Цели, основные принципы и основной порядок проведения работ по межгосударственной стандартизации установлены ГОСТ 1.0-92 "Межгосударственная система стандартизации. Основные положения" и ГОСТ 1.2-2009 "Межгосударственная система стандартизации. Стандарты межгосударственные, правила и рекомендации по межгосударственной стандартизации. Правила разработки, принятия, применения, обновления и отмены"

1 РАЗРАБОТАН Государственным научным учреждением "Всероссийский научно-исследовательский институт молочной промышленности" Российской академии сельскохозяйственных наук" (ГНУ ВНИМИ Россельхозакадемии)

2 ВНЕСЕН Федеральным агентством по техническому регулированию и метрологии (Росстандарт)

3 ПРИНЯТ Межгосударственным советом по стандартизации, метрологии и сертификации (протокол от 14 ноября 2013 г. N 44)

За принятие проголосовали:

4 Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 22 ноября 2013 г. N 1920-ст межгосударственный стандарт ГОСТ 32219-2013 введен в действие в качестве национального стандарта Российской Федерации с 1 июля 2015 г.

5 Настоящий стандарт разработан с учетом основных нормативных положений международного стандарта ISO 18330:2003 "Молоко и молочные продукты. Руководящие указания по стандартизованному описанию иммунологических или рецепторных анализов для определения антибактериальных остатков" ("Milk and milk products - Guidelines for the standardized description of immunoassays or receptor assays for the detection of antimicrobial residues", NEQ)

6 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ

Информация об изменениях к настоящему стандарту публикуется в ежегодном информационном указателе "Национальные стандарты", а текст изменений и поправок - в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". В случае пересмотра (замены) или отмены настоящего стандарта соответствующее уведомление будет опубликовано в ежемесячном информационном указателе "Национальные стандарты". Соответствующая информация, уведомление и тексты размещаются также в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет

Настоящий стандарт распространяется на сырое, пастеризованное, стерилизованное и предварительно восстановленное сухое молоко и сыворотку, в т.ч. сухую (далее - продукт) и устанавливает качественные иммуноферментные методы определения наличия антибиотиков:

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

- методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа;

- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы;

- метод одновременного определения наличия левомицетина (хлорамфеникола) и стрептомицина;

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

- методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина.

В настоящем стандарте использованы нормативные ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 12.1.004-91 Система стандартов безопасности труда. Пожарная безопасность. Общие требования

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 12.1.005-88 Система стандартов безопасности труда. Общие санитарно-гигиенические требования к воздуху рабочей зоны

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 12.1.007-76 Система стандартов безопасности труда. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 12.1.019-79 Система стандартов безопасности труда. Электробезопасность. Общие требования и номенклатура видов защиты <*>

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

--------------------------------

<*> На территории Российской Федерации действует ГОСТ Р 12.1.019-2009.

(сноска введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 12.4.009-83 Система стандартов безопасности труда. Пожарная техника для защиты объектов. Основные виды. Размещение и обслуживание

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 12.4.021-75 Система стандартов безопасности труда. Системы вентиляционные. Общие требования

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 3145-84 Часы механические с сигнальным устройством. Общие технические условия

ГОСТ 6709-72 Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76 Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 16317-87 Приборы холодильные электрические бытовые. Общие технические условия

ГОСТ 19881-74 Анализаторы потенциометрические для контроля pH молока и молочных продуктов. Общие технические условия

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 26809.1-2014 Молоко и молочная продукция. Правила приемки, методы отбора и подготовка проб к анализу. Часть 1. Молоко, молочные, молочные составные и молокосодержащие продукты

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 27752-88 Часы электронно-механические кварцевые настольные, настенные и часы-будильники. Общие технические условия

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 28498-90 Термометры жидкостные стеклянные. Общие технические требования. Методы испытаний

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 33957-2016 Сыворотка молочная и напитки на ее основе. Правила приемки, отбор проб и методы контроля

(ссылка введена Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Примечание - При пользовании настоящим стандартом целесообразно проверить действие ссылочных стандартов в информационной системе общего пользования - на официальном сайте Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии в сети Интернет или по ежегодному информационному указателю "Национальные стандарты", который опубликован по состоянию на 1 января текущего года, и по выпускам ежемесячного информационного указателя "Национальные стандарты" за текущий год. Если ссылочный стандарт заменен (изменен), то при пользовании настоящим стандартом следует руководствоваться заменяющим (измененным) стандартом. Если ссылочный стандарт отменен без замены, то положение, в котором дана ссылка на него, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.

3.1 Термостат, позволяющий поддерживать температуру от 37 °C до 66 °C с допустимой погрешностью +/- 0,5 °C.

