СПРАВКА
Источник публикации
М.: ИПК Издательство стандартов, 2000
Примечание к документу
Документ включен в Перечень международных и региональных (межгосударственных) стандартов (п. п. 313, 395, 636), а в случае их отсутствия - национальных (государственных) стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента Евразийского экономического союза "О безопасности алкогольной продукции" (ТР ЕАЭС 047/2018) и осуществления оценки соответствия объектов технического регулирования (Решение Коллегии Евразийской экономической комиссии от 17.05.2022 N 80).
Документ включен в Перечень стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения требований технического регламента "О безопасности пищевой продукции" (ТР ТС 021/2011) и осуществления оценки (подтверждения) соответствия продукции (Решение Комиссии Таможенного союза от 09.12.2011 N 880).
Документ включен в Перечень национальных стандартов, содержащих правила и методы исследований (испытаний) и измерений, в том числе правила отбора образцов, необходимые для применения и исполнения Федерального закона "Технический регламент на соковую продукцию из фруктов и овощей" и осуществления оценки соответствия (Распоряжение Правительства РФ от 19.05.2009 N 690-р).
Документ введен в действие с 1 января 2001 года.
Название документа
"ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93). Государственный стандарт Российской Федерации. Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 N 590-ст)
"ГОСТ Р 51435-99 (ИСО 8128-1-93). Государственный стандарт Российской Федерации. Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Метод определения содержания патулина с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии"
(принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22.12.1999 N 590-ст)
Принят и введен в действие
Постановлением Госстандарта России
от 22 декабря 1999 г. N 590-ст
ГОСУДАРСТВЕННЫЙ СТАНДАРТ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
СОК ЯБЛОЧНЫЙ, СОК ЯБЛОЧНЫЙ КОНЦЕНТРИРОВАННЫЙ
И НАПИТКИ, СОДЕРЖАЩИЕ ЯБЛОЧНЫЙ СОК
МЕТОД ОПРЕДЕЛЕНИЯ СОДЕРЖАНИЯ ПАТУЛИНА С ПОМОЩЬЮ
ВЫСОКОЭФФЕКТИВНОЙ ЖИДКОСТНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Apple juice, apple juice concentrates and drinks containing
apple juice. Method for determination of patulin content
using high performance liquid chromatography
ГОСТ Р 51435-99
(ИСО 8128-1-93)
ОКС 67.160.20
ОКСТУ 9109
Дата введения
1 января 2001 года
1. Разработан Всероссийским научно-исследовательским институтом консервной и овощесушильной промышленности (ВНИИКОП).
Внесен Техническим комитетом по стандартизации ТК 93 "Продукты переработки плодов и овощей".
2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 22 декабря 1999 г. N 590-ст.
3. Стандарт содержит аутентичный текст международного стандарта ИСО 8128-1-93 "Сок яблочный, сок яблочный концентрированный и напитки, содержащие яблочный сок. Определение содержания патулина. Часть 1. Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии", кроме приложения "Библиография".
4. Введен впервые.
Настоящий стандарт устанавливает метод определения содержания патулина в яблочном соке, концентрированных яблочных соках и напитках, содержащих яблочный сок, с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии.
Предел обнаружения патулина настоящим методом составляет 10 мкг/дм3 при условии, что взятый для анализа объем пробы готового к употреблению сока составляет 5 см3.
Метод основан на экстракции патулина из исследуемой пробы этилацетатом, очистке экстракта перераспределением в водный раствор карбоната натрия и количественном и качественном анализе экстракта с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с использованием спектрофотометрического детектора в ультрафиолетовой области.
Используют реактивы аналитической чистоты и воду квалификации "для ВЭЖХ".
Смешивают 16,4 см3 уксусной кислоты 
с 3,6 см3 раствора ацетата натрия 
.
с 3,6 см3 раствора ацетата натрия .3.6. Стандартный раствор патулина 
.
.Навеску патулина массой 10,0 мг, взятую с точностью до 0,1 мг, растворяют в мерной колбе с одной отметкой вместимостью 100 см3 в ацетатном буфере (3.4). Объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером.
Пипеткой переносят 10,0 см3 приготовленного раствора в другую мерную колбу с одной отметкой вместимостью 100 см3, объем содержимого в колбе доводят до метки ацетатным буфером. Массовая концентрация патулина в приготовленном стандартном растворе составляет около 10 мкг/см3.
Измеряют оптическую плотность стандартного раствора при длине волны 276 нм на подходящем спектрофотометре с использованием кварцевых кювет рабочей длиной 10 мм.
3.6.2. Расчет концентрации стандартного раствора патулина
Концентрацию стандартного раствора патулина (3.6.1) 
, мкг/см3, вычисляют по формуле
, мкг/см3, вычисляют по формуле
, (1)где A - оптическая плотность стандартного раствора патулина;
- молярный показатель поглощения раствора патулина при длине волны 276 нм, 
;M - молярная масса патулина, г/моль;
C - постоянная прибора (обычно C = 1).
