Методические указания разработаны сотрудниками Всесоюзного научно-исследовательского института незаразных болезней животных (Немченко М.И., Чеботарев И.И., Душенин Н.В., Алтухов Н.М., Беляев В.И., Асламов В.М., Костына М.А., Шеремет С.А., Косинов Л.И., Сапунов А.Г., Подшибякин А.Е., Кузнецов Н.И., Гореликов В.И., Борщевский А.В., Шаронин С.А., Цветиков Н.И., Моргунова В.И., Кольцова Л.В., Середа Н.Г., Енин В.Е.). Арм. НИВИ (Геворкян Г.Г.), НИВИ Н.З. РСФСР (Исаев В.В., Панилов Н.А.), ВИЭВ, Азербайджанский НИВИ, Бел. НИИЭВ, ДальЗНИВИ, ИЭВСДВ, Смоленской НИВС, специалистами ГУВ МСХ СССР.

Ответственный за выпуск - доктор биологических наук, профессор В.Т. Самохин.

Гипогаммаглобулинемия (гипоиммуноглобулинемия) новорожденных животных - патологическое состояние, характеризующееся низким содержанием гаммаглобулинов (иммуноглобулинов) в организме, предрасполагающее к возникновению неонатальных болезней, в том числе с синдромом нарушения пищеварения (дисбактериозная диарея, колибактериоз, анаэробная энтеротоксимия и другие болезни).

Поскольку перенос иммунных глобулинов через плаценту у сельскохозяйственных животных не происходит, концентрация их у новорожденных до приема молозива очень низкая. Такой уровень иммуноглобулинов не может обеспечить защиту новорожденных животных от негативных факторов окружающей среды, поэтому в течение первых 5 - 7 дней единственным источником иммуноглобулинов является молозиво, за счет которого, в основном, обеспечивается защита организма от заболеваний.

Всасывание иммунных глобулинов из молозива в органах пищеварения новорожденных телят, ягнят, поросят происходит в течение первых 24 - 36 часов жизни, но наиболее интенсивное их поступление отмечается в первые 6 - 8 часов.

Диагностика гипогаммаглобулинемии у новорожденных телят, ягнят и поросят имеет большое практическое значение, так как она дает возможность осуществлять контроль за их резистентностью, за своевременным и необходимым применением молозива, особенно его первых порций, за его качеством, а также на ранних стадиях диагностировать патологическое состояние и осложняющие его болезни.

Для ветеринарии предлагаются методы определения общего белка (приложения 1, 2) и гаммаглобулинов (приложения 3, 4).

Пониженное содержание иммуноглобулинов у новорожденного молодняка сельскохозяйственных животных в сыворотке крови обусловлено:

- нарушением всасывания иммуноглобулинов молозива в кишечнике новорожденных на почве гипотрофии, пониженной температуры окружающей среды, малого объема и позднего приема первой порции молозива;

- поступлением в пищеварительный тракт новорожденных недоброкачественного с измененными физико-химическими и биологическими свойствами молозива, низким уровнем в нем иммуноглобулинов, что обусловливается неполноценным, несбалансированным кормлением маточного поголовья, особенно во второй половине беременности, при дефиците белка, углеводов, минеральных веществ, витаминов, скармливанием недоброкачественных, токсичных кормов, а также при болезнях маток маститом и эндометритами.

Диагностика гипогаммаглобулинемии включает в себя комплекс общих и специальных диагностических исследований.

2.1. Общие исследования предусматривают изучение клинико-физиологического и биохимического статуса сухостойных коров, суягных овцематок, глубокосупоросных свиноматок, а также новорожденного молодняка, изучение их условий содержания и кормления, определение качества молозива, бактериальной обсемененности помещений для новорожденных животных с целью выяснения причин возникновения гипогаммаглобулинемии и осложняющих ее заболеваний.

2.2. Специальные исследования представляют возможность поставить точный диагноз на гипогаммаглобулинемию. К этим методам относятся: определение содержания в сыворотке крови новорожденных животных общего белка и гаммаглобулинов (иммуноглобулинов). Специальному диагностическому исследованию подвергаются телята, поросята, ягнята в возрасте первых суток после рождения, до появления первых признаков нарушения пищеварения. При поносах, выраженном обезвоживании организма, сгущении крови, показатели содержания белка и его фракций в сыворотке крови могут быть увеличенными за счет выхода жидкости из кровяного русла.

