[(2S,12Z,14E,16S,17S,18R,19R,20R,21S,22R,23S,24E)-5,6,9,17,19-

Пентагидрокси-2,4,12,16,18,20,22-гептаметил-8-[N-(4-метил пиперазин-1-

ил)метанимидоил]-23-метокси-1,11-диоксо-1,2-дигидро-2,7-(эпоксипентадека

[1,11,13]триеноимино)нафто[2,1-b]фуран-21-ил]ацетат

Рифампицин - полусинтетический антибиотик, получаемый из рифамицина SV.

Содержит не менее 97,0% и не более 102,0% рифампицина C₄₃H₅₈N₄O₁₂ в пересчете на сухое вещество.

Описание. Красно-коричневый или коричнево-красный кристаллический порошок.

Растворимость. Растворим в метаноле, мало растворим в ацетоне, спирте 96% и воде.

Подлинность.

1. ИК-спектр. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области частот от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца рифампицина.

2. Спектр поглощения раствора субстанции, приготовленного для количественного определения, в области длин волн от 220 до 500 нм должен иметь максимумы поглощения при 237, 254, 334 и 475 нм. Отношение оптической плотности в максимуме поглощения при 334 нм к оптической плотности в максимуме поглощения при 475 нм должно быть около 1,75.

pH. От 4,5 до 6,5 (1% суспензия субстанции в воде, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ.

Раствор для приготовления подвижной фазы. 1,9 г натрия перхлората растворяют в 200 мл воды, прибавляют 1 мл фосфорной кислоты концентрированной, 5,9 г лимонной кислоты, 20,9 г калия фосфата однозамещенного, доводят водой до 1000 мл и перемешивают.

Подвижная фаза. Смешивают 35 объемов ацетонитрила и 65 объемов раствора для приготовления подвижной фазы.

Смесь растворителей. К 10 объемам 21,01% раствора лимонной кислоты прибавляют 23 объема 13,61% раствора калия фосфата однозамещенного, 77 объемов 17,42% раствора калия фосфата двузамещенного, 250 объемов ацетонитрила и 640 объемов воды.

Испытуемый раствор. 20,0 мг субстанции растворяют в 10,0 мл ацетонитрила. 5,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят объем раствора смесью растворителей до метки и перемешивают.

Стандартный раствор. 20,0 мг стандартного образца рифампицина хинона ([(2S,12Z,14E,16S,17S,18R,19R,20R,21S,22R,23S,24E)-5,17,19-Тригидрокси- 2,4,12,16,18,20,22-гептаметил-8-[N-(4-металпиперазин-1-ил)метанимидоил] -23-метокси-1,6,9,11-тетраоксо-1,2,6,9-тетрагидро-2,7-(эпоксипентадека [1,11,13]триеноимино)нафто[2,1-b]фуран-21-ил]ацетат) помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в ацетонитриле, доводят объем раствора ацетонитрилом до метки и перемешивают. 1,0 мл полученного раствора и 1,0 мл испытуемого раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора смесью растворителей до метки и перемешивают.

Хроматографические условия

Хроматографируют стандартный раствор. Разрешение (R) между пиками рифампицина и рифампицина хинона должно быть не менее 4,0.

Хроматографируют испытуемый раствор в течение времени, не менее чем в 2 раза превышающего время удерживания основного пика.

Площадь пика рифампицина хинона на хроматограмме испытуемого раствора не должна превышать площадь пика рифампицина хинона на хроматограмме стандартного раствора более чем в 1,5 раза (не более 1,5%).

Площадь любого пика на хроматограмме испытуемого раствора, кроме пиков рифампицина и рифампицина хинона, не должна превышать площадь пика рифампицина на хроматограмме стандартного раствора (не более 1,0%); сумма площадей всех пиков родственных примесей, кроме пика рифампицина хинона, должна не более, чем в 3,5 раза превышать площадь пика рифампицина на хроматограмме стандартного раствора (не более 3,5%).

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0% (ОФС "Потеря в массе при высушивании"). Около 1,0 г (точная навеска) субстанции сушат при температуре 80 °С и остаточном давлении не более 0,67 кПа в течение 4 ч.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с требованиями ОФС "Тяжелые металлы" в зольном остатке, полученном после сжигания 0,5 г субстанции (ОФС "Сульфатная зола").

Остаточные органические растворители. В соответствии с требованиями ОФС "Остаточные органические растворители".

<*> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 10 мг субстанции в 0,5 мл 1% раствора желатина на мышь, внутрь. Срок наблюдения 48 ч.

Для субстанций, предназначенных для приготовления лекарственных форм для парентерального введения, испытание проводится следующим образом.

Тест-доза - 4 мг субстанции в 0,5 мл приготовленного раствора на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

Испытуемый раствор. Около 300 мг (точная навеска) субстанции помещают в стерильную ступку, растирают. 30 мг аскорбиновой кислоты и 6 мг натрия сульфита помещают в мерную колбу вместимостью 15 мл, доводят объем раствора водой для инъекций до метки и перемешивают. Полученный раствор при постоянном перемешивании прибавляют к навеске субстанции, а затем по каплям добавляют раствор натрия гидроксида 2 М (около 50-200 мкл) до полного растворения субстанции (pH 8-10). Концентрация рифампицина в полученном растворе - 20 мг в 1 мл. К 2 мл полученного раствора прибавляют 3 мл воды для инъекций для приготовления испытуемого раствора с концентрацией рифампицина 8 мг в 1 мл.

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,5 ЕЭ на 1 мг рифампицина (ОФС "Бактериальные эндотоксины"). Субстанцию растворяют в спирте этиловом 96% при постоянном перемешивании для получения исходного раствора с концентрацией 5 мг рифампицина в 1 мл. Для проведения анализа исходный раствор разводят водой для ЛАЛ-теста не менее чем в 40 раз.

<*> Испытание на депрессорные вещества. Субстанция не должна обладать депрессорным действием (ОФС "Испытание на депрессорные вещества"). Тест-доза - 2 мг субстанции в 0,5 мл приготовленного испытуемого раствора на 1 кг массы животного, внутривенно.

Испытуемый раствор. См. раздел "Аномальная токсичность" для субстанции, предназначенной для приготовления лекарственных форм для парентерального применения.

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Определение проводят спектрофотометрическим методом.

Испытуемый раствор. Около 0,1 г (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, растворяют в метаноле, доводят объем раствора метанолом до метки и перемешивают. 1,0 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, прибавляют фосфатный буферный раствор (pH 7,4), доводят объем раствора фосфатным буферным раствором (pH 7,4) до метки и перемешивают.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре в максимуме поглощения при длине волны 475 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют фосфатный буферный раствор, pH 7,4.

Содержание рифампицина C₄₃H₅₈N₄O₁₂ в субстанции в пересчете на сухое вещество в процентах (X) вычисляют по формуле:

где: A - оптическая плотность испытуемого раствора;

a - навеска субстанции, г;

W - потеря в массе при высушивании, %;

187 - удельный показатель поглощения рифампицина при длине волны 475 нм.

Хранение. В плотно укупоренной упаковке, в защищенном от света месте при температуре не выше 25 °С.

--------------------------------

<*> Контроль по показателям качества "Аномальная токсичность", "Бактериальные эндотоксины" и "Испытание на депрессорные вещества" проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.