3.2 Баня водяная с терморегулятором, поддерживающая температуру от 37 °C до 66 °C с отклонением от заданной температуры +/- 1 °C.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

3.3 Холодильник бытовой, позволяющий поддерживать температуру от 0 °C до 12 °C по ГОСТ 16317.

3.4 Камера морозильная, позволяющая поддерживать температуру минус (20 +/- 2) °C.

3.5 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

3.6 Термометр лабораторный стеклянный с диапазоном измерения от 0 °C до 100 °C ценой деления шкалы 1 °C по ГОСТ 28498.

3.7 Пипетки вместимостью 0,5 и 1,0 см³ по ГОСТ 29227.

3.8 Вода дистиллированная по ГОСТ 6709.

3.9 Бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

3.10 Тест-наборы для определения наличия антибиотиков:

- тест-набор N 1 <1> для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий закрытые крышкой пробирки с 3,3', 5,5'-тетраметилбензидином и специфическими рецепторами; пипетки вместимостью 0,45 см³; индикаторное устройство с диметилсульфоксидом;

- тест-набор N 2 <2> для определения антибиотиков бета-лактамного типа, включающий флаконы с лиофилизатом, индикаторные полоски хроматографической бумаги, пипетки вместимостью 0,15 см³;

- тест-набор N 3 <3> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги; пипетками вместимостью 0,2 см³ с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с массовой концентрацией пенициллина-G 0,004 мкг/г и окситетрациклина 0,01 мкг/г, красителя ("Positive Standard"); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя ("Negative Standard");

- тест-набор N 4 <4> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 1;

- тест-набор N 5 <5> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий закрытые крышкой флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см³ с наконечниками;

- тест-набор N 6 <6> для одновременного определения левомицетина и стрептомицина, включающий флаконы; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетки вместимостью 0,2 см³ или 0,3 см³;

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

- тест-набор N 7 <7> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина , включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторными полосками хроматографической бумаги; пипетками вместимостью 0,2 см³ с наконечниками; контрольные растворы: пробирки или флаконы со смесью сухого молока с концентрацией пенициллина-G 0,004 мг/кг, окситетрациклина 0,01 мг/кг, стрептомицина 0,2 мг/кг, хлорамфеникола 0,0003 мг/кг и красителя ("Positive Standard"); пробирки и флаконы со смесью сухого молока без антибиотиков и красителя ("Negative Standard");

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

- тест-набор N 8 <8> для одновременного определения антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина в соответствии с требованиями, предъявляемыми к тест-набору N 6;

- тест-набор N 9 <9> для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы, включающий пластину микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см³ с наконечниками (дополнительно);

(перечисление введено Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

- тест-набор N 10 <10> для одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина, включающий пеналы с пластинами микропробирок со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; индикаторные полоски хроматографической бумаги; пипетку вместимостью 0,2 см³ с наконечниками (дополнительно).

(перечисление введено Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

--------------------------------

<1> Тест-набор "СНАП Бета-Лактам СТ" (IDEXX, США).

<2> Тест-набор "Delvotest BLF" (DSM Food Specialties B.V., Нидерланды).

<3> Тест-набор "Twinsensor^BT" (Unisensor, Бельгия).

<4> Тест-набор "СНАП Дуо Бета-Тетра СТ" (IDEXX, США).

<5> Тест-набор "Betastar Combo" (Neogen Corporation, США).

<6> Тест-набор "Reveal for CAP/STREP" (Neogen Corporation, США).

<7> Тест-набор "4sensor^BTCS" (Unisensor, Бельгия).

<8> Тест-набор "Betastar 4D" (Neogen Corporation, США).

<9> Тест-набор "PROQUI-TEST R 10 ppb" (Proquiga Biotech, SA, Испания).

<10> Тест-набор "PROQUI-TEST 4" (Proquiga Biotech, SA, Испания).

Сноски <1> - <10> с указанными тест-наборами являются рекомендуемыми к применению.

(сноски в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Допускается использование другого оборудования с техническими характеристиками и средств измерений с метрологическими характеристиками, а также материалов, реактивов и посуды по качеству не ниже вышеуказанных.

3.11 Буфер для восстановления сухой сыворотки Unisensor Dilution Buffer (Unisensor, Бельгия).

(п. 3.11 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

3.12 Раствор гидроксида натрия молярной концентрации c (NaOH) = 1 моль/дм³.

(п. 3.12 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

3.13 Анализатор потенциометрический по ГОСТ 19881 2-го класса точности диапазоном измерений от 5,5 до 8,0 ед. pH с погрешностью +/- 0,05 ед. pH.

