1. Разработан Всероссийским научно-исследовательским институтом зерна и продуктов его переработки (ВНИИЗ).

Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 2 "Зерно, продукты его переработки и маслосемена".

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 13 мая 1999 г. N 162.

3. Настоящий стандарт, кроме раздела 2, представляет собой аутентичный текст ИСО 9648:1988 "Сорго. Определение содержания таннинов".

4. Введен впервые.

Настоящий стандарт устанавливает универсальный метод определения содержания таннинов в зерне сорго.

Метод не является специфическим только для одного отдельного типа полифенолов. Его эффективность подтверждена высокой отрицательной корреляцией, которая наблюдается между энергией обмена веществ, установленной в биологических опытах при использовании зерна сорго в качестве корма для кур, и результатами, полученными данным методом.

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74 Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Технические условия

ГОСТ 25336-82 Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29143-91 (ИСО 712-85) Зерно и зернопродукты. Определение влажности (рабочий контрольный метод)

ГОСТ Р 50436-92 (ИСО 950-79) Зерновые. Отбор проб зерна.

Сущность метода состоит в экстрагировании таннинов диметилформамидом, центрифугировании и последующем их извлечении путем добавления аммоний-железо (III) цитрата и аммиака к аликвотной части верхнего слоя жидкости и в спектрофотометрическом измерении оптической плотности полученного раствора при длине волны в 525 нм. Определение содержания таннинов проводят по градуировочному графику, построенному по дубильной кислоте.

Все реактивы должны быть квалификации чистый для анализа ч.д.а. Используют дистиллированную воду или воду, соответствующую по чистоте дистиллированной.

4.1. Дубильная кислота, раствор концентрации 2 г/дм3.

Поскольку качество дубильной кислоты оказывает определенное влияние на градуировочный график, то при сопоставлении результатов, полученных в разных лабораториях, рекомендуется использовать дубильную кислоту фирмы "Merck" (номер 773 по фирменному каталогу) <*>.

--------------------------------

<*> Дубильная кислота фирмы "Merck" с каталожным номером 773 упомянута как пример коммерчески доступного препарата. Информация приведена для удобства пользования настоящим стандартом и не должна рассматриваться как реклама упомянутого продукта.

Приготовленный раствор можно хранить одну неделю.

4.2. Аммиак, раствор концентрации 8,0 г/дм3.

4.3. Диметилформамид, раствор концентрации 75% (по объему).

Помещают 75 см3 диметилформамида в мерную колбу емкостью 100 см3. Разбавляют водой и после охлаждения доводят до метки.

Внимание: Диметилформамид вреден для здоровья при вдыхании или контакте с кожей.

Он также раздражает глаза.

4.4. Аммоний-железо (III) цитрат с содержанием железа от 17 до 20% (по массе), раствор концентрации 3,5 г/дм3, приготовленный за 24 ч до использования.

Поскольку содержание железа в аммоний-железо (III) цитрате оказывает влияние на результаты анализа, то это следует обязательно учитывать.

При анализе используют следующую аппаратуру.

5.1. Механическая дробилка, обеспечивающая получение частиц, полностью проходящих через сито (5.2).

5.2. Сито с отверстиями размером 0,5 мм.

5.3. Центрифуга с фактором разделения 3000 (приблизительно 3000 g).

5.4. Пробирки для центрифугирования емкостью около 50 см3, с притертыми пробками, обеспечивающими герметичность закрывания.

5.5. Механическая мешалка с возвратно-поступательным движением или магнитная мешалка.

5.6. Механическая качалка для пробирок (типа "Vortex").

5.7. Спектрофотометр с кюветами толщиной 10 мм, позволяющий проводить измерения при длине волны в 525 нм.

5.8. Пипетки 1, 5 и 20 см3 по ГОСТ 29227.

5.9. Пипетки градуированные 5 и 10 см3 по ГОСТ 29227.

5.10. Пробирки типа П1 по ГОСТ 25336.

5.11. Колбы мерные 20 см3 по ГОСТ 1770.

Отбор проб проводят в соответствии с ГОСТ Р 50436.

Зерно сорго, предназначенное для определения содержания таннинов, в высушенном виде можно хранить в течение 3 мес в защищенном от света месте.

Из лабораторной пробы зерна сорго удаляют все посторонние примеси и измельчают зерно на механической дробилке (5.1) до получения частиц, полностью проходящих через сито (5.2). Продукт после измельчения тщательно перемешивают.

Так как таннины в измельченных продуктах быстро окисляются, анализ рекомендуется проводить сразу же после измельчения.

Примечание. Измельченный продукт можно хранить в течение 3 дней, если он защищен от света и высушен.