Перед использованием лабораторное оборудование промывают раствором гипохлорита натрия концентрации 10 г/дм3.
Обычное лабораторное оборудование, в частности следующее:
4.1. Жидкостный хроматограф, снабженный спектрофотометрическим детектором в ультрафиолетовой области (пригодным для работы при длине волны 276 нм) и самописцем или интегратором.
4.2. Обращенно-фазовая колонка ODS <1> или другая аналогичная колонка со следующими параметрами:
- эффективность не менее 35000 теоретических тарелок на метр;
- длина 250 мм;
- внутренний диаметр 4,6 мм;
- неподвижная фаза размером частиц 5 мкм.
--------------------------------
Проба, поступающая в лабораторию, должна быть представительной и без следов порчи или изменения свойств продукта при транспортировании и хранении.
6.1. Приготовление испытуемого раствора
При испытаниях концентрированных яблочных соков их разводят водой 1:5 по объему. Дальнейшую процедуру проводят для всех продуктов одинаково, как описано ниже.
6.1.1. Пробу объемом 5,0 см3 экстрагируют порцией этилацетата объемом 5,0 см3 (3.1) в течение не менее 1 мин. Экстракцию повторяют еще два раза новыми порциями этилацетата объемом по 5,0 см3. Этилацетатные фазы объединяют и экстрагируют раствором карбоната натрия (3.3) объемом 2,0 см3.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЕ - Экстракцию раствором карбоната натрия проводят как можно быстрее, например, в течение 1 - 2 мин, из-за нестабильности патулина в щелочной среде.
6.1.2. Карбонатную фазу (6.1.1) экстрагируют свежей порцией этилацетата объемом 5,0 см3, экстракт объединяют с предыдущими порциями. Карбонатную фазу отбрасывают. К экстракту добавляют 5 капель уксусной кислоты (3.5), смесь перемешивают и упаривают на ротационном испарителе до объема 1 - 2 см3.
6.1.3. Полученный таким образом раствор количественно переносят во флакон вместимостью около 5 см3 с помощью нескольких порций этилацетата объемом около 1 см3 каждая. Раствор упаривают досуха в токе азота при температуре 40 °C. Остаток растворяют в 0,5 см3 подвижной фазы (3.2) или ацетатного буфера (3.4).
Порции стандартного раствора патулина (3.6.1) объемом 1,0; 2,0; 3,0; 5,0 и 7,5 см3 переносят пипеткой в пять мерных колб с одной отметкой вместимостью 10 см3, объем содержимого в колбах доводят до метки ацетатным буфером (3.4); получают градуировочные растворы.
Устанавливают скорость потока подвижной фазы через колонку жидкостного хроматографа около 1 см3/мин. Чувствительность детектора хроматографа устанавливают таким образом, чтобы оптической плотности 0,01 соответствовал сигнал величиной на полную шкалу регистрирующего устройства.
В хроматограф (4.1) вводят от 0,010 до 0,030 см3 каждого градуировочного раствора.
Градуировочный график строят, откладывая по оси абсцисс концентрацию патулина в микрограммах на кубический сантиметр, по оси ординат - соответствующие величины высоты или площади пиков.
6.3. Проведение определения
В хроматограф вводят от 0,010 см3 до 0,030 см3 испытуемого раствора (6.1.3) при тех же условиях, что и при построении градуировочного графика.
Идентификацию пика патулина в испытуемом растворе проводят сравнением с пиками патулина в градуировочных растворах. Следует отличать пик патулина от пика оксиметилфурфурола (ОМФ).
Концентрацию патулина в испытуемом растворе определяют непосредственно по градуировочному графику (6.2). Содержание патулина в продукте 
, мкг/дм3, вычисляют по формуле
, мкг/дм3, вычисляют по формуле
, (2)где 
- концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см3.
- концентрация патулина в испытуемом растворе, определенная по градуировочному графику, мкг/см3.
- объем, до которого сконцентрирован этилацетатный экстракт, см3;
- объем пробы продукта, взятый для экстракции, см3.8.1. Сходимость результатов
r = 41,9 мкг/дм3; 
,
,где r - предел сходимости;
- среднеквадратическое отклонение сходимости.8.2. Воспроизводимость результатов
R = 47,5 мкг/дм3; 
,
,где R - предел воспроизводимости;
- среднеквадратическое отклонение воспроизводимости.В протоколе испытаний указывают:
- метод испытаний;
- результат испытаний;
- окончательный результат с оценкой сходимости, если была проверена сходимость результатов.
Также следует отметить особенности проведения испытаний, не указанные в настоящем стандарте или рассматриваемые как несущественные, с побочными обстоятельствами, способными повлиять на результат испытаний.
Протокол испытаний должен содержать информацию, необходимую для полной идентификации образца.