТ 4201-79, 0,1 М водный раствор.

Стандартный раствор хармони, содержащий 100 мкг/мл вещества, готовят растворением 10 мг препарата в мерной колбе с притертой пробкой в 100 мл этилового эфира уксусной кислоты. Хранят в холодильнике не более 6 месяцев.

К методу ГЖХ.

Азот особой чистоты газообразный, ГОСТ 9293-74.

Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм) с 5% SE-30.

Хлороформ, х.ч., ТУ 6-09-4263-76.

Метанол, х.ч., ГОСТ 6995-77.

Едкое кали, ч., ГОСТ 9285-78.

Гидразингидрат, ч.д.а.

Диэтиловый эфир, х.ч., ГОСТ 6262-79.

Получение диазометана

В реакционную колбу на 500 мл помещают 6 г едкого кали, 3 мл гидразингидрата, 3 мл метанола. Через смесь продувают азот с расходом 100 мл/мин. Из капельницы подают хлороформ со скоростью 1 кап. за 1 - 2 с. Колбу присоединяют к обратному холодильнику, конец которого снабжен газоотводной трубкой, которая погружена в слой эфира на дне приемника. Приемник охлаждают смесью льда и соли.

Вследствие токсичности и раздражающего действия диазометана прибор должен быть установлен в вытяжном шкафу. При работе использовать индивидуальные средства защиты: экран, перчатки, очки.

После окончания насыщения диэтилового эфира диазометаном (желтый цвет раствора), прекращают подачу в реакционную колбу хлороформа, отключают азот, остатки в реакционной колбе заливают водой и тщательно промывают колбу и все части прибора водой.

К методу ТСХ.

Нитрат серебра, ч., ГОСТ 1277-75.

Бромфеноловый синий, ч., ТУ 6-09-3719-83.

Лимонная кислота, ос.ч., ТУ 6-09-584-75, 2% раствор.

Пластинки "Силуфол" (Хемапол, ЧССР).

Подвижная фаза ацетон-гексан 1:1.

Проявляющий реактив: Раствор А: 50 мг бромфенолового синего растворяют в 10 мл ацетона. Раствор Б: 0,5 г нитрата серебра растворяют в 20 мл дистиллированной воды и прибавляют 60 мл ацетона.

Растворы А и Б сливают в мерную колбу на 100 мл и доводят ацетоном до метки. После обработки бромфеноловым синим пластинку обесцвечивают 2% раствором лимонной кислоты.

Газовый хроматограф, снабженный ДПР (Цвет, Газохром или др.).

Ротационный испаритель ИР-1М, ТУ 25-11-917-77.

Колбы конические на шлифе емкостью 250 - 500 мл, ГОСТ 10394-74.

Колбы грушевидные для отгонки растворителей, ГОСТ 23932-79.

Посуда мерная, ГОСТ 1770-74.

Делительные воронки, ГОСТ 23336-82.

Аппарат для встряхивания, ТУ 64-21-1081-73.

Воронки химические, ГОСТ 8613-75.

Индикаторная бумага универсальная, ТУ 6-09-1181-71.

Прибор для получения диазометана:

- колба круглодонная трехгорлая, емкостью 500 мл на шлифах (реакционный сосуд);

- холодильник Либиха на шлифах;

- делительная воронка на шлифе (капельница);

- П-образный переходник на шлифах;

- капилляр.

Камера хроматографическая, ГОСТ 23932-79.

Пульверизатор стеклянный, ГОСТ 10391-79.

2.4.1. Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов", утвержденными Заместителем Главного государственного санитарного врача СССР 21.08.1979 за N 2051-79.

Хранят пробы в морозильной камере (-14 - 20 °C).

2.5.1. Экстракция и очистка экстрактов

50 г зерна (50 г воздушно-сухой почвы, 10 г измельченной зеленой массы) помещают в плоскодонную колбу емкостью 250 мл, приливают 50 мл 0,1 М раствора натрия углекислого, встряхивают на аппарате для встряхивания в течение 1 часа. Отделяют раствор. Колбу и фильтр дважды промывают 20 мл раствора натрия углекислого. Объединяют экстракты, доводят pH до 3,5 с помощью соляной кислоты и реэкстрагируют препарат хлороформом (3 x 50 мл). Объединенные экстракты выпаривают при температуре не более 35 °C до 0,3 - 0,5 мл.

2.5.2. Определение методом ГЖХ

Удаляют остаток растворителя на воздухе. К сухому остатку приливают небольшими порциями раствор диазометана в диэтиловом эфире до прекращения обесцвечивания. Затем взбалтывают и выпаривают на воздухе досуха. Растворяют сухой остаток в 1 мл гексана. Хроматографируют по 5 мкл пробы. Одновременно с пробой готовят и метилируют диазометаном контрольную пробу и стандартные растворы хармони с концентрацией 10 мкг/мл, 5 мкг/мл, 2 мкг/мл.

Условия хроматографирования.

Хроматограф с ДПР.

Колонка стеклянная, длина 3 м, d = 3 мм.

Носитель - Хроматон N-AW-DMCS (0,16 - 0,20 мм).

Неподвижная фаза - 5% SE-30.

Температура: испарителя - 230 °C, детектора - 230 °C, колонки - 170 °C.

Вводимый объем - 5 мкл.

Время удерживания метилпроизводного хармони - 3 мин 30 с.

Минимально детектируемое количество 3 нг.

Содержание хармони в пробе рассчитывают по формуле:

X - количество препарата в пробе, мг/кг, мг/л;

- содержание вещества в стандарте, мкг/мл;

- объем стандарта, введенного в колонку газового хроматографа, мкл;

- объем анализируемой пробы, введенной в колонку газового хроматографа, мкл;

- общий объем анализируемой пробы, мл;

- высота пика стандарта, мм;

- высота пика анализируемой пробы, мм;

M - масса пробы, взятой для анализа, г.

2.5.3. Определение методом ТСХ

Пробу количественно наносят на хроматографическую пластинку "Силуфол". Рядом наносят стандартный раствор с различным содержанием хармони (2, 5, 7 и 10 мкг). После этого пластинку помещают в камеру для хроматографирования и хроматографируют. Хроматограмму развивают в смеси ацетона с гексаном (1:1). После развития хроматограммы пластинку вынимают из камеры, помещают ее под тягу и дают возможность испариться растворителям, после чего обрабатывают пластинку из пульверизатора вначале раствором бромфенолового синего, затем раствором лимонной кислоты. Хармони проявляется на пластинках в виде синих пятен на желтом фоне с 0,5 +/- 0,03.

Количественное определение проводят путем сравнения площади и интенсивности окраски пятен рабочей пробы и серии стандартов.

Содержание хармони в анализируемой пробе X мг/кг:

A - количество препарата, найденное на хроматограмме при сравнении со стандартом, мкг;

P - навеска пробы, г.

Необходимо соблюдать общепринятые правила безопасности при работе с органическими растворителями и токсичными веществами.

Разработчики: Кошарновская Т.А., Морару Л.Е., Гиренко Д.Б. (ВНИИГИНТОКС, г. Киев).