8.1. Определение влажности анализируемой пробы зерна

Влажность анализируемой пробы зерна определяют по ГОСТ 29143.

8.2. Навеска для анализа

Берут навеску анализируемой пробы зерна (раздел 7) массой около 1 г, взвешивают с погрешностью +/- 1 мг и помещают в пробирку для центрифугирования (5.4).

8.3. Проведение анализа

8.3.1. Пипеткой (5.8) отмеряют 20 см3 раствора диметилформамида (4.3) в пробирку для центрифугирования. Герметично закрывают пробирку пробкой и перемешивают в течение (60 +/- 1) мин на мешалке (5.5). Затем центрифугируют в течение 10 мин при 3000 g.

8.3.2. Отбирают пипеткой (5.8) 1 см3 жидкости из верхнего слоя (8.3.1) и переносят ее в пробирку (5.10). Последовательно туда же добавляют пипеткой 6 см3 воды и 1 см3 раствора аммиака (4.2), а затем встряхивают на качалке (5.6) в течение 10 с.

8.3.3. Отбирают пипеткой (5.8) 1 см3 жидкости из верхнего слоя (8.3.1) и переносят ее в пробирку (5.10). Последовательно туда же добавляют пипеткой 5 см3 воды и 1 см3 раствора аммоний-железо (III) цитрата (4.4), встряхивают в течение 10 с на качалке (5.6), затем добавляют пипеткой 1 см3 раствора аммиака (4.2) и снова встряхивают в течение 15 с на качалке (5.6).

8.3.4. Полученные в 8.3.2 и 8.3.3 растворы переносят в измерительные кюветы и через (10 +/- 1) мин после завершения операций по 8.3.2 и 8.3.3 измеряют на спектрофотометре (5.7) оптическую плотность раствора при длине волны 525 нм, используя в качестве контрольного раствора дистиллированную воду.

За результат определения принимают разницу между двумя значениями оптической плотности, полученными при измерении.

8.4. Количество определений

Из одной анализируемой пробы отбирают две навески и проводят два определения.

8.5. Построение градуировочного графика

Строят градуировочный график в день измерений, как описано ниже:

а) готовят шесть мерных колб емкостью по 20 см3 и градуированной пипеткой (5.9) помещают в них: соответственно 0, 1, 2, 3, 4 и 5 см3 раствора дубильной кислоты (4.1). Доводят до метки раствором диметилформамида (4.3). Полученная таким образом калибровочная шкала соответствует содержанию дубильной кислоты 0; 0,1; 0,2; 0,3; 0,4 и 0,5 мг/см3;

б) в пробирки (5.10) отмеряют пипеткой по 1 см3 каждого из этих растворов и последовательно добавляют пипеткой (5.8) по 5 см3 воды и 1 см3 раствора аммоний-железо (III) цитрата (4.4). Встряхивают в течение 10 с на качалке. Затем добавляют по 1 см3 раствора аммиака (4.2) и снова встряхивают в течение 15 с на качалке (5.6).

Полученные таким образом растворы переносят в измерительные кюветы и через (10 +/- 1) мин определяют на спектрофотометре оптическую плотность раствора при длине волны 525 нм, используя в качестве контрольного раствора дистиллированную воду.

в) строят градуировочный график, откладывая значения поглощения на ординате, а соответствующие концентрации дубильной кислоты в миллиграммах на кубический сантиметр (в пределах калибровочной шкалы) - на абсциссе.

Кривая не должна проходить через начало координат и ее не следует корректировать с учетом нуля в выбранной шкале концентраций.

Массовую долю таннинов X, %, (отношение массы дубильной кислоты к массе сухого вещества) определяют по формуле

где c - концентрация дубильной кислоты, найденная для испытываемого раствора по градуировочному графику, мг/см3 (8.5в);

m - масса навески, г (8.2);

H - влажность анализируемой пробы (8.1).

За результат анализа принимают среднее арифметическое значение двух определений, при условии обеспечения допустимых норм расхождений по сходимости, определяемых с помощью линейной интерполяции по таблице 1.

Во Франции проведены межлабораторные испытания, в которых приняли участие девять лабораторий. Результаты восьми из них подвергнуты статистическому анализу. В каждой лаборатории проводилось по три измерения для одной и той же пробы. Результаты статистической обработки данных приведены в таблице 1.

В отчете о результатах анализа должны быть указаны использованный метод, изготовитель и каталожный номер использованной дубильной кислоты, а также полученные результаты. Должны быть отмечены все оперативные детали, не оговоренные в настоящем стандарте или считающиеся необязательными, а также все случайные факторы, которые могут оказать влияние на результаты.

Отчет должен включать всю информацию, необходимую для полной идентификации пробы.