Изменение № 2 ГОСТ Р 51600-2000 Молоко. Методы определения наличия антибиотиков

Утверждено и введено в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 23.01.2008 № 1-ст

Дата введения 2008-07-01

Раздел 1. Заменить слова: «иммуноферментный» на «рецепторные».

Раздел 2 дополнить ссылкой:

«ГОСТ 29169-91 (ИСО 648-77) Посуда лабораторная стеклянная. Пипетки с одной отметкой».

Подпункт 4.2.1 после слова «Термостат» дополнить словами: «или блок термостатируемых ячеек».

Пункт 4.2 дополнить подпунктами - 4.2.10, 4.2.11:

«4.2.10 Тестовый набор «Copan Test®» - комплект, включающий герметично укупоренные пробирки, собранные в блоки, и содержащие споры Вас. stearothermophilus var. calidolactis, помещенные в агар с питательными веществами и индикатором бромкрезолпурпуром; пипетки мерные вместимостью 0,1 см3 одноразового использования и цветовую шкалу [3].

4.2.11 Пипетки вместимостью 0,1 см3 для отбора образцов молока для исследования по ГОСТ 29169».

Подпункты 4.4.2, 4.4.4 изложить в новой редакции:

«4.4.2 Осторожно, не повреждая упаковки, отрезают от блока необходимое число ампул или пробирок (с учетом контрольной пробы) и маркируют. Оставшиеся ампулы или пробирки хранят в холодильнике при температуре (6 ± 2) °С.

4.4.4 Подготовка к анализу ампул или пробирок - по 4.2.9 или 4.2.10.

Осторожно, не повреждая упаковки, отрезают от блока необходимое число ампул или пробирок (с учетом контрольной пробы) и маркируют. Оставшиеся ампулы или пробирки хранят в холодильнике при температуре (6 ± 2) °С».

Пункт 4.5 изложить в новой редакции: «4.5 Проведение анализа

4.5.1 Проведение анализа с использованием ампул «Delvotest® SP», «Delvotest® SP-NT» или «Delvotest® SP MINI-NT»

4.5.1.1 Соединительной частью шприца прокалывают укупорку ампул по 4.2.3 или 4.2.9.

4.5.1.2 В каждую открытую ампулу по 4.2.3 пинцетом помещают по одной таблетке питательной среды «Delvotest® SP», взятой из колпачка бутылочки по 4.4.3. Затем бутылочку плотно закрывают колпачком и хранят при температуре (20 ± 2) °С.

4.5.1.3 Шприцем-дозатором отбирают 0,1 см3 анализируемого молока и вносят в каждую ампулу по 4.5.1.2 или 4.2.9. Для каждой пробы анализируемого молока используют новый наконечник. Оставшееся молоко сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6 ± 2) °С.

4.5.1.4 Ампулы помещают в термостат и выдерживают при температуре (64,0 ± 0,5) °С в течение 3 ч.

4.5.2 Проведение анализа с использованием тестового набора «Сорап Test®»

4.5.2.1 Одноразовой мерной пипеткой отбирают 0,1 см3 анализируемого молока и вносят в пробирку с приоткрытой фольгой по 4.2.10. Оставшееся молоко сохраняют до конца анализа в холодильнике при температуре (6 ± 2) °С.

4.5.2.2 Пробирки с анализируемым молоком закрывают фольгой и помещают в блок термостатируемых ячеек и выдерживают при температуре (64,5 ± 0,5) °С в течение 3 ч.

4.5.2.3 Контрольное определение проводят в соответствии с 4.5.1, 4.5.2. В ампулу или пробирку вносят 0,1 см3 предварительно восстановленного по ГОСТ 23454 препарата СКИВ».

Подпункт 4.6.1 изложить в новой редакции:

«4.6.1 Ампулы или пробирки извлекают из термостата или блока термостатируемых ячеек и определяют цвет содержимого».

Подпункты 4.6.2, 4.6.3 после слова «ампул» дополнить словами: «или пробирок».

Подпункт 4.7.1 и таблицу 2 изложить в новой редакции:

«4.7.1 Наименьшие пределы определения антибиотиков представлены в таблице 2.