(п. 3.13 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

3.14 Криостат, позволяющий поддерживать температуру (4 +/- 2) °C и (6 +/- 2) °C.

(п. 3.14 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

3.15 Дозаторы автоматические или механические одноканальные или многоканальные переменной вместимости 0,01 - 0,1 и 0,1 - 1 см³, с допускаемым относительным СКО не более 8,0%.

(п. 3.15 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

3.16 Часы 2-го класса точности по ГОСТ 27752.

(п. 3.16 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Отбор проб продукта - по ГОСТ 26809.1, ГОСТ 33957 и нормативным документам, действующим на территории государств, принявших стандарт.

Для восстановления сухой сыворотки готовят раствор буфера: при температуре (40 +/- 2) °C буфер по 3.11 разводят дистиллированной водой в соотношении 1:1 (V/V). 1,5 г сухой сыворотки добавляют к 8,5 см³ раствора буфера и измеряют значение pH полученного раствора. Если значение менее 6 ед. pH, то кислотность раствора приводят к значению 6 - 7 ед. pH при помощи раствора гидроксида натрия по 3.12.

5.1 Методы определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа

5.1.1 Метод с использованием тест-набора N 1

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

5.1.1.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 1 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 °C до 30 °C в течение 5 мин.

Анализируемое молоко хранят в холодильнике при температуре от 0 °C до 10 °C.

Вскрывают упаковку тест-набора и проверяют положение шарика реактива в пробирке, который должен находиться на дне. При необходимости шарик реактива устанавливают на дно пробирки встряхиванием.

5.1.1.2 Проведение определения

Снимают крышку с пробирки. Пипетку вместимостью 0,45 см³ наполняют анализируемым молоком до метки и выливают в пробирку. Пробирку закрывают крышкой и перемешивают круговыми движениями до растворения реактива.

Индикаторное устройство устанавливают на горизонтальной поверхности так, чтобы приемная воронка для заливания анализируемой смеси находилась слева от оператора. Содержимое пробирки переливают в приемную воронку индикаторного устройства.

В момент начала изменения цвета активационного окна клавишу индикаторного устройства нажимают до щелчка. Через 6 мин считывают результат. Стабильность окраски сохраняется в течение 30 мин.

5.1.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.1 (приложение А).

Если после проведения определения по 5.1.1.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.1.2 Метод с использованием тест-набора N 2

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа с белковыми рецепторами, содержащимися в лиофилизате, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.1.2.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 2 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C не более 9 мес. Перед началом работы необходимое количество флаконов извлекают из тест-набора, выдерживают при температуре от 15 °C до 30 °C, после чего открывают, удаляя фольгу.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (64 +/- 2) °C.

5.1.2.2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,15 см³ наполняют анализируемым молоком, выливают во флакон и перемешивают круговыми движениями.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (64 +/- 2) °C в течение 2 мин. После этого флакон достают из термостата (водяной бани), перемешивают круговыми движениями до растворения реактива и помещают обратно.

Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают в течение 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.1.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.2 (приложение А).

Зона в верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.1.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной.

Большая интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие ее окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы

5.2.1 Метод с использованием тест-набора N 3

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.

5.2.1.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 3 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество пеналов из тест-набора выдерживают при температуре от 15 °C до 30 °C.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (40 +/- 3) °C и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

Восстановление контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard"

В стеклянные пробирки с контрольными растворами пипеткой вносят по 1 см³ дистиллированной воды (0,4 см³ для контрольных растворов в пластиковых флаконах) и перемешивают до образования однородного раствора.

Срок хранения восстановленных контрольных растворов в морозильной камере при температуре минус 20 °C - не более 6 мес. Не допускается повторное замораживание восстановленных контрольных растворов.

5.2.1.2 Проведение определения

Микропробирки извлекают из пенала и помещают в термостат или на водяную баню с температурой (40 +/- 3) °C. В каждую микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0,2 см³ анализируемого продукта, перемешивают, наполняя и сливая содержимое с помощью пипетки пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают в термостате (на водяной бане) в течение 3 мин.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.

Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40 +/- 3) °C в течение 3 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0,2 см³ раствора "Positive Standard", в другую - 0,2 см³ раствора "Negative Standard".

5.2.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.3 (приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в продукте повторяют с новым тест-набором.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом продукте.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом продукте.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

При проведении определений с применением контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard" обработку результатов проводят, как указано выше.

5.2.2 Метод с использованием тест-набора N 4

Метод основан на иммуноферментной реакции, в процессе которой антибиотики бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы захватываются специфическими белковыми рецепторами, меченными ферментом с индикатором, с образованием химически прочного комплекса, блокирующего свойство индикатора изменять цвет продуктов химических реакций.

