СПРАВКА
Источник публикации
М.: ИПК Издательство стандартов, 1998
Примечание к документу
Документ утратил силу с 1 сентября 2019 года в связи с изданием Приказа Росстандарта от 24.08.2018 N 527-ст. Взамен введен в действие ГОСТ 34448-2018.
Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880).
Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Таможенного союза "Требования безопасности пищевых добавок, ароматизаторов и технологических вспомогательных средств" (ТР ТС 029/2012) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 02.10.2012 N 258).
С 1 июля 2003 года до вступления в силу технических регламентов акты федеральных органов исполнительной власти в сфере технического регулирования носят рекомендательный характер и подлежат обязательному исполнению только в части, соответствующей целям, указанным в пункте 1 статьи 46 Федерального закона от 27.12.2002 N 184-ФЗ.
Документ введен в действие с 1 января 2000 года.
Название документа
"ГОСТ Р 51198-98 (ИСО 4134-78). Государственный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.08.1998 N 336)
"ГОСТ Р 51198-98 (ИСО 4134-78). Государственный стандарт Российской Федерации. Мясо и мясные продукты. Метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28.08.1998 N 336)
Содержание
Постановлением Госстандарта
России
от 28 августа 1998 г. N 336
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
МЯСО И МЯСНЫЕ ПРОДУКТЫ
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ L-(+)-ГЛУТАМИНОВОЙ КИСЛОТЫ
Meat and meat products.
Method for determination of L-(+)-glytamic
acid content
ГОСТ Р 51198-98
(ИСО 4134-78)
Группа Н19
ОКС 67.120.10
ОКСТУ 9209
Дата введения
1 января 2000 года
1. Разработан Московской государственной академией пищевых производств.
Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 335 "Методы испытаний агропромышленной продукции на безопасность".
2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 28 августа 1998 г. N 336.
3. Настоящий стандарт представляет собой аутентичный текст международного стандарта ИСО 4134-78 "Мясо и мясные продукты. Определение содержания L-(+)-глутаминовой кислоты" с дополнительными требованиями, отражающими потребности экономики страны (2, 4, 6.6, 6.8, 6.12, 6.13, 7.1 и 9.1).
4. Введен впервые.
Настоящий стандарт распространяется на мясо и мясные продукты и устанавливает метод определения L-(+)-глутаминовой кислоты.
ГОСТ 9792-73 Колбасные изделия и продукты из свинины, баранины, говядины и мяса других видов убойных животных и птиц. Правила приемки и методы отбора проб
ГОСТ 9793-74 Продукты мясные. Методы определения влаги
Массовая доля L-(+)-глутаминовой кислоты - массовая доля L-(+)-глутаминовой кислоты, определенная в соответствии с настоящим стандартом и выраженная в процентах.
L-(+)-глутаминовую кислоту экстрагируют из пробы продукта, взятой на испытание, ледяным раствором хлорной кислоты. Смесь центрифугируют, фильтруют и доводят активную кислотность фильтрата до требуемого значения. Проводят ферментативное преобразование L-(+)-глутамата в 
-кетоглутарат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГДГ):
-кетоглутарат в ходе реакции с никотинамидадениндинуклеотидом (НАД) в присутствии глутаматдегидрогеназы (ГДГ):
Затем окисляют эквивалентное количество восстановленной формы НАДН хлоридом йодонитротетразолия (ИНТ) в присутствии липоаминдегидрогеназы (ЛАДГ):
Измеряют массовую долю образовавшегося формазана на спектрофотометре при длине волны 492 нм.
Все реактивы должны быть аналитического качества (не ниже х.ч.). Все растворы, кроме растворов неорганических соединений (5.1 и 5.2), должны храниться в закрытой посуде из темного стекла, тщательно вымытой и пропаренной или стерилизованной.
Вода, используемая для приготовления растворов ферментов, должна быть деминерализованной или бидистиллированной, полученной в стеклянном дистилляторе.
Вода, используемая для приготовления растворов химических реагентов и подготовки проб, должна быть дистиллированной или деминерализованной.
Примечание. Однократно дистиллированная вода может содержать ионы металлов, которые снижают активность ферментов, а деминерализованная вода может содержать микроорганизмы, увеличивающие неспецифическую фоновую ферментативную активность и искажающие результаты анализа.
Препарат НАД должен содержать не менее 90% основного вещества.
L-(+)-глутаминовая кислота должна содержать не менее 98% основного вещества.
Допускается использовать имеющиеся в продаже готовые наборы реактивов при условии соответствия качества реактивов требованиям настоящего стандарта.
8,6 см3 раствора хлорной кислоты массовой доли 70% и плотности 1,67 г/см3 помещают в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки водой.
