Цели, основные принципы и общие правила проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, обновления и отмены"

1 ПОДГОТОВЛЕН Федеральным государственным унитарным предприятием "Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ" (ФГУП "ВНИЦСМВ") на основе собственного перевода на русский язык англоязычной версии стандарта, указанного в пункте 4

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 5 ноября 2013 г. N 61-П)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 798-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32428-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 августа 2014 г.

5 Настоящий стандарт идентичен международному стандарту OECD, Test No. 204 ("Рыба, хроническая токсичность: 14-дневное исследование" ("Fish, Prolonged Toxicity Test: 14-Day Study", IDT)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

7 ПЕРЕИЗДАНИЕ. Март 2019 г.

Настоящий стандарт устанавливает методы измерения смертельных и других наблюдаемых эффектов воздействия вредных факторов на рыб, подвергнутых воздействию тестового вещества.

В настоящем стандарте применены следующие термины с соответствующими определениями:

2.1 полустатический тест (Semi-static test): Тест, где тестовое вещество периодически обновляется (например, каждые 24 ч).

2.2 динамический тест (Flow-through test): Тест, при проведении которого в испытательных аквариумах вода непрерывно обновляется, тестовое вещество переносится водой.

2.3 пороговый уровень смертельного эффекта (Threshold level of lethal effect): Самая низкая концентрация тестового вещества в тестовом растворе, в котором наблюдается смертельный эффект.

2.4 пороговый уровень наблюдаемых эффектов (Threshold level of observed effects): Наименьшая концентрация тестового вещества вызывающая иной эффект, кроме смертельного, у значительного количества подопытных животных.

2.5 NOEC (неэффективная наблюдаемая концентрация) (no observed effect concentration): Самая высокая известная концентрация при проведении испытания, которая не имеет никакого статистически значимого смертельного или другого эффекта.

Для данного испытания не рекомендуются вещества-эталоны. Однако если такое вещество-эталон использовалось, то должны быть приведены результаты.

Через равные промежутки времени в течение теста, который составляет по крайней мере 14 дней, определяют пороговые значения смертельного и других эффектов, а также NOEC. В случае необходимости период проведения испытания должен быть увеличен на 7 - 14 дней.

3.3.1 Смертность животных в конце теста не должна превышать 10%.

3.3.2 Концентрация растворенного кислорода в течение теста должна составлять по крайней мере 60% от концентрации насыщения.

3.3.3 В полустатических тестах можно использовать аэрирование, если оно не приводит к значительной потере тестируемого вещества.

3.3.4 Необходимо подтвердить, что концентрация тестируемого вещества поддерживается на постоянном уровне (она должна составлять 80% от номинальной концентрации) до завершения периода проведения испытания. Результаты должны быть основаны на средних концентрациях, если отклонение от номинальной концентрации больше 20%.

Используется следующее лабораторное оборудование:

- оборудование для определения температуры, pH, концентрации кислорода и жесткости воды;

- соответствующий прибор для регулирования температуры;

- тестовые емкости (аквариумы), изготовленные из химически инертного материала, и удовлетворяющие требованиям теста.

4.2.1 Основные растворы соответствующих концентраций готовятся путем растворения требуемого количества тестируемого вещества в необходимом объеме разбавляющей воды. Для плохо растворимых веществ могут быть применены механические дисперсии или в случае необходимости дисперсии с помощью вспомогательных веществ, таких, как солюбилизаторы, имеющие низкую токсичность для рыб.

4.2.2 Концентрация органических растворителей, эмульгаторов или диспергаторов не должна превышать 100 мг/л в основном растворе.

4.2.3 Испытуемые растворы реактива выбранных концентраций подготовлены путем разбавления основного раствора.

4.2.4 Тест должен быть выполнен без регуляции pH. Если есть доказательства значимых изменений pH воды в тестовой емкости после внесения тестируемого вещества, то следует повторить тест, используя регуляторы pH основного раствора перед его внесением. Регуляция pH выполняется таким образом, чтобы степень концентрации основного раствора не изменялась в значительной степени, и исключалась химическая реакция или физическое осаждение тестируемого вещества. Для регулирования pH предпочтительно использовать HCl или NaOH.

Необходимо использовать один или несколько видов рыб на усмотрение лаборатории, в которой проводится испытание. Однако лучше использовать виды, рекомендованные для определения острой токсичности для рыб [1]. Используемые виды рыб должны быть отобраны на основе таких важных практических критериев, как, например, их доступность в течение года, неприхотливость в содержании, удобство проведения испытания и всех относящихся к тесту экономических, биологических или экологических факторов. Особи рыб должны быть здоровы и без патологий.

Рыбы, упомянутые в [1], исключительно просты в разведении и широко распространены в течение года. Они могут быть выведены и выращены в рыбоводческих хозяйствах или в лаборатории, при условиях, исключающих распространение заболеваний, в том числе паразитарных, и иметь известное происхождение. Эти рыбы доступны повсеместно.

Если при испытании используются другие виды рыб, то метод должен быть адаптирован к соответствующим условиям испытания.

5.1 Если в подготовке основного раствора тестового вещества используется растворитель, то необходимо проводить наблюдение над дополнительной группой контроля, подвергаемой действию самой высокой концентрации растворителя, используемой при испытании.

5.2 В динамическом тесте концентрация вещества в тестируемом растворе может быть определена в начале теста, в полустатическом тесте - в начале, сразу перед первым обновлением тестируемого раствора и в конце эксперимента. Кроме аналитических исследований могут быть использованы и другие методы, позволяющие продемонстрировать, что были выдержаны соответствующие концентрации тестируемого вещества.

5.4.1 Наблюдаемые эффекты определены следующим образом.

Летальные эффекты: рыбы признаются мертвыми при отсутствии дыхательных движений и других реакций на небольшие механические раздражения.

Другие эффекты, кроме летальных, включают эффекты, наблюдаемые в размере и поведении рыб, которые явно отличаются от контрольных, например различные изменения в поведении, реакции на внешние раздражители, изменения внешнего вида рыбы, сокращение или прекращение питания, изменения в длине или весе тела рыбы.

5.4.2 Рыб осматривают, по крайней мере, один раз в день для констатации смерти. Мертвых рыб удаляют.

5.4.3 Необходимо ежедневно документировать все наблюдаемые эффекты, но как минимум, три наблюдения в неделю должны быть проведены.

5.4.4 Измерения pH, растворенного кислорода и температуры должны выполняться не реже двух раз в неделю.

5.4.5 До начала эксперимента вся популяция рыб должна быть взвешена и измерена. По завершении теста все оставшиеся в живых рыбы должны быть взвешены и измерены. Особи рыб не должны взвешиваться или измеряться во время теста, поскольку это может привести к повреждению и (или) смерти.

Если стабильность или гомогенность тестируемых растворов не может быть соблюдена, то интерпретацию результатов необходимо проводить с осторожностью. Следует отметить, что результаты не являются воспроизводимыми.

Отчет о проведении теста должен содержать следующую информацию:

- о тестируемом веществе: данные химической идентификации вещества;

- о подопытных организмах: научное название, размер, поставщик, любая предварительная обработка и т.д.

Условия проведения испытания:

- использованная испытательная процедура (полустатический, или динамический тест, аэрирование, плотность посадки рыбы, и т.д.);

- качественные характеристики воды (подготовка, включая дехлорирование, концентрация растворенного кислорода, pH, жесткость, температура, любая другая имеющаяся информация);

- концентрация растворенного кислорода, pH, температура и общая жесткость тестового раствора в каждый из рекомендуемых периодов наблюдения;

- методы подготовки маточного и тестовых растворов реактива, используемые концентрации;

- информация о способах поддержания концентрации тестового вещества в растворе;

- количество рыб в каждой тестовой концентрации.

Результаты:

- наблюдаемые эффекты для каждой тестовой концентрации в течение всего периода испытания, оформленные в таблицы;

- концентрации, вызвавшие смертельные или другие воздействия, могут быть представлены графически с указанием времени;

- пороговый уровень летального эффекта;

- пороговый уровень наблюдаемых эффектов;

- NOEC;

- совокупная смертность при каждой концентрации на каждый момент наблюдения, если возможно;

- смертность в контрольной группе;

- наблюдения за поведением рыб;

- инциденты в ходе испытания, которые, возможно, повлияли на его результаты;

- любые отклонения от стандарта.