Таблица 2

Наименование антибиотика

Наименьший предел определения,
Ед/г (мкг/г), с использованием

Copan Test® (СН-АТК)

Delvotest® SP-NT,
Delvotest® SP MINI-NT

DH-Стрептомицин

<1,0

-

Амоксициллин

0,002

0,003

Ампициллин

<0,002

0,003

Бензилпенициллин

-

0,0025

Гентамицин

0,1

0,400

Дапсон

0,002

-

Дигидрострептомицин

-

2,500

Диклоксациллин

0,01

0,010

Доксициклин

0,15

-

Клоксациллин

0,01

0,020

Левомицетин (хлорам-феникол)

-

7,500

Линкомицин

-

0,300

Нафциллин

0,005

0,010

Неомицин

0,5

0,400

Оксациллин

0,005

0,010

Окситетрациклин

0,25

0,400

Пенициллин

0,001

-

Спектиномицин

>0,3

-

Спирамицин

>0,2

-

Стрептомицин

<1,0

-

Сульфадиазин

0,05

-

Сульфадиметоксин

0,05

-

Сульфадоксин

0,1

-

Сульфаметазин

0,1

-

Сульфаметоксазол

<0,05

-

Сульфанометозин

<0,05

-

Сульфатиозол

0,05

-

Тетрациклин

0,25

0,300

Тиамфеникол

>0,1

-

Тилозин

0,05

0,100

Тилмикозин

0,75

-

Триметроприм

0,1

-

Хлорамфеникол

>5,0

-

Хлортетрациклин

0,25

0,300

Цефазолин

0,05

-

Цефалексин

>0,045

0,060

Цефалониум

0,025

0,015

Цефаперазон

0,025

0,060

Цефапирин

0,0025

0,005

Цефацетрил

-

0,020

Цефкуином

0,03

-

Цефтиофур

0,05

-

Цефуроксим

0,06

-

Эритромицин

>0,2

0,250

Стандарт после таблицы 2 дополнить наименованием раздела 5:

«5 Рецепторные методы».

Раздел 5. Заменить номера пунктов и подпунктов: 5 на 5.1; 5.1 на 5.1.1; 5.2 на 5.1.2; 5.2.1 на 5.1.2.1; 5.2.2 на 5.1.2.2; 5.2.3 на 5.1.2.3; 5.2.4 на 5.1.2.4; 5.3 на 5.1.3; 5.3.1 на 5.1.3.1; 5.4 на 5.1.4; 5.4.1 на 5.1.4.1; 5.4.2 на 5.1.4.2; 5.5 на 5.1.5; 5.5.1 на 5.1.5.1; 5.5.2 на 5.1.5.2; 5.5.3 на 5.1.5.3; 5.5.4 на 5.1.5.4; 5.5.5 на 5.1.5.5; 5.5.6 на 5.1.5.6; 5.6 на 5.1.6; 5.6.1 на 5.1.6.1; 5.6.2 на 5.1.6.2; 5.6.3 на 5.1.6.3.

Пункт 5.1 Заменить слово: «Метод» на «Рецепторный метод».

Подпункт 5.1.1. Заменить слова: «иммобилизованными специфическими антителами» на «специфическими белковыми рецепторами».

Подпункт 5.1.4.2. Заменить слова: «в пробирке по 5.2.4» на «в пробирке по 5.1.2.4».

Подпункт 5.1.5.1. Заменить слова: «пипетку по 5.2.4» на «пипетку по 5.1.2.4».

Раздел 5 дополнить пунктом - 5.2:

«5.2 Рецепторный метод с коллоидным золотом

5.2.1 Сущность метода

5.2.1.1 Метод основан на проведении реакции комплексообразования антибиотиков бета-лактамного типа со специфическими белковыми рецепторами, меченными коллоидным золотом, и последующем визуальном выявлении оставшихся свободными меченых рецепторов путем хроматографии на полосках хроматографической бумаги, содержащих в виде соответствующих линий реакционную и контрольную зоны.

5.2.2 Аппаратура, материалы и реактивы

5.2.2.1 Термостат или блок термостатируемых ячеек, позволяющий поддерживать температуру (47,5 ± 0,5) °С.

5.2.2.2 Холодильник бытовой по ГОСТ 16317.

5.2.2.3 Часы механические с сигнальным устройством по ГОСТ 3145.

