Разработаны Институтом питания АМН СССР, кафедрой общей гигиены Белорусского Государственного института усовершенствования врачей Минздрава СССР.

Предназначены для контроля остаточных количеств левомицетина в пищевых продуктах санитарно-эпидемиологическими станциями, а также заводскими и сельскохозяйственными лабораториями.

Среди ряда посторонних веществ, которые могут загрязнять различные пищевые продукты, важное место занимают лекарственные средства. Наиболее часто пищевые продукты загрязняются остатками лекарственных препаратов, применяемых для профилактики и лечения животных и птицы, ускорения их роста, улучшения качества и сохранности кормов и т.п. Номенклатура лекарств, используемых в животноводстве и ветеринарии, постоянно расширяется.

К сильнодействующим лекарственным препаратам, используемым в ветеринарии и животноводстве, относятся антибиотики. Известно большое число антибиотиков, природных и полусинтетических, обладающих различными свойствами, механизмом и спектром действия, распределением в организме животного, характером метаболизма и др.

Широкое применение антибиотиков в ветеринарии и животноводстве создает определенные проблемы с точки зрения гигиены питания, требует проведения соответствующих мероприятий для снижения уровня загрязненности продуктов этими веществами, а также организации контроля за остаточными количествами препаратов в продуктах животноводства.

При систематическом поступлении в организм человека с пищей антибиотики могут вызывать различные аллергические реакции, нарушение обмена веществ, дисбактериоз, подавлять активность некоторых ферментов, изменять микрофлору, способствовать распространению устойчивых форм микроорганизмов и т.д. Следует учитывать возможность отрицательного влияния антибиотиков в сырье для пищевой промышленности на проведение ряда технологических процессов по переработке мяса, рыбы, молока и других продуктов, кроме того, наличие антибиотиков может затруднять бактериологические исследования качества продуктов животного происхождения.

В мясе, печени, почках, молоке, твороге, сметане, сыре, яйце, рыбе, меде и других продуктах довольно часто обнаруживают остаточные количества антибиотиков, что предопределяет необходимость проведения выборочного, периодического или систематического их контроля. Некоторые из перечисленных продуктов являются диетическими (молоко, творог, сметана и др.), поэтому отсутствие в них токсических и лекарственных соединений особенно важно.

В СССР остаточные количества ряда антибиотиков регламентированы предельно допустимыми концентрациями (ПДК) <*>. К ним относятся тетрациклины (0,01 ед./г), пенициллины (0,01 ед./г) и стрептомицин (0,5 ед./г).

--------------------------------

<*> Медико-биологические требования и санитарные нормы качества продовольственного сырья и пищевых продуктов. М., Издательство стандартов, 1990 г.

Для контроля уровней этих антибиотиков Минздравом СССР утверждены микробиологические методы определения, которые позволяют обнаруживать и идентифицировать группы указанных веществ на уровне ПДК.

Левомицетин (хлормицетин, хлорамфеникол) - эффективный синтетический антибиотик широкого спектра действия, запрещен к использованию в животноводстве и ветеринарии для лечения скота, птицы, мясо, молоко и яйца которых предназначены для питания людей. Это связано с токсичностью левомицетина, проявляющейся в аллергических реакциях, поражении кроветворных органов и др. Однако относительная дешевизна этого препарата и высокая антибактериальная активность приводят к нелегальному использованию его в относительно высоких масштабах.

Микробиологические методы неэффективны для анализа этого антибиотика в пищевых продуктах, т.к. найденные тест-культуры малочувствительны и не позволяют осуществлять контроль за остаточными количествами левомицетина хотя бы на уровне ПДК других антибиотиков, разрешенных к применению.

В связи с этим за рубежом наиболее часто применяют химические методы определения левомицетина в пищевых продуктах с использованием хроматографического разделения.

В настоящих Методических рекомендациях впервые в СССР предпринята попытка применения для контроля остаточных количеств левомицетина в пищевых продуктах простого химического метода анализа, основанного на извлечении антибиотика экстракцией органическим растворителем, концентрировании экстракта, отделении левомицетина в тонком слое силикагеля от коэкстрактивных веществ и определении его после восстановления в виде производного с n-деметиламинобензальдегидом.

Доступность реактивов и оборудования позволяет рекомендовать этот метод для серийных анализов пищевых продуктов в условиях санэпидстанций, заводских и сельскохозяйственных лабораторий.

Предел обнаружения левомицетина на хроматографической пластинке 5 - 10 нг в зоне. Относительное стандартное отклонение при визуальном определении не превышает 0,4, при спектрофотометрическом - 0,2. Метод позволяет проводить анализ левомицетина при содержании его 0,05 мг/кг продукта и выше.

Метод состоит из следующих основных стадий:

1. Отбор и подготовка пробы.

2. Извлечение левомицетина из пищевых продуктов и концентрированного экстракта.

3. Хроматографическое разделение, идентификация и ориентировочная оценка концентрации левомицетина в экстракте.

4. Подтверждение наличия левомицетина в пробе.

5. Количественное определение и расчет содержания левомицетина в продукте.

Гомогенизатор тканей по <...>

Спектрофотометр СФ-26 или аналог

Термостат ТС-80М-2 или аналог

Азот, поверочный нулевой газ

Центрифуга настольная по <...> 375-4261 или аналог

Ротационный испаритель с крышкой по ТУ 25-11-917

Баня масляная или глицериновая

Камера для тонкослойной хроматографии с притертой крышкой, например стеклянный четырехгранный сосуд 195 x 195 x 200 мм завода "Дружная горка".

Пластины для тонкослойной хроматографии "Силуфол" размером 15 x 15 см, ЧСФР или Сорбфил 100 x 100 (г. Краснодар) ТУ 26-11-17-89

Ножницы

Весы технические по ГОСТ 24104

Весы аналитические по ГОСТ 24104

Линейка

Карандаш графитовый М или аналог

Цилиндры мерные вместимостью 25 и 100 мл по ГОСТ 1770

Колбы плоскодонные на 250 и 500 мл с НШ N 14,5 по ТУ 48-52

Колбы мерные на 25 мл по ГОСТ 1770

Пипетки на 5 и 10 мл по ГОСТ 20292

Колбы для упаривания на <...> мл с НШ N 14,5 по ГОСТ 10394

Микрошприц на 10 и 25 мкл

Натрий сернокислый, безводный по ГОСТ 4166

Серная кислота по ГОСТ 14262 <...> 1 н

Этилацетат по ГОСТ <...>

Натрий хлористый по ГОСТ <...> насыщенный раствор в воде

Натрий углекислый по ГОСТ <...> 2% водный раствор

Ацетонитрил по ТУ 6-09-3534-87

Петролейный эфир, фракции <...>

Метанол

бета-глукуронидаза, водный раствор 1 мг/мл

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709

Кислота соляная, конц. по ГОСТ 3118

Левомицетин

Однозамещенный фосфат калия

Двузамещенный фосфат натрия

Способ отбора и подготовки проб должен быть указан в нормативно-технической документации на конкретную продукцию.

Отвешивают 25 мг левомицетина, помещают в мерную колбу на 25 мл и растворяют в метаноле, концентрация левомицетина - 1 мг/мл. 0,25 мл полученного раствора помещают в мерную колбу на 25 мл и разбавляют метанолом. Концентрация левомицетина в стандартном растворе 10 нг/мкл.

При анализе сметаны ее разбавляют в 2,5 - 5 раз в зависимости от жирности. Сыры и творог гомогенизируют с водой до получения гомогенной массы.

На пластинку для тонкослойной хроматографии наносят (рис. а - рисунки здесь и далее не приводятся): в точки 1, 3 и 5 соответственно 1, 2 и 4 мкл раствора стандарта, а в точки 2 и 4 соответственно 3 и 10 мкл концентрированного экстракта.

Интервал определяемых масс левомицетина составляет 0,5 - 6,0 мкг.

Вычисления проводят до второго десятичного знака.

За окончательный результат испытаний принимают среднее арифметическое двух параллельных определений, расхождение между которыми не превышает 20%.

Окончательный результат округляют до первого десятичного знака.

В случае обнаружения остаточных количеств левомицетина и подтверждения правильности его идентификации в исследуемых пищевых продуктах вопрос с их реализацией решается согласно "Методическим указаниям по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства". Москва, Минздрав СССР, ГОЭУ. 1985 г., 34 с. <*>

--------------------------------

<*> N 3049-84 от 29 июня 1984 г.

Представленные рекомендации являются первой в СССР попыткой наладить систематический контроль за наличием и уровнями левомицетина в пищевых продуктах. До настоящего времени анализ левомицетина при необходимости выполняли микробиологически. Однако, отсутствие чувствительных тест-культур не позволяет рассчитывать на обнаружение микрограммовых количеств этого антибиотика такими способами. В связи с этим особенно важно создание химического метода контроля остаточных количеств левомицетина, позволяющего с небольшими затратами обнаружить, идентифицировать и количественно определить его содержание. Левомицетин обладает определенной токсичностью и поэтому запрещен к использованию как у нас в стране, так и за рубежом для лечения, например, лактирующих коров или кур-несушек. Анализ литературных данных позволяет сделать заключение, что применение его для лечения сельскохозяйственных животных и птицы - достаточно частое явление, оправданное дешевизной и эффективностью препарата.

Интенсификация сельскохозяйственного производства может стать одной из причин снижения качества пищевых продуктов и, в частности, загрязнения их антибиотиками. Поэтому своевременный и надежный контроль за наличием левомицетина становится важным и актуальным.

Все отмеченное позволяет рекомендовать утвердить разработанные методические рекомендации для внедрения в практику работы учреждений Госсаннадзора. Полученные этим методом материалы целесообразно обобщить для создания общей картины частоты и уровней загрязнения пищевых продуктов БССР левомицетином.