2.3. У здорового новорожденного молодняка, до приема молозива, содержится общего белка в сыворотке крови у телят - 40 - 50 г/л, ягнят - 45 - 55 г/л, поросят - 30 - 40 г/л. В возрасте 1 - 5 суток уровень общего белка повышается соответственно до 55 - 70 г/л, 70 - 75 г/л и 53 - 72 г/л.

2.4. Иммуноглобулины у новорожденных до приема молозива содержатся в незначительных количествах. После приема молозива в возрасте 1 - 5 дней концентрация иммуноглобулинов у здоровых животных должна быть 15 г/л и выше.

2.5. Контроль за уровнем глобулинов в крови молодняка проводят через сутки после рождения. При концентрации иммуноглобулинов менее 15 г/л или содержании общего белка ниже 55 г/л следует считать, что у животных имеется недостаточность иммуноглобулинов (гипогаммаглобулинемия).

3.1. Ведущее место в предупреждении гипогаммаглобулинемии (иммуноглобулинемии) принадлежит общей профилактике, выполнению ветеринарно-санитарных и зоогигиенических требований в содержании и кормлении беременных животных и новорожденного молодняка.

3.2. Полноценное кормление и оптимальные условия содержания маточного поголовья, особенно во второй половине беременности - одно из важнейших условий рождения физиологически зрелого здорового приплода, хорошей молочной продуктивности коров, овцематок, свиноматок и высокого качества молозива. Для коров важным моментом является своевременный и правильный их запуск.

3.3. Важную роль в комплексе профилактических мер играет правильная организация отелов, окотов, опоросов и своевременное получение новорожденными животными молозива.

Новорожденному теленку необходимо своевременно выпаивать первое молозиво не позднее 1,5 часов после рождения. Размещают телят в секционных профилакториях, которые эксплуатируются по принципу "пусто - занято".

Ягненок не позже 20 - 30 минут после рождения должен получить молозиво. Крепкие ягнята сами быстро находят сосок матери. Слабым маловесным ягнятам, с отсутствием устойчивой позы стояния и передвижения, необходимо оказать помощь. Поросят, после рождения всего приплода, сразу подсаживают к свиноматке.

3.4. Запрещается скармливать молозиво от животных, больных маститом. В таких случаях молодняку выпаивают молозиво от здоровых маток.

3.5. Ослабленным новорожденным животным с профилактической целью внутримышечно вводят неспецифические (нормальные) гаммаглобулины: телятам в дозе 0,7 - 1,0 мл, ягнятам и поросятам в дозе 1 - 2 мл на 1 кг массы тела 2 раза с интервалами 1 - 2 суток.

Поросятам применяют аллогенную иммунную сыворотку. Это сборная сыворотка свиней-доноров, содержащая комплекс специфических и неспецифических антител (иммуноглобулинов). С профилактической целью сыворотку вводят внутримышечно новорожденным поросятам в первые сутки в дозе 5 мл/кг массы тела.

3.6. Для повышения резистентности приплода, профилактики гипогаммаглобулинемии беременным животным в рацион вводят витаминно-минеральные добавки.

4.1. Лечение при гипогаммаглобулинемии телят, ягнят, поросят основано в первую очередь на восполнении недостающих глобулинов в организме за счет введения им орально или парентерально неспецифических глобулиновых препаратов: телятам в дозе 0,7 - 1,0 мл, ягнятам, поросятам 1 - 2 мл на кг массы тела. Можно применять до 4-х введений с интервалом 1 - 2 суток.

4.2. Рекомендуется использовать глюкозо-цитратную кровь или сыворотку крови соответствующего вида местного скота. Гемо- и серотерапию применяют на фермах, благополучных по инфекционным заболеваниям.

На молочно-товарных фермах для этой цели используют коров-доноров. Кровь и сыворотку вводят новорожденным телятам внутрибрюшинно или внутривенно в дозе 250 - 500 мл.

