ОПРЕДЕЛЕНИЕ

(2S,5R,6R)-3,3-Диметил-7-оксо-6-(2-феноксиацетамидо)-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота.

Феноксиметилпенициллин образуется при росте некоторых штаммов Penicillium notatum или родственных микроорганизмов.

Содержит не менее 95,0% и не более 102,0% по сумме процентного содержания феноксиметилпенициллина C₁₆H₁₈N₂O₅S и 4-гидроксифеноксиметилпенициллина в пересчете на безводное и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

СВОЙСТВА

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок.

<*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Растворим в спирте, очень мало растворим в воде.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина.

2. ТСХ. Определение проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля F₂₅₄, 2 - 10 мкм, на алюминиевой подложке.

Предварительная подготовка пластинки. Пластинку помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет 100% длины пластинки, ее выдерживают в течение 10 мин, вынимают и сушат на воздухе в течение 15 мин. Подготовку пластинки проводят непосредственно перед использованием.

Подвижная фаза (ПФ). Ацетон - аммония ацетата раствор - уксусная кислота ледяная 30:70:5,0.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг субстанции, растворяют в ацетоне и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца феноксиметилпенициллина. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина, растворяют в ацетоне и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 5 мл помещают 25 мг фармакопейного стандартного образца бензилпенициллина калия и 25 мг фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина и доводят водой до метки.

На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг), раствора стандартного образца феноксиметилпенициллина фумаровой кислоты (5 мкг) и раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы (10 мкг). Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт ПФ пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей в потоке теплого воздуха, помещают в камеру, насыщенную парами йода до появления зон адсорбции, и просматривают сквозь стеклянную подложку при дневном освещении.

Результат. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, величине и окраске должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора стандартного образца феноксиметилпенициллина.

3. Качественная реакция. Субстанция должна давать характерную реакцию на формальдегида раствор в серной кислоте (ОФС "Общие реакции на подлинность").

ИСПЫТАНИЯ

Удельное вращение. От +190 до +200 в пересчете на сухое вещество (1% раствор субстанции в спирте 96%, ОФС "Оптическое вращение").

pH. От 2,4 до 4,0 (0,5% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Для приготовления растворов используют подходящую пластиковую посуду. Все растворы хранят при 10 °C не более 42 ч.

Буферный раствор. К 250 мл калия дигидрофосфата раствора 0,2 М прибавляют 500 мл воды, доводят значение pH до 6,5 натрия гидрокарбоната раствором 8,4%, переносят в мерную колбу вместимостью 1 л и доводят объем раствора водой до метки.

Подвижная фаза А (ПФА). Буферный раствор - метанол - вода 10:30:60.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Буферный раствор - вода - метанол 5:35:60.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 80,0 мг субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем раствора буферным раствором до метки.

Раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 2 мл помещают 5 мг фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина для идентификации пиков, содержащего примеси B, D, E, и F, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора сравнения и доводят объем раствора буферным раствором до метки.

Примечание

Примесь A (бензилпенициллин): (2S,5R,6R)-3,3-диметил-7-оксо-6-(2-фенилацетамидо)-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота [61-33-6].

Примесь B: феноксиуксусная кислота, CAS 122-59-8.

Примесь C (6-аминопенициллановая кислота): (2S,5R,6R)-6-амино-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота [551-16-6].

Примесь D (4-гидроксифеноксиметилпенициллин): (2S,5R,6R)-6-[2-(4-гидроксифенокси)ацетамидо]-3,3-диметил-7-оксо-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоновая кислота [20880-67-5].

Примесь E (пеницилловые кислоты феноксиметилпенициллина): (4S)-2-[карбокси[(2-феноксиацетамидо)метил]-5,5-диметил-1,3-тиазолидин-4-карбоновая кислота.

Примесь F (пенилловые кислоты феноксиметилпенициллина): (2RS,4S)-5,5-диметил-2-[(2-феноксиацетамидо)метил]-1,3-тиазолидин-4-карбоновая кислота.

Хроматографируют раствор для проверки разделительной способности хроматографической системы, раствор для проверки чувствительности хроматографической системы, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Феноксиметилпенициллин - 1 (около 11 мин); примесь B - около 0,29; примесь D - около 0,38; примесь E - около 0,55 и 0,61; примесь F - около 0,88 и 0,95.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей B, D, E, и F используют относительное время удерживания соединений, хроматограмму, прилагаемую к фармакопейному стандартному образцу феноксиметилпенициллина для идентификации пиков, и хроматограмму раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора для проверки разделительной способности хроматографической системы отношение максимум/минимум (p/v) между пиками примеси F и феноксиметилпенициллина должно быть не менее 3,0.

На хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика феноксиметилпенициллина должно быть не менее 20.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания примесей площади пиков следующих примесей умножают на соответствующие поправочные коэффициенты: примесь B - 0,5; примесь E - 1,3.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площади пиков примеси E (сумма изомеров) и примеси F (сумма эпимеров) не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%);

- площадь пика примеси B не должна превышать 0,2 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,2%);

- площадь пика любой неидентифицированной примеси не должна превышать 0,15 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,15%);

- сумма площадей пиков всех примесей, кроме примеси D, не должна превышать трехкратную площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 3%).

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,05 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

4-гидроксифеноксиметилпенициллин (примесь D). Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси".

Для расчета содержания примеси D умножают площадь пика примеси D на соответствующий поправочный коэффициент - 1,7.

Допустимое содержание примеси D. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площади пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 1,0%).

Вода. Не более 0,5% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 0,6 мг феноксиметилпенициллина в 0,5 мл фосфатного буферного раствора pH 6,8 - 7,0. Срок наблюдения - 48 ч.

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом ВЭЖХ в условиях испытания "Родственные примеси" со следующими изменениями.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 50 мг (точная навеска) субстанции, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 55,0 мг (точная навеска) фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли, растворяют в буферном растворе и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Содержание феноксиметилпенициллина C₁₆H₁₈N₂O₅S в препарате в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика феноксиметилпенициллина на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика феноксиметилпенициллина на хроматограмме раствора стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска фармакопейного стандартного образца феноксиметилпенициллина калиевой соли, мг;

W - содержание воды и остаточных органических растворителей, %;

P - содержание феноксиметилпенициллина калиевой соли в фармакопейном стандартном образце феноксиметилпенициллина калиевой соли, %;

350,39 - молекулярная масса феноксиметилпенициллина;

388,48 - молекулярная масса феноксиметилпенициллина калиевой соли.

Рассчитывают сумму процентного содержания феноксиметилпенициллина и 4-гидроксифеноксиметилпенициллина.

ХРАНЕНИЕ

В герметично укупоренной упаковке.