1.1. Дерматомикозы - группа заразных заболеваний кожи и волосяного покрова животных. Возбудители дерматомикозов животных относятся к родам Trichophyton и Microsporum. В зависимости от родовой принадлежности возбудителя заболевания подразделяют на трихофитию и микроспорию.

1.2. Диагностика возбудителей дерматомикозов животных предусматривает люминесцентный анализ патологического материала, микроскопию патологического материала, выделение чистой культуры возбудителя, определение вида возбудителя.

2.1. Патологический материал у больных животных берут с периферии очагов поражения, не подвергавшихся медикаментозному лечению.

2.2. Корочки с остатками волос, волосы выдергивают пинцетом из пораженных участков (по возможности менее загрязненных) и помещают в пробирки с ватными пробками или бумажные пакетики.

2.3. Образцы снабжают этикеткой с указанием области, района, хозяйства, возраста и степени поражения животного, а также даты взятия материала и высылают для исследования в лабораторию.

3.1. Для люминесцентного анализа патологического материала используют ртутно-кварцевые лампы ПРК-2, ПРК-4, Л-80 и другие люминесцентные аппараты, оснащенные фильтром Вуда.

3.2. Материал просматривают через 10 - 15 мин после включения лампы, материал (волосы, кожные чешуйки), инфицированный возбудителем микроспории, дает характерное изумрудно-зеленое свечение. При трихофитии пораженные волосы не имеют такого свечения.

4.1. Для микроскопического исследования патматериал помещают в стерильную чашку Петри, которую ставят на темный фон (черную бумагу).

4.2. С помощью препаровальной иглы и глазного скальпеля отбирают и отрезают утолщенные корневые части волос, покрытые белым налетом, и кожные чешуйки. Длина отрезков, подготовленных к микроскопии, 1 - 2 мм. Затем несколько отрезков волосков и чешуек (8 - 10) переносят на предметное стекло в каплю 10 - 15%-ного KOH или NaOH, слегка подогревают над пламенем горелки до появления белого ореола вокруг капли, после чего добавляют каплю 50%-ного водного раствора глицерина и препарат накрывают покровным стеклом. Микроскопируют с объективом x10, затем x40.

4.3. При микроскопии пораженных волос от животных, больных дерматомикозами, обнаруживаются чехол из артроспор вокруг волоса, артроспоры, расположенные в виде цепочек внутри волоса, или развитие мицелия вокруг и внутри волоса, в кожных чешуйках отмечается мицелий гриба и цепочки артроспор. Размер артроспор в патологическом материале от животных, больных трихофитией, составляет 2,5 - 7 мкм, в патологическом материале от животных, больных микроспорией, - 1,5 - 3,5 мкм.

4.4. Обнаружение грибных элементов в патологическом материале (артроспоры, мицелиальные нити) дает возможность поставить предварительный диагноз на трихофитию или микроскопию. Для точного определения вида возбудителя необходимо выделить грибы в чистой культуре.

5.1. Для получения чистой культуры гриба и определения его вида проводят посевы корневых частей волос и кожных чешуек.

Посев делают на следующие питательные среды: сусло-агар и мясо-пептонно-глицериновый агар с 2% глюкозы (МПГА) - для выделения культур возбудителя от крупного рогатого скота, зебу, буйволов, овец, северных оленей; сусло-агар и агар Сабуро - для выделения культур от лошадей, пушных зверей, кроликов, морских свинок, мышевидных грызунов, кошек и собак.

При первичной изоляции дерматофитов с целью подавления роста сопутствующей микрофлоры к указанным средам можно добавлять антибиотики: пенициллин со стрептомицином (100 - 200 ЕД/мл) и актидион (циклогексимид) 0,1 - 0,5 мг/мл.

5.2. Пораженные частички волос и