Примечание. При использовании хлорной кислоты меньшей массовой доли проводят перерасчет объема кислоты, используемой для осаждения белков.
Растворяют 56,1 г гидроксида калия (KOH) в воде, доводят объем раствора до 500 см3.
5.3.1. Растворяют 1,86 г гидрохлорида триэтаноламина в воде, доводят активную кислотность раствора до 8,6 pH раствором гидроксида калия (5.2), используя для измерений pH-метр. Затем добавляют 0,68 г октилфенолдекаэтиленгликолевого эфира (например, Тритон X = 100) и доводят объем раствора до 100 см3 водой.
5.3.2. Растворяют 0,86 г двузамещенного фосфорнокислого калия 
и 0,007 г однозамещенного фосфорнокислого калия 
в воде и доводят объем раствора до 100 см3.
и 0,007 г однозамещенного фосфорнокислого калия в воде и доводят объем раствора до 100 см3.Раствор хранят при температуре 4 °C.
Навеску НАД массой 0,025 г растворяют в 5,0 см3 воды в небольшой колбе со шлифом, колбу закрывают пробкой.
Раствор устойчив не менее 1 мес при температуре 4 °C.
5.5. Раствор йодонитротетразолия [2-(р-йодофенил)-3-(р-нитрофенил)-5-фенилтетразолия] хлорида (ИНТ-хлорида)
Растворяют 0,030 г ИНТ-хлорида в 50 см3 воды, колбу закрывают пробкой.
Раствор устойчив не менее 2 мес при температуре 4 °C в темноте.
Растворяют 0,003 г лиофильно высушенной липоаминдегидрогеназы в 1 см3 воды.
Раствор устойчив не менее трех недель при температуре 4 °C.
Используют раствор глутаматдегидрогеназы концентрации 10 мг/см3, свободный от сульфата аммония, этилендиаминтетрауксусной кислоты и глутаминазы, поставляемый в готовом виде (например, в расфасовке по 1,0 см3), удельной активностью не менее 900 Е/см3.
Раствор устойчив не менее 12 мес при температуре 4 °C.
Растворяют 0,050 г L-(+)-глутаминовой кислоты в 25 см3 воды. Активную кислотность раствора устанавливают 7,0 pH раствором гидроксида калия (5.2), после чего доводят объем раствора до 50 см3.
Раствор хранят при температуре 4 °C и непосредственно перед использованием разводят водой в соотношении объемов 1:49.
Обычная лабораторная аппаратура, а также указанная в 6.1 - 6.11.
6.1. Мясорубка механическая лабораторная, снабженная перфорированной пластинкой с отверстиями диаметром не более 4 мм.
6.3. Центрифуга лабораторная с пробирками вместимостью 50 или 100 см3.
6.4. Иономер или pH-метр диапазоном измерений от 1 до 14 pH и допускаемой погрешностью +/- 0,05 pH.
6.7. Дозаторы пипеточные объемами доз 25, 50 и 100 см3 и относительной погрешностью дозирования +/- 1%.
6.8. Пипетки градуированные вместимостью 0,05; 0,2; 0,5 и 2,5 см3 и допускаемой относительной погрешностью +/- 1%.
6.9. Шпатели пластиковые или палочки стеклянные для перемешивания содержимого кюветы при проведении фотометрических измерений.
6.10. Спектрофотометр (фотометр) со следующими техническими характеристиками: спектральный интервал - не более 10 нм; интервал измерений оптической плотности - от 0,000 до 2,000; погрешность установки длины волны - +/- 3 нм; среднее квадратическое отклонение случайной составляющей погрешности измерений - не более 0,15%.
6.12. Термометр жидкостный стеклянный интервалом измерений от 0 до 100 °C, допускаемой погрешностью измерений +/- 2 °C.
6.13. Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г и допускаемой погрешностью +/- 0,001 г.
7.1. Отбор проб - по ГОСТ 9792.
7.2. Пробу массой не менее 200 г, полученную из репрезентативной выборки, хранят в условиях, предотвращающих порчу и изменение состава.
Образец пробы гомогенизируют, дважды пропуская через мясорубку (6.1) и тщательно перемешивая.
Образец хранят не более 24 ч в заполненном доверху и герметически закрытом контейнере таким образом, чтобы предотвратить порчу или изменение состава.
Взвешивают приблизительно 50 г исследуемого образца с точностью до 10 мг и помещают навеску образца в лабораторный миксер (6.2).
8.3. Приготовление экстракта
8.3.1. К навеске образца в лабораторном миксере добавляют 100 см3 охлажденного льдом раствора хлорной кислоты (5.1) и гомогенизируют.
