1. Разработан Научно-исследовательским институтом пищеконцентратной промышленности и специальной пищевой технологии.

Внесен Техническим комитетом ТК 152 "Пищевые концентраты, чай и натуральные ароматизаторы".

2. Принят и введен в действие Постановлением Госстандарта России от 3 июля 1998 г. N 269.

3. В настоящем стандарте реализованы нормы Законов Российской Федерации "О стандартизации", "О единстве средств измерений".

4. Введен впервые.

5. Переиздание. Ноябрь 2003 г.

Настоящий стандарт распространяется на концентраты пищевые детского и диетического питания и устанавливает методику выполнения измерений массовой доли каротиноидов фотометрическим методом.

Диапазон измеряемых массовых долей каротиноидов от до .

В настоящем стандарте использованы ссылки на следующие стандарты:

ГОСТ 1770-74. Посуда мерная лабораторная стеклянная. Цилиндры, мензурки, колбы, пробирки. Общие технические условия

ГОСТ 4220-75. Калий двухромовокислый. Технические условия

ГОСТ 6709-72. Вода дистиллированная. Технические условия

ГОСТ 12026-76. Бумага фильтровальная лабораторная. Технические условия

ГОСТ 15113.0-77. Концентраты пищевые. Правила приемки, отбор и подготовка проб

ГОСТ 24104-88 <*>. Весы лабораторные общего назначения и образцовые. Общие технические условия

--------------------------------

<*> С 1 июля 2002 г. введен в действие ГОСТ 24104-2001.

ГОСТ 24363-80. Калия гидроокись. Технические условия

ГОСТ 25336-82. Посуда и оборудование лабораторные стеклянные. Типы, основные параметры и размеры

ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой

ГОСТ 29227-91 (ИСО 835-1-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 1. Общие требования

ГОСТ 29228-91 (ИСО 835-2-81). Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки градуированные. Часть 2. Пипетки градуированные без установленного времени ожидания.

Методика основана на фотометрическом определении массовой доли каротиноидов в экстракте липидов (жира), получаемом из пищевого концентрата с помощью органических растворителей.

3.1. Средства измерения, вспомогательные устройства, реактивы

Для проведения измерения используют следующие аппаратуру, материалы и реактивы:

- колориметр фотоэлектрический лабораторный (ФЭК), позволяющий проводить измерения оптической плотности от 0 до 2 при длине волны (455 +/- 10) нм, допускаемой абсолютной погрешностью при измерении коэффициента пропускания +/- 1%, снабженный кварцевыми кюветами рабочей длиной 10 мм, или

- спектрофотометр, позволяющий проводить измерения оптической плотности при длине волны 450 нм с допустимой абсолютной погрешностью при измерении коэффициента пропускания +/- 1%, снабженный кварцевыми кюветами рабочей длиной 10 мм;

- весы лабораторные общего назначения второго класса точности наибольшим пределом взвешивания 200 г по ГОСТ 24104;

- шкаф сушильный, обеспечивающий поддержание температуры в диапазоне от 40 до 200 °C, с отклонениями от заданных значений +/- 5 °C;

- секундомер [1];

- пипетка 2-2-250 по ГОСТ 29169, ГОСТ 29227 и ГОСТ 2928;

- колбы мерные 2-100-2, 2-250-2, 2-1000-2 по ГОСТ 1770;

- колбы конические Кн-3-300-34 ТС по ГОСТ 25336;

- цилиндры 1-50, 1-250 по ГОСТ 1770;

- воронка делительная ВД-1-250 ХС по ГОСТ 25336;

- калия гидроокись по ГОСТ 24363, ч.д.а., спиртовой раствор свежеприготовленный массовой долей 10%;

- фенолфталеин, спиртовой раствор массовой долей 1%;

- вода дистиллированная по ГОСТ 6709;

- гексан [2];

- эфир петролейный;

- калий двухромовокислый, х.ч., по ГОСТ 4220;

- бумага фильтровальная по ГОСТ 12026.