Кровь и сыворотку от овец и свиней можно получать на мясокомбинатах при убое здоровых животных из соответствующих хозяйств. Новорожденным ягнятам и поросятам эти препараты вводят внутримышечно: ягнятам в дозе 1 мл, поросятам в дозе 5 мл на кг массы тела 2 - 3 раза через 1 - 2 суток.

Приложение: методика определения белка и гаммаглобулинов (NN 1, 2, 3, 4).

смесь этилового спирта с серным эфиром 1:1;

дистиллированная вода;

рефрактометр типа (101Р), РЛУ, ИРФ и др.;

холодильник бытовой, поддерживающий температуру +4 - 6 °C;

термометр на 50 °C;

термостат, поддерживающий температуру 38 +/- 1 °C;

стеклянная палочка;

вата и марля;

стаканчик из стекла (0,05 - 0,1 л);

пробирки биологические (5 - 10 мл);

пробирки центрифужные (для ЦЛК-1);

центрифуга на 3 тыс. об/мин. (ЦЛК-1 и др.).

Материалы для исследования: сыворотка крови новорожденных телят, полученная обычным методом (отстаивание).

Ход определения. Стеклянной палочкой на призму рефрактометра наносят каплю дистиллированной воды, закрывают камеру и регулировочным винтом устанавливают шкалу рефрактометра на отметку 1,3330.

Удаляют воду с призмы марлевой салфеткой и протирают ватой, смоченной смесью спирта с эфиром.

Наносят каплю сыворотки на призму стеклянной палочкой, закрывают камеру и производят отсчет 2 раза. Вычисляют среднее показание.

Марлевой салфеткой удаляют с призмы рефрактометра сыворотку, протирают ватой, смоченной спирт-эфиром и приступают к исследованию следующей пробы.

Содержание белка определяют по таблице. Если температура в камере во время отсчета не соответствует 20 °C, то вводят поправку 0,0001 на каждый градус, при низкой температуре поправку вычитают, при высокой - прибавляют.

Принцип метода. Существует прямая зависимость между содержанием в сыворотке (плазме) крови общего белка и ее плотностью. Последняя определяется с помощью сульфата меди.

Реактивы и аппаратура:

основной раствор сульфата меди с плотностью 1,100, 159 г. сульфата меди (Cu O₄·5H₂O) растворяется в одном литре дистиллированной воды при температуре +25 °C;

рабочий раствор с плотностью 1,0200. В мерную колбу наливают 19 мл основного раствора и доливают дистиллированной водой до 100 мл;

рабочий раствор с плотностью 1,0214. В мерную колбу наливают 20,4 мл основного раствора и доливают дистиллированной водой до 100 мл;

рабочий раствор с плотностью 1,0230. В мерную колбу наливают 22 мл основного раствора и доливают дистиллированной водой до 100 мл;

рабочий раствор с плотностью 1,0260. В мерную колбу наливают 25 мл основного раствора и доливают дистиллированной водой до 100 мл:

стеклянные склянки емкостью 150 - 200 мл с притертыми пробками;

мерные колбы емкостью 0,1; 0,2 и 1 л;

пипетки на 1,5, 20 мл.

Материал для исследования - сыворотка (плазма) крови.

Ход определения. Капля сыворотки (плазмы) крови с высоты 10 - 20 мм опускается в первый рабочий раствор (плотностью 1.0200). Если капля в нем через 5 - 10 секунд займет среднее положение, то в такой сыворотке будет содержаться 50 г/л общего белка. При содержании общего белка менее 50 г/л капля будет находиться на поверхности раствора. В обоих случаях это будет указывать на гипогаммаглобулинемию. Оседание капли на дно раствора свидетельствует о том, что в сыворотке белка содержится более 60 г/л. В этом случае опускают каплю сыворотки во 2-ой раствор (плотность 1,0214) положении, при котором капля останется в центре, следует считать, что содержание общего белка составляет 55 г/л, т.е. нижнюю границу нормы. Плавающая капля на поверхности, не занимающая центрального положения, указывает на гипогаммаглобулинемию, и на этом исследование заканчивают. В случае оседания капли в нижнюю часть раствора (плотность больше 0,0214), ее опускают в третий раствор с плотностью 1,0230. Если плотность этого раствора и сыворотки крови будут равны (капля заняла среднее положение), то это будет соответствовать 64 г/л общего белка. При падении капли на дно аналогичную пробу проводят с четвертым раствором (плотность 1,0260). Если в этом растворе капля оседает в среднее положение или сразу опускается на дно, то это будет соответствовать 74 г/л общего белка или превышению этого уровня. В обоих случаях имеется основание для подозрения развития у телят сгущения крови. Такие показания отмечаются при энтеритах и других желудочно-кишечных заболеваниях, сопровождающихся диареей.

Растворы сульфата меди, из расчета 1 проба на 1 мл, в хорошо закупоренных банках (0,15 - 0,20 л) могут храниться длительное время.

Принцип метода. При внесении в раствор сульфата цинка сыворотки крови появляется помутнение, интенсивность которого зависит от концентрации иммуноглобулинов.

раствор сульфата цинка - 208 мг сульфата цинка (O₄·7H²O) разводят в 1 л бидистиллированной воды, непосредственно перед приготовлением в течение 10 - 15 минут кипятят. Раствор хранят в герметически закрытой бутылке, имеющей трубку-поглотитель с натронной известью. Бутыль с помощью специального тубуса и полиэтиленовой трубки соединяется с мерной пипеткой на 6 мл;

дистиллированная прокипяченная вода храниться так же, как и раствор цинка;

бутыли с двумя тубусами для раствора цинка и дистиллированной воды;

полиэтиленовые трубки диаметром 3 - 5 мм;

пробирки химические с пробками;

пипетки на 0,1; 6 и 10 мл;

электрический нефелометр.

Раствор хлорида бария (BaCl₂·2H₂O) - 1,15 г хлорида бария растворяется в 100 мл 0,2 н раствора серной кислоты. Затем берется 3 мл этого раствора, вливается в мерную колбу на 100 мл и доливается до метки. Показание последнего раствора равно 1. Этот показатель умножают на 20 и получают 20 ед. мутности. Диагноз на гипогаммаглобулинемию ставится при установлении в сыворотке крови менее 20 ед. мутности.

Ход определения. Берутся две пробирки. В первую из них наливают 6 мл раствора сульфата цинка, во вторую - дистиллированную воду.

В каждую пробирку вносят по 0,1 мл сыворотки, содержимое пробирок перемешивают и оставляют при комнатной температуре в течение 60 минут.

Определяют интенсивность мутности с помощью электрического нефелометра (ФЕК-56). Расчет производят по калибровочной кривой или сравнивают со стандартным раствором хлорида бария и выражают в единицах мутности.

Принцип метода: преципитация иммуноглобулинов сыворотки крови в растворах сульфита натрия находится в определенной зависимости от концентрации этих растворов и содержания иммунных белков в сыворотке.

растворы сульфита натрия - 14, 16 и 18% концентрации.

При приготовлении из безводного раствора (a₂ O₃) берут соответственно 14, 16 и 18 г порошка и растворяют в дистиллированной воде до общего объема 0,1 л.

При изготовлении же из водного препарата (a₂ O₃·7H₂O) берут навеску соответственно 28, 32 и 36 г.

Пробирки химические, пипетки на 0,1; 2 и 10 мл.

Посуда для приготовления и хранения растворов.

Ход определения. Для исследования одной пробы берут три пробирки, в каждую наливают по 1,9 мл соответствующего раствора сульфита натрия; в первую - 14%, во вторую - 16%, в третью - 18%. В каждый раствор вносят по 0,1 мл сыворотки крови, тщательно перемешивают и выдерживают при температуре в течение 60 мин.

Учет результатов. Появление мутности только в пробирке с 18% раствором сульфита натрия указывает на то, что в сыворотке крови содержится иммуноглобулинов менее 5 г/л (гипогаммаглобулинемия).

Появление мутности в пробирке с 18 и 16%-ным раствором сульфита натрия - в сыворотке крови содержится иммунных глобулинов больше 5 г/л, также оценивается как иммунодефицитное состояние (гипогаммаглобулинемия).

Появление мутности во всех трех пробирках свидетельствует о том, что в сыворотке крови содержится иммуноглобулинов более 15 г/л и оценивается по этому тесту как нормальный иммунный статус.