Наличие антибиотиков устанавливают визуально, сравнивая интенсивность цвета зон определения антибиотиков с интенсивностью цвета контрольной зоны индикаторного устройства.

5.2.2.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.1.1.1 для тест-набора N 4 по 3.10.

5.2.2.2 Проведение определения в соответствии с 5.1.1.2.

5.2.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность окрашенных в синий цвет зон в окнах индикаторного устройства в соответствии с А.4 (приложение А).

Если после проведения определения по 5.2.2.2 изменения цвета контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Большая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2.3 Метод с использованием тест-набора N 5

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.2.3.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 5 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 °C до 30 °C в течение 10 мин.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (37,5 +/- 1,0) °C.

Флаконы с реагентом встряхивают для осаждения содержимого на дне.

5.2.3.2 Проведение определения

Снимают крышку с флакона. Пипеткой с наконечником вносят 0,2 см³ анализируемого молока во флакон, закрывают его крышкой, встряхивают до растворения реактива и снимают крышку.

Для каждого флакона используют новый наконечник на пипетку.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню и выдерживают при температуре (37,5 +/- 1) °C в течение 5 мин. Затем во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают 3 мин. По истечении времени индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.2.3.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.5 (приложение А).

Зона центральной части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена над контрольной зоной. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы - под контрольной зоной.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.2.4 Метод с использованием тест-набора N 9

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа и тетрациклиновой группы со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.2.4.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 9 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C не более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.

5.2.4.2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,2 см³ наполняют анализируемым молоком, выливают в микропробирку и перемешивают с ее содержимым, наполняя и сливая его с помощью пипетки пять раз, до образования розового цвета.

Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 5 - 10 с, затем извлекают и кладут на чистую сухую поверхность. По истечении 5 - 7 мин считывают результат.

5.2.4.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.5.1 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.2.4.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной второй.

интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения.

(п. 5.2.4 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

5.3 Метод одновременного определения наличия левомицетина и стрептомицина с использованием тест-набора N 6

Метод основан на реакции комплексообразования левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.3.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 6 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре от 2 °C до 8 °C не более 12 мес. Перед началом работы необходимое количество тест-наборов выдерживают при температуре от 15 °C до 30 °C в течение 10 мин.

Термостат или водяную баню нагревают до температуры (47,5 +/- 1,0) °C.

5.3.2 Проведение определения

Пипеткой вносят 0,2 см³ анализируемого молока во флакон.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5 +/- 1) °C в течение 5 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат.

5.3.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.6 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения левомицетина на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной второй.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.4 Методы одновременного определения наличия антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина

5.4.1 Метод с использованием тест-набора N 7

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

Метод распространяется на молоко и сыворотку, в том числе сухую.

5.4.1.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.2.1.1 для тест-набора N 7 по 3.10.

5.4.1.2 Проведение определения

Микропробирки извлекают из пенала и помещают в термостат или на водяную баню с температурой (40 +/- 3) °C. В каждую микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0,2 см³ анализируемого продукта, перемешивают, наполняя и сливая содержимое с помощью пипетки пять раз для получения однородного раствора, и выдерживают в термостате (на водяной бане) в течение 5 мин.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Для каждой микролунки используют новый наконечник на пипетку.

Индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из пенала, помещают в микропробирки и выдерживают в термостате (на водяной бане) при температуре (40 +/- 3) °C в течение 5 мин. По истечении времени индикаторные полоски хроматографической бумаги извлекают из микропробирок и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Определение с использованием контрольных растворов проводят, как указано выше, при этом в одну микропробирку пипеткой с наконечником вносят 0,2 см³ раствора "Positive Standard", в другую - 0,2 см³ раствора "Negative Standard".

5.4.1.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторных полосках хроматографической бумаги в виде линий, в соответствии с А.7 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.1.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в продукте повторяют с новым тест-набором.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом продукте расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной четвертой.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом продукте.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом продукте.

(в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

При проведении определений с применением контрольных растворов "Positive Standard" и "Negative Standard" обработку результатов проводят, как указано выше.

5.4.2 Метод с использованием тест-набора N 8

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, левомицетина и стрептомицина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.2.1 Подготовка к определению в соответствии с 5.3.1 для тест-набора N 8 по 3.10.

5.4.2.2 Проведение определения

Пипеткой вносят 0,3 см³ анализируемого молока во флакон.

