Редакционная коллегия:

Калинин В.А. - к.с.н., профессор, зав. кафедры ТСХА; Пушкина Г.П. - к.б.н.

Российский институт лекарственных культур: Борисов Г.С. - зав. КТЛ РРСТАЗР: Федорова Н.Е. - к.х.н., МНИИГ им. Эрисмана.

Настоящие методические указания предназначены для санитарно-эпидемиологических станций и научно-исследовательских учреждений Минздрава РФ, а также ветеринарных, агрохимических, контрольно-токсикологических лабораторий Минсельхозпрода РФ и лабораторий других ведомств, занимающихся определением остаточных количеств пестицидов, регуляторов роста растений и биопрепаратов в продуктах питания, кормах и внешней среде.

Методические указания апробированы и рекомендованы в качестве официальных Группой экспертов при Госхимкомиссии по химическим средствам борьбы с вредителями, болезнями растений и сорняками.

Химическое название - имазаметабенз-метил.

Смесь изомеров: метил-6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-m-толуат; метил-6-(4-изопропил-4-метил-5-оксо-2-имидазолин-2-ил)-p-толуат (смесь изомеров). Торговое название Ассерт, ф. Цианамид, США.

Структурная формула:

Эмпирическая формула: 

Молекулярная масса 288,35.

Соотношение изомеров: p:m = 63:37 (не более)

p:m = 56:44 (не менее).

Рекомендован для применения на зерновых культурах.

2.1.1. Принцип метода

Метод основан на экстракции пестицида из анализируемых проб 1%-ным раствором соляной кислоты в смеси органических растворителей (ацетон + метанол = 1:1), очистке экстракта н-гексаном, перераспределении пестицида из ацетоно-метанольной среды в хлороформ при pH = 3,5 и дальнейшем определении препарата методом газожидкостной хроматографии с использованием детектора по захвату электронов.

2.1.2. Метрологическая характеристика метода

Число параллельных определений - 5.

Размах варьирования:

- вода - 85,0 - 93,0%

- почва - 76,0 - 89,0%

- растения - 73,0 - 85,0%

Среднее значение определения:

- вода - 88,4%

- почва - 81,8%

- растения - 77,8%.

Стандартное отклонение:

- вода - 0,343

- почва - 0,549

- растения - 0,569.

Относительное стандартное отклонение:

- вода - 3,8

- почва - 6,7

- растения - 7,3.

Доверительный интервал среднего при n = 5, P = 0,95:

- вода - 88,4 +/- 1,5%

- почва - 81,8 +/- 6,6%

- растения - 77,8 +/- 6,8%.

Предел обнаружения - 0,01 мг/кг (почва, растения); 0,005 мг/л (вода).

Ацетон, ос.ч., ТУ 6-09-3513-86.

н-гексан, ч., ТУ 6-09-3375-78.

Имазаметабенз, ан. стандарт, фирма Цианамид.

Метиловый спирт, х.ч.

Натрий хлористый, насыщенный водный раствор.

Натрий сернокислый, безводный, х.ч., ГОСТ 4166-76, промытый ацетоном и н-гексаном.

Соляная кислота, 1%-ный водный раствор и 0,5 М раствор

Гидроокись натрия, 5 М р-р.

Хлороформ, ГОСТ 20013-74.

Газ-носитель - азот особой чистоты, ГОСТ 9293-74.

Стандартный раствор имазаметабенз-метила в ацетоне - 0,5 мкг/мл.

Смесь для экстракции: 1%-ная хлористо-водородная кислота в смеси ацетона и метанола (1:1): к 1 л метанола прибавляют 1 л ацетона и 20 мл концентрированной HCl и смешивают.

Воронки химические фильтровальные, ГОСТ 8613-75, d = 90 мм.

Воронки делительные, 250 мл, ГОСТ 8313-75.

Колбы конические, 100, 250 мл, ГОСТ 8613-75.

Мерные пипетки, 1, 2, 5, 10, 50 мл.

Цилиндры мерные, ГОСТ 1770-74.

Колбы грушевидные, ГОСТ 10394-72.

Стеклянная колонка длиной 1 м, диаметр 3 мм, заполненная неподвижной фазой SE-30 (5%) на хроматоне N-AW DMCS (0,16 - 0,20 мм).

Фильтры бумажные, беззольные ("синяя лента").

Хроматограф "Цвет", "Кристалл-2000" или аналогичный, снабженный детектором по захвату электронов.

Испаритель ротационный, ИР-1М, ТУ 25-11-917-74.

2.4.1. Отбор проб производится в соответствии с "Унифицированными правилами отбора проб сельскохозяйственной продукции, пищевых продуктов и объектов окружающей среды для определения микроколичеств пестицидов" от 21.08.79 г., N 2051-79.

Пробы хранят при необходимости в холодильнике.

2.5.1. Экстракция

Почва. Почву сушат на воздухе, просеивают через сито (100 меш), берут навеску в количестве 50 г, помещают в коническую колбу, прибавляют 100 мл смеси для экстракции (1%-ная HCl, метанол + ацетон = 1:1) и энергично встряхивают на аппарате для встряхивания 15 мин.