5.2.2.4 Тест-набор «Beta Star®» [4], включающий флаконы со специфическими рецепторами, меченными коллоидным золотом; полоски хроматографической бумаги с зоной исследуемого молока и контрольной зоной; шприц-дозатор вместимостью 0,2 см3 с наконечниками.

5.2.3 Отбор проб

Отбор проб - по ГОСТ 9225. Пробы хранят в холодильнике в течение 24 ч при температуре (6 ± 2) °С.

5.2.4 Подготовка к анализу

5.2.4.1 Термостат или блок термостатируемых ячеек нагревают до температуры (47,5 ± 0,5) °С и выдерживают при этой температуре не менее 5 мин.

5.2.4.2 Флакон встряхивают для осаждения содержимого в нем на дно.

5.2.5 Проведение анализа

5.2.5.1 Шприцем-дозатором с наконечником отбирают 0,2 см3 анализируемого молока и переливают во флакон по 5.2.4.2. Флакон закрывают крышкой и встряхивают до полного растворения сухих веществ без образования пены.

5.2.5.2 Помещают флакон в термостат или блок термостатируемых ячеек по 5.2.2.1.

5.2.5.3 Не менее чем через 3 мин термостатирования во флакон, находящийся в термостате или в блоке термостатируемых ячеек, помещают входящую в комплект полоску хроматографической бумаги.

5.2.5.4 Хроматографирование проводят в течение 2 мин. Затем полоску хроматографической бумаги извлекают из флакона.

5.2.6 Обработка результатов

5.2.6.1 Сравнивают интенсивность цвета окрашенных в красный цвет зон, появляющихся после проведения процедуры по 5.2.5.4 в виде линий на полосках хроматографической бумаги.

5.2.6.2 Зона на верхней части полоски является контрольной. Если ее окрашивания не произошло после выполнения требований по 5.2.5.3, 5.2.5.4, то повторяют все процедуры в соответствии с 5.2.

5.2.6.3 Зона исследуемого молока расположена под контрольной зоной. Большая или равная интенсивность цвета контрольной зоны, а также отсутствие окраски зоны образца является признаком наличия антибиотиков бета-лактамного типа в молоке.

5.2.6.4 Меньшая интенсивность цвета контрольной зоны, по сравнению с интенсивностью цвета зоны под ней, является признаком отсутствия антибиотиков.

5.2.6.5 Контрольное определение проводят в соответствии с 5.1 и 5.2. В ампулу или пробирку вносят 0,1 см3 предварительно восстановленного по ГОСТ 23454 препарата СКИВ».

Пункт 5.7. Заменить номер пункта: 5.7 на 5.3.

Пункт 5.3 изложить в новой редакции:

«5.3 Метрологические характеристики

Наименьшие пределы определения антибиотиков бета-лактамного типа представлены в таблице 3.

Таблица 3

Наименование
антибиотика

Наименьший предел определения,
Ед/г (мкг/г), с использованием

Бета-лактам «Snap®»

Beta Star®

Амоксициллин

0,007

0,002

Ампициллин

0,005

0,002

Диклоксациллин

0,02

0,005

Клоксациллин

0,03

0,005

Нафциллин

0,07

0,008

Оксациллин

0,04

0,005

Пенициллин

0,003*

-

Пенициллин G

-

0,002

Цефазолин

0,02

-

Цефалексин

0,025

-

Цефалониум

0,04

0,007

Цефаперазон

0,01

0,005

Цефапирин

0,011

0,008

Цефацетрил

0,05

-

Цефкуином

0,02

-

Цефтиофур

0,006

0,075

* 0,003 мкг активного вещества равно 0,005 Ед активности.

Приложение А. Библиографию дополнить позициями - [3], [4]:

«[3] Тестовый набор «Copan Test®» Дания, CHR HANSEN. Российское представительство: Россия, 105318 Москва, ул. Щербаковская, 53, корп. 17, 3 этаж, ООО «Хр. Хансен».

[4] Тест-набор «Beta Star®» Дания, CHR HANSEN. Российское представительство: Россия, 105318 Москва, ул. Щербаковская, 53, корп. 17, 3 этаж, ООО «Хр. Хансен».

Библиографические данные. Ключевые слова после слов «антибиотики бета-лактамного типа» дополнить словами: «сульфаниламидные препараты».

(ИУС № 4 2008 г.)