Флакон помещают в термостат или на водяную баню. Во флакон, находящийся в термостате (на водяной бане), помещают индикаторную полоску хроматографической бумаги и выдерживают при температуре (47,5 +/- 1) °C в течение 10 мин. Затем индикаторную полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона и считывают результат способом, рекомендуемым изготовителем тест-набора.

(п. 5.4.2.2 в ред. Изменения N 1, введенного в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

5.4.2.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.8 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.2.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы в анализируемом молоке расположена под контрольной зоной первой. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа - под контрольной зоной четвертой.

Большая интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует об отсутствии антибиотиков в анализируемом молоке.

Меньшая или равная интенсивность цвета зоны определения антибиотиков, по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие окрашивания свидетельствует о наличии антибиотиков в анализируемом молоке.

5.4.3 Метод с использованием тест-набора N 10

Метод основан на реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа, тетрациклиновой группы, стрептомицина и левомицетина со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на индикаторных полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционные и контрольную зоны.

5.4.3.1 Подготовка к определению

Тест-набор N 10 по 3.10 хранят в холодильнике при температуре (6 +/- 2) °C не более 12 мес с даты производства. Перед началом работы необходимое количество микропробирок извлекают из тест-набора.

5.4.3.2 Проведение определения

Пипетку вместимостью 0,2 см³ наполняют анализируемым молоком, выливают в микропробирку, перемешивают с ее содержимым, наполняя и сливая его с помощью пипетки пять раз, до образования розового цвета, и выдерживают в течение 3 мин.

Индикаторную полоску хроматографической бумаги помещают в микропробирку на 7 - 8 мин, затем извлекают, кладут на чистую сухую поверхность и считывают результат.

5.4.3.3 Обработка результатов

Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появившихся на индикаторной полоске хроматографической бумаги в виде линий в соответствии с А.9 (приложение А).

Зона верхней части индикаторной полоски хроматографической бумаги является контрольной. Если после проведения определения по 5.4.3.2 окрашивания контрольной зоны не произошло, то определение наличия антибиотиков в молоке повторяют с новым тест-набором.

Зона определения антибиотиков бета-лактамного типа на индикаторной полоске хроматографической бумаги расположена под контрольной зоной первой. Зона определения антибиотиков тетрациклиновой группы - под контрольной зоной второй. Зона определения стрептомицина - под контрольной зоной третьей. Зона определения левомицетина - под контрольной зоной четвертой.

интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны свидетельствует о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке менее предела обнаружения.

Меньшая или равная интенсивность цвета зон определения антибиотиков по сравнению с интенсивностью цвета контрольной зоны, а также отсутствие их окрашивания свидетельствуют о том, что концентрация определяемых антибиотиков в анализируемом молоке больше или равна пределу обнаружения.

(п. 5.4.3 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

Наименьшие пределы определения антибиотиков в молоке и молочных продуктах представлены в таблице 1.

При выполнении работ необходимо, чтобы помещение лаборатории было оборудовано общей приточно-вытяжной вентиляцией в соответствии с требованиями ГОСТ 12.4.021 и содержание вредных веществ в воздухе рабочей зоны не превышало норм, установленных ГОСТ 12.1.005.

Требования техники безопасности при работе с химическими реактивами - в соответствии с ГОСТ 12.1.007; требования техники безопасности при работе с электроустановками - в соответствии с ГОСТ 12.1.019.

Помещение лаборатории должно соответствовать требованиям пожарной безопасности в соответствии с ГОСТ 12.1.004 и должно быть оснащено средствами пожаротушения в соответствии с ГОСТ 12.4.009.

К проведению определения наличия антибиотиков допускаются лица, имеющие специальное образование по профилю выполняемых работ, прошедшие обучение приемам работы с оборудованием, освоившие выполнение предусмотренных методикой операций, ранее не принимавшие антибактериальные и противовирусные препараты в течение периода их полного выведения из организма в соответствии с инструкцией к конкретному препарату.

А.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 1 приведены на рисунке А.1.

А.2 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 2 приведены на рисунке А.2.

А.3 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 3 приведены на рисунке А.3.

А.4 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 4 приведены на рисунке А.4.

А.5 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 5 приведены на рисунке А.5.

А.5.1 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 9 приведены на рисунке А.5.1.

(п. А.5.1 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)

А.6 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 6 приведены на рисунке А.6.

А.7 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-наборов N 7 приведены на рисунке А.7.

А.8 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 8 приведены на рисунке А.8.

А.9 Примеры результатов определения наличия антибиотиков с использованием тест-набора N 10 приведены на рисунке А.9.

(п. А.9 введен Изменением N 1, введенным в действие Приказом Росстандарта от 13.12.2017 N 1952-ст)