Декантируют пробу через бумажный фильтр ("синяя лента"), а к пробе снова приливают смесь для экстракции (100 мл) и встряхивают 15 мин. Фильтруют пробу на воронке Бюхнера, используя бумажный фильтр ("синяя лента"). Промывают пробу почвы на фильтре смесью для экстракции. Фильтраты объединяют, переносят в делительную воронку емкостью 500 мл, прибавляют 50 мл н-гексана, энергично встряхивают 30 секунд. Ждут, когда фазы разделятся. Нижнюю ацетоно-метанольную фазу переносят в другую аналогичную делительную воронку, снова прибавляют 50 мл н-гексана, встряхивают 30 сек. Гексан отбрасывают, когда слои разделятся. Нижний слой переносят в коническую колбу емкостью 500 мл. С помощью 5 M р-ра NaOH устанавливают pH раствора равной 3,5. После этого данный раствор переносят в делительную воронку, прибавляют 80 мл хлороформа и 50 мл дистиллированной воды, встряхивают в течение 5 минут. Ждут, когда фазы разделятся, и отделяют нижнюю хлороформенную фазу. Еще дважды повторяют экстракцию ацетоно-метанольной фазы 80 мл хлороформа. Хлороформенные экстракты объединяют, добавляют 50 мл 0,5 M раствора HCl и производят переэкстракцию пестицида в солянокислый раствор, встряхивая при этом растворы в течение 5 мин.

Когда слои разделятся, нижний хлороформенный слой переносят в другую делительную воронку, прибавляют 50 мл 0,5 M раствора соляной кислоты, встряхивают в течение 5 мин. Нижний хлороформенный слой отбрасывают, а солянокислый объединяют с предыдущим. Устанавливают pH среды, доводят ее значение до величины, равной 3,5, с помощью 5 M раствора NaOH. Из солянокислого раствора производят переэкстракцию пестицида снова в хлороформ. Для этого солянокислый раствор переносят в 500 мл делительную воронку, прибавляют 50 мл хлороформа, встряхивают 5 мин. Нижний хлороформенный слой отделяют, а к солянокислому снова прибавляют 50 мл хлороформа, встряхивают 5 мин.

Нижний слой отделяют. Хлороформенные экстракты объединяют, сушат безводным сульфатом натрия, упаривают на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку добавляют 1 мл ацетона. Из этого раствора аликвоту 2 - 3 мкл вводят в газовый хроматограф.

Растения (пшеница, ячмень, солома).

Анализируемые объекты измельчают, солому режут ножом. Берут навеску 20 г, помещают ее в коническую колбу емкостью 250 мл, прибавляют 50 мл смеси для экстракции (1% HCl, метанол + ацетон = 1:1). Навеску соломы заливают таким количеством смеси, чтобы она была полностью покрыта растворителем. Пробы энергично встряхивают на аппарате для встряхивания 15 мин. Дальнейшие процедуры аналогичны таковым, описанным для анализа пестицида в почве.

Вода. В делительную воронку емкостью 250 мл помещают 100 мл анализируемой воды. Устанавливают pH = 3,5 с помощью 0,5 M раствора HCl. Прибавляют 50 мл хлороформа, встряхивают в течение 5 мин. После разделения слоев нижний хлороформенный слой отделяют, а к водной фазе прибавляют снова 50 мл хлороформа и встряхивают 5 мин. Нижний слой отделяют. Хлороформенные экстракты объединяют, сушат безводным сернокислым натрием и растворитель упаривают на ротационном испарителе досуха. К сухому остатку добавляют 1 мл ацетона. Аликвоту этого раствора (2 - 3 мкл) вводят в хроматограф.

2.5.2. Условия хроматографирования:

- рабочая шкала электрометра .

- скорость протяжки ленты 240 мм/час

- температура термостата колонки - 240 °C

- температура термостата детектора - 250 °C

- температура термостата испарителя - 275 °C

- скорость газа-носителя - азота через колонку - 40 мл/мин

- объем, вводимый в испаритель - 2 - 3 мкл

- линейность детектирования - 0,2 - 12 нг

- время удерживания - 62 сек (основной пик).

Количество пестицида (X), мг/кг или мг/л вычисляют по формуле:

C - количество пестицида в стандартном растворе, введенном в хроматограф, мкг;

- высота пика стандартного раствора пестицида, введенного в хроматограф, мм;

- высота пика пестицида в пробе, мм;

- объем экстракта, введенного в хроматограф, мкл;

V - общий объем экстракта, мл;

p - масса анализируемой пробы, мл или г;

- процент определения пестицида в данном виде почв, растений, обусловленный потерями при проведении анализа.

Необходимо соблюдать общепринятые правила техники безопасности при работе с органическими растворителями и токсическими веществами.

Разработчики: Н.И. Киселева, Н.П. Пархомчук, С.И. Гнед (УкрНИИГИНТОКС, г. Киев).