1.1. Лабораторная диагностика инфекционного бронхита кур (ИБК) заключается в:

- выделении вируса из патологического материала на куриных эмбрионах (КЭ) и его идентификация в реакции нейтрализации (РН) на КЭ или в реакции диффузной преципитации (РДП);

- выявлении антител в сыворотке крови кур в реакции непрямой гемагглютинации (РНГА), РДП или РН;

- постановке биопробы на цыплятах.

1.2. Диагноз на инфекционный бронхит устанавливают на основании результатов лабораторного исследования, анализа эпизоотологических и клинических данных, а также патологоанатомических изменений.

2.1. В ветеринарную лабораторию для выделения вируса направляют 5 ... 10 клинически больных цыплят, от которых берут кусочки гортани, трахеи, легких и используют их для вирусологических исследований. Материал можно хранить при температуре -10 ... -21 °C в течение 7 ... 10 дней.

2.2. Патологический материал растирают в ступке и готовят 10%-ную суспензию на растворе Хенкса, содержащем антибиотики (пенициллин и стрептомицин по 1000 ЕД/мл), центрифугируют при 1500 об/мин в течение 15 мин. Надосадочную жидкость отсасывают, выдерживают при температуре 40 °C в течение 1 ... 2 ч и используют для заражения КЭ.

2.3. Для постановки лабораторного диагноза методом выделения вируса и его идентификации требуется 15 ... 21 день, серологическим методом - от 2 до 3 недель.

3.1. Вирус ИБК выявляют на 8 ... 10-дневных КЭ, полученных из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням птиц. Эмбрионы заражают в аллантоисную полость в дозе 0,2 мл. После заражения их инкубируют при температуре 37 °C и ежедневно овоскопируют.

КЭ, погибшие в течение 24 ч, не учитывают.

КЭ, погибшие через 2 ... 7 дней, и все оставшиеся живыми вскрывают и отбирают экстраэмбриональную жидкость.

3.2. Признаками поражения КЭ вирусом ИБК считают гибель КЭ на 2 ... 7-й день, отставание их в росте, "карликовость" и скручивание в шар.

3.3. Если КЭ не погибают в первом пассаже, проводят второй и третий пассажи, используя для заражения экстраэмбриональную жидкость предыдущего пассажа.

4.1. В ряду пробирок готовят разведение исследуемого материала (экстраэмбриональную жидкость) от 10 до 10 в объеме 0,5 мл. К каждому разведению добавляют равный объем специфических к вирусу ИБК сывороток типа Массачусетс и Коннектикут, предварительно разведенных 1:2 и проинактивированных при +56 °C в течение 30 мин. Смесь встряхивают и оставляют на 1 ... 2 ч при температуре 40 °C. После этого каждым разведением вируса с сывороткой заражают по 4 КЭ в дозе 0,2 мл в аллантоисную полость. Для контроля заражают КЭ смесью вируса в тех же разведениях на растворе Хенкса. Для разведения вируса и сывороток используют среду Хенкса или стерильный физиологический раствор с антибиотиками (пенициллина и стрептомицина по 100 ЕД/мл).

4.2. Учет РН проводят на 5 ... 7-й день после заражения КЭ. Подавление размножения вируса специфической сывороткой при гибели КЭ в контроле указывают на видовую принадлежность вируса.

- специфическая сыворотка,

- специфический антиген (хорионаллантоисная оболочка КЭ через 48 ч после заражения полевым вирусом).

5.2. Приготовление агаровой среды. Для постановки реакции готовят 1%-ный гель на агаре "Дифко" с 8% хлористого натрия, pH 7,0. Агар, расплавленный и остуженный до 50 ... 56 °C, разливают в чашки Петри. В слое застывшего агара при помощи штампа нарезают лунки диаметром 5 мм, с расстоянием между лунками 5 мм.

5.3. Постановка реакции. В центральную лунку вносят специфическую сыворотку, в лунки по окружности - испытуемый материал и положительный антиген. Чашки Петри ставят при температуре 37 °C.

5.4. Учет результатов проводят через 24 ... 48 ч после постановки реакции. Реакция считается положительной, если образуются линии преципитации между лунками с исследуемым антигеном и специфической сывороткой при положительном результате в контроле (специфическая сыворотка + специфический антиген).

6.1. Исследуют пробы сывороток от больных и переболевших птиц. В РН используют смесь 5 ... 10 проб сывороток.

6.2. Постановка РНГА. Исследуемые и контрольные сыворотки (специфическую и отрицательную) разводят двукратно в объеме 0,025 мл (при помощи аппарата Такачи) 1%-ным раствором нормальной лошадиной сыворотки на физиологическом растворе. К указанному разведению добавляют по 0,025 мл (по одной капле) эритроцитарного диагностикума.

Смесь сыворотки с антигеном осторожно встряхивают и оставляют на 1 ... 2 ч при комнатной температуре. Реакцию можно ставить макрометодом.

6.3. За диагностический титр антител принимают разведение сыворотки, которое вызвало агглютинацию эритроцитарного диагностикума 1:16 и выше.

6.4. Постановка РПД описана в п. 5.

6.5. РН описана в п. 4 при выявлении антител равноценна вирусовыделению на КЭ, так как она выявляет серотип вируса ИБК, циркулирующего в хозяйстве. Исследуемые сыворотки, имеющие индекс нейтрализации и выше, считаются положительными.

7.1. Биопробу проводят на цыплятах 18 ... 25-дневного возраста из благополучного по инфекционному бронхиту птицехозяйству. Десяти цыплятам интратрахеально вводят по 0,2 ... 0,3 мл суспензии, полученной, как указано в п. 2. За цыплятами ведут ежедневное наблюдение в течение 7 дней, отмечая признаки заболевания.

7.2. При наличии в исследуемом материале вируса ИБК у цыплят через 18 ... 48 ч после заражения появляются хрипы, чихание, угнетение (сонливость).

С изданием настоящих методических указаний Наставление по лабораторной диагностике инфекционного бронхита кур, одобренное Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства СССР 7 мая 1973 г., утрачивает силу.

1. Лабораторные исследования в ветеринарии. Вирусные, риккетсиозные и паразитарные болезни: справочник/под ред. Б.И. Антонова. - М.: Агропромиздат, 1987. - 240 с.

2. Бакулов И.А. Эпизоотологический словарь-справочник/И.А. Бакулов, Г.Г. Юрков, В.А. Ведерников [и др.]. - М.: Россельхозиздат, 1986.

3. Нымм Э.М. Словарь ветеринарных микробиологических и вирусологических терминов/Э.М. Нымм, К.А. Петерсон, Э.А. Аавер [и др.]. - М.: Росагропромиздат, 1989.