8.3.2. Часть гомогенизата помещают в центрифужную пробирку и центрифугируют 10 мин при угловой скорости 
, затем, осторожно отодвинув слой жира, отфильтровывают супернатант через гофрированный бумажный фильтр (6.5) в коническую колбу вместимостью 200 см3. Первые 10 см3 фильтрата выбрасывают.
, затем, осторожно отодвинув слой жира, отфильтровывают супернатант через гофрированный бумажный фильтр (6.5) в коническую колбу вместимостью 200 см3. Первые 10 см3 фильтрата выбрасывают.8.3.3. 50 см3 подготовленного раствора, который может быть слегка мутным, переносят в стаканчик вместимостью 100 см3 и доводят активную кислотность раствора до 10 pH раствором гидроксида калия (5.2).
8.3.4. Количественно переносят содержимое стаканчика в мерную колбу вместимостью 100 см3 и доводят объем раствора до метки водой.
8.3.5. Раствор охлаждают в ледяной бане 20 мин и фильтруют через гофрированный бумажный фильтр (6.5), отбросив первые 10 см3 фильтрата.
8.3.6. 25 см3 фильтрата переносят в мерную колбу вместимостью 250 см3 и доводят объем фильтрата до метки водой.
Примечание. Объем фильтрата выбирают так, чтобы концентрация L-(+)-глутаминовой кислоты была приблизительно 0,030 г/дм3.
8.4. Определение
8.4.1. Температуру растворов по 5.3 и 8.3.6 доводят до 20 - 25 °C. Для проведения ферментативной реакции берут две фотометрические кюветы (6.11), в каждую из которых пипеточным дозатором (6.5) добавляют:
- 2,50 см3 буферного раствора (5.3);
- 0,20 см3 раствора НАД (5.4);
- 0,20 см3 раствора ИНТ (5.5) и
- 0,05 см3 раствора диафоразы (5.6).
Затем в одну кювету вносят 0,50 см3 экстракта (8.3.6), получая исследуемый раствор, а во вторую - 0,50 см3 воды, получая контрольный раствор.
Растворы в кюветах перемешивают пластиковыми шпателями или стеклянными палочками (6.9) и измеряют оптические плотности относительно воздуха при длине волны 492 нм: 
- оптическая плотность исследуемого раствора, 
- оптическая плотность контрольного раствора.
- оптическая плотность исследуемого раствора, - оптическая плотность контрольного раствора.Температура растворов должна быть от 20 до 25 °C.
8.4.2. В каждую кювету вносят по 0,05 см3 раствора ГДГ (5.7) и тщательно смешивают с содержимым, используя шпатель или стеклянную палочку (6.9).
Растворы выдерживают 15 мин. Затем измеряют оптические плотности при длине волны 492 нм, повторяя измерения через каждые 2 мин до достижения постоянных значений.
Строят графики зависимости оптических плотностей растворов от времени и экстраполируют их на момент внесения фермента ГДГ (Приложение А).
Получают экстраполированные значения оптических плотностей исследуемого 
и контрольного 
растворов.
и контрольного растворов.8.4.3. Определяют микромолярный коэффициент оптической плотности формазана, повторяя операции по 8.4.1 и 8.4.2, но заменяя 0,5 см3 экстракта в первой фотометрической кювете на 0,5 см3 стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты (5.8).
Получают следующие значения оптических плотностей:
- 
- стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;
- стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;- 
- контрольного раствора;
- контрольного раствора;- 
- стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;
- стандартного раствора L-(+)-глутаминовой кислоты;- 
- контрольного раствора.
- контрольного раствора.8.5. Выполняют два параллельных определения в двух пробах из одного и того же образца (8.1).
Массовую долю L-(+)-глутаминовой кислоты в пробе X, %, вычисляют по формуле
где 
;
;147,1 - молярная масса L-(+)-глутаминовой кислоты;
M - массовая доля влаги в пробе, определенная по ГОСТ 9793;
m - масса навески (8.2), г;
V - объем фильтрата, взятый на определение (8.3.6), см3;
k - микромолярный коэффициент оптической плотности формазана при длине волны 492 нм, см2/мкмоль, рассчитанный по формуле
где 
.
.За результат измерений принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений при условии выполнения 9.2.
Результат определяют с точностью 0,01%.
Относительное расхождение результатов двух параллельных определений, выполненных в одной лаборатории, не должно превышать 10% среднего арифметического значения.
В отчете об испытании должны быть указаны:
- используемый метод;
- полученные результаты;
- любые условия проведения испытаний, не установленные данным стандартом и касающиеся подробностей, которые могут повлиять на конечный результат.
В отчете должны быть все данные, необходимые для полной идентификации пробы.
(справочное)
ПЛОТНОСТИ РАСТВОРА ОТ ВРЕМЕНИ