Примечание. Допускается применение других средств измерения с метрологическими характеристиками, оборудования с техническими характеристиками и реактивов квалификацией не ниже указанных.

3.2. Подготовка к проведению измерения

3.2.1. Метод отбора проб

3.2.1.1. Отбор проб и подготовка их к проведению измерения - по ГОСТ 15113.0.

3.2.2. Приготовление стандартного раствора двухромовокислого калия

3.2.2.1. 720,0 мг трижды перекристаллизованной соли растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1 дм3. 1 см3 такого раствора соответствует по окраске массовой концентрации 0,00416 мг или 4,16 мкг каротиноидов.

Полученный раствор хранят в темном месте.

3.2.3. Построение градуировочного графика

3.2.3.1. Готовят ряд растворов с известными концентрациями двухромовокислого калия. Для этого в мерные колбы вместимостью 100 см3 вносят пипеткой 20, 40, 50, 60, 80 см3 стандартного раствора двухромовокислого калия, приготовленного по 3.2.2, и доводят объем мерных колб водой до метки. Полученные растворы по окраске соответствуют массовым концентрациям 0,83; 1,66; 2,08; 2,50; 3,33 мкг/см3 каротиноидов. Измеряют оптическую плотность этих растворов на колориметре при длине волны (455 +/- 10) нм или спектрофотометре при длине волны 450 нм в кюветах рабочей длиной 10 мм относительно воды. Строят график зависимости оптической плотности раствора от концентрации каротиноидов D = f(c).

3.3. Проведение измерения

3.3.1. Экстракция липидов (жира) из пищевого концентрата

3.3.1.1. Навеску исследуемого продукта массой от 15,00 до 25,00 г (в зависимости от предполагаемого содержания каротиноидов) помещают в колбу вместимостью 300 см3, прибавляют от 100 до 120 см3 гексана или петролейного эфира. Колбу закрывают пробкой, встряхивают ее содержимое в течение 2 мин, затем полученную суспензию фильтруют. Этап экстракции повторяют аналогично, используя для экстрагирования жира меньшее количество растворителя, от 80 до 100 см3. Объединенный экстракт переносят в мерную колбу вместимостью 200 или 250 см3, доводят объем колбы растворителем до метки.

3.3.2. Измерение каротиноидов в экстрактах из пищевых концентратов, содержащих жир, с визуально необнаруживаемым количеством хлорофиллов

3.3.2.1. Оптическую плотность экстракта жира, полученного по 3.3.1, измеряют на колориметре при длине волны (455 +/- 10) нм или спектрофотометре при длине волны 450 нм в кюветах рабочей длиной 10 мм относительно чистого растворителя. Если оптическая плотность раствора более 0,52, раствор разбавляют, после чего снова проводят измерение оптической плотности раствора на приборе.

По градуировочному графику находят массовую концентрацию каротиноидов (мкг/см3), соответствующую найденному значению оптической плотности исследуемого раствора.

3.3.3. Измерение каротиноидов в экстрактах из пищевых концентратов, содержащих жир, с визуально обнаруживаемым количеством хлорофиллов

3.3.3.1. 50 см3 экстракта жира, полученного по 3.3.1, помещают в делительную воронку, прибавляют равный объем спиртового раствора гидроокиси калия массовой долей 10%. Смесь встряхивают до тех пор, пока при визуальном наблюдении хлорофиллы не перейдут в нижний слой спиртовой щелочи, который затем сливают. Верхний слой многократно промывают водой до исчезновения щелочной реакции по фенолфталеину.

Далее измеряют оптическую плотность верхнего слоя (раствора жира в растворителе), как в 3.3.2.

3.4. Обработка результатов измерения

Массовую долю каротиноидов в пищевом концентрате X, %, вычисляют по формуле

где c - массовая концентрация каротиноидов, найденная по градуировочному графику, мкг/см3;

V - объем объединенного экстракта липидов (по 3.3.1), см3;

m - масса навески продукта, г.

3.5. Допустимая погрешность измерения

За окончательный результат измерения принимают среднее арифметическое значение двух параллельных измерений. Вычисления проводят до третьего десятичного знака, округление - до второго десятичного знака.

Сходимость результатов измерений массовой доли каротиноидов составляет 6,0% относительной при вероятности P = 0,95.

Воспроизводимость результатов измерений массовой доли каротиноидов составляет 9,0% относительной при вероятности P = 0,95.

Контроль погрешности измерения массовой доли каротиноидов в пищевых концентратах детского и диетического питания осуществляется в соответствии с Приложением А.

А.1. Алгоритм проведения оперативного контроля сходимости

Оперативный контроль сходимости проводят при получении каждого результата измерения, представляющего собой среднее арифметическое двух параллельных измерений

Оперативный контроль сходимости проводят путем сравнения расхождения результатов параллельных измерений , полученных при анализе пробы, с нормативом оперативного контроля сходимости - . Значения приведены в таблице А.1.

Сходимость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, если

При выполнении условия (А.2) сходимость результатов параллельных измерений признают удовлетворительной, и по ним может быть вычислен результат измерения массовой доли каротиноидов в исследуемой пробе.

Если условие (А.2) не выполняется, эксперимент повторяют. При повторном невыполнении условия (А.2) измерение приостанавливают, выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

А.2. Алгоритм проведения оперативного контроля воспроизводимости

Образцами для контроля являются реальные пробы пищевых концентратов, отобранные в соответствии с ГОСТ 15113.0. Масса пробы, отобранная для контроля, должна соответствовать удвоенному количеству, необходимому для проведения измерения по методике. Отобранную массу делят на две равные части и анализируют в точном соответствии с методикой, варьируя условия проведения анализа, т.е. получают два результата измерения в разных лабораториях или в одной, используя при этом разные наборы мерной посуды, разные партии реактивов.

Воспроизводимость контрольных измерений, а также результатов измерений рабочих проб, получаемых за период, в течение которого условия проведения анализа принимают стабильными и соответствующими условиям проведения контрольных измерений, признают удовлетворительной, если

где - результат измерения рабочей пробы;

- результат измерения этой же пробы, полученный в другой лаборатории или в той же, но другими аналитиками с использованием другого набора мерной посуды и других партий реактивов;

- норматив оперативного контроля воспроизводимости;

D - результат контрольного измерения.

Значения нормативов оперативного контроля случайной составляющей относительной погрешности (сходимости и воспроизводимости) при вероятности P = 0,95 приведены в таблице А.1.

При превышении нормативов оперативного контроля воспроизводимости эксперимент повторяют. При повторном превышении указанного норматива выясняют причины, приводящие к неудовлетворительным результатам контроля, и устраняют их.

А.3. Алгоритм оперативного контроля относительной погрешности с использованием метода добавок

Образцами для контроля являются реальные пробы пищевых концентратов, отобранные в соответствии с ГОСТ 15113.0. Масса отобранной для контроля пробы должна соответствовать удвоенному количеству, необходимому для проведения измерения по методике. Отобранную массу делят на две равные части: первую анализируют в точном соответствии с методикой и получают результат измерения исходной исследуемой пробы , а во вторую часть добавляют определенный объем стандартного раствора двухромовокислого калия в количестве, эквивалентном удвоенной массе каротиноидов в растворе . Измерения второй части пробы проводят в точном соответствии с методикой, получают результат измерения исследуемой пробы с добавкой.

Погрешность является удовлетворительной при выполнении условия:

где - результат измерения исследуемой пробы, %;

- результат измерения исследуемой пробы с добавкой определяемого компонента - каротиноидов, %;

- добавка определяемого компонента, %;

- норматив оперативного контроля погрешности, рассчитывается по формуле (А.5), %.

Норматив оперативного контроля погрешности в диапазоне измеряемых массовых долей каротиноидов рассчитывается по формуле (А.5) при вероятности P = 0,95: