1. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота (КРС).

2. Состав набора.

Набор выпускают в четырех вариантах комплектации. Варианты I и III рассчитаны на проведение 1000 исследований, вариант II на 250 исследований, вариант IV рассчитан на 4000 исследований. Комплектация наборов по вариантам осуществляется по согласованию с потребителем.

3. Антиген вируса лейкоза - лиофилизированная гомогенная аморфная масса светло-коричневого цвета с красноватым оттенком. При добавлении разбавителя в объеме, соответствующем объему антигена до высушивания, содержимое флакона полностью растворяется в течение 10 мин без хлопьев и осадка и представляет собой опалесцирующую жидкость темно-красного цвета.

Специфическая преципитирующая сыворотка (СПС) - прозрачная слегка опалесцирующая жидкость светло-желтого цвета или с розоватым оттенком. Допускается наличие небольшого осадка белка, легко разбивающегося при встряхивании.

Разбавитель антигена вируса лейкоза КРС - прозрачная бесцветная жидкость без механических примесей.

Контрольные сыворотки: ОКС, ПКС, СПКС и ПКСр24 представляют собой прозрачные жидкости светло-желтого цвета или бесцветные, образующие пену при встряхивании.

Смесь солевая агаровая (ССА) представляет собой сухую смесь, содержащую два типа частичек: порошок агара и кристаллы хлористого натрия.

Разбавитель ССА - прозрачная бесцветная жидкость.

4. Антиген вируса лейкоза КРС и разбавитель антигена вируса лейкоза расфасовывают по 5 см³, а СПС - по 10 см³ во флаконы вместимостью 10 см³. Смесь солевую агаровую и разбавитель смеси солевой агаровой расфасовывают соответственно по 18,6 г и по 20 см³ во флаконы вместимостью 20 см³. Флаконы плотно закрывают резиновыми пробками и обкатывают алюминиевыми колпачками.

Контрольные сыворотки (ОКС, ПКС, СПКС и ПКСр24) расфасовывают по 0,5 см³ во флаконы вместимостью 10 см³ или в ампулы вместимостью 2 см³. Ампулы запаивают, флаконы укупоривают резиновыми пробками и обкатывают колпачками.

5. Маркированные флаконы устанавливают в маркированные картонные коробки с разделительными перегородками или любые другие, обеспечивающие их целостность.

Срок годности набора - 2 года с даты выпуска при соблюдении условий хранения.

Хранить набор в сухих, закрытых и темных помещениях при температуре от 2 до 8 °C.

Транспортируют набор всеми видами крытого транспорта в условиях, исключающих замораживание и перегрев выше 25 °C.

В каждую коробку вкладывают инструкцию по применению набора.

По истечении срока годности препарат не должен применяться.

6. Принцип реакции иммунодиффузии заключается в том, что антигены и антитела, помещенные в лунки, диффундируют в геле агара и при взаимодействии образуют комплекс, который проявляется в виде линии преципитации.

7. Набор для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота применяется для исследования сывороток крови в реакции иммунодиффузии (РИД) в геле агара с целью выявления антител против гликопротеидного антигена вируса лейкоза (ВЛ) крупного рогатого скота.

8. Для постановки РИД необходимо смесь солевую агаровую, содержащуюся в одном флаконе, перенести в стеклянную колбу вместимостью 500 см³, прилить 20 см³ разбавителя смеси солевой агаровой (содержимое одного флакона) и 180 см³ дистиллированной воды (или воды очищенной). Колбу поставить на кипящую водяную баню и выдержать до полного расплавления агара. В каждую чашку Петри внести по 12,5 см³ расплавленного агара. При комплектации наборов по IV варианту реакцию иммунодиффузии проводить в 1%-ном агаровом геле, приготовленном на фосфатно-буферном растворе с pH 7,2 ... 7,6. Чашки оставить в течение часа с приоткрытыми крышками. При помощи штампа сделать отверстия (лунки) в геле агара, не допуская отслоения геля от дна чашки.

9. В каждой чашке прорезать по 4 фигуры, каждая из которых состоит из 7 лунок (одна в центре, остальные 6 - по периферии). Диаметр каждой лунки 7 мм, расстояние между центральной и периферическими лунками - 3 мм. Образовавшиеся диски геля удалить из лунок канюлей, соединенной с вакуумным насосом (или любым другим способом).

10. Лиофилизированный антиген ВЛКРС во флаконе растворить в 5,0 см³ соответствующего разбавителя (или 0,85% раствор натрия хлорида). Антиген растворяется в течение 10 мин без хлопьев и осадка. Растворенный антиген вносят в центральные лунки каждой фигуры.

11. Заполнение периферических лунок СПС можно проводить по одной из схем, приведенных на рисунках 17 и 18. СПС вносят в две диаметрально расположенные периферические лунки (1-й вариант постановки РИД - рис. 17) или в 3 периферические лунки, расположенные через одну (2-й вариант постановки РИД - рис. 18). При выборе заполнения периферических лунок следует учитывать, что 2-й вариант расположения лунок облегчает выявление слабоположительных испытуемых сывороток, однако количество исследований одним и тем же объемом антигена сокращается на 25% по сравнению с 1-м вариантом.

12. Чашки закрыть крышками и инкубировать при температуре (20 ... 26) °C. Через 48 ч осуществить учет реакции.

13. При оценке результатов реакции с испытуемыми сыворотками прежде всего устанавливают специфичность образовавшихся линий преципитации. Специфической считают линию преципитации, которая образуется между лункой с испытуемой сывороткой и антигеном и плавно сливается с контрольной линией, т.е. идентична ей (рис. 19). Неспецифической считают линию преципитации, которая формируется между лунками с испытуемой сывороткой и антигеном, но не сливается с контрольной линией преципитации, а пересекает ее или упирается в нее, образуя иногда шпору (рис. 20) (реакция неидентичности).

В зависимости от наличия в испытуемых сыворотках специфических антител против вируса лейкоза крупного рогатого скота и формой образовавшихся линий преципитации реакцию оценивают как отрицательную или как положительную.

14. Использование препарата не требует специальных мер предосторожности и не представляет опасности для здоровья человека.

15. Препарат следует хранить в местах, не доступных для детей.

Контроль набора, поступившего с рекламацией, проводит организация-производитель, а при разногласиях в оценке качества набора между потребителем и производителем контроль проводит профильный отдел ФГУ "Всероссийский государственный Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов".

Организация-производитель - Федеральное государственное унитарное предприятие "Курская биофабрика - фирма БИОК".

Инструкция по применению набора для серологической диагностики лейкоза крупного рогатого скота разработана ФГУП "Курская биофабрика" (г. Курск, ул. Разина, 5).

Рекомендовано к регистрации в Российской Федерации ФГУ "ВГНКИ". Регистрационный номер ПВР-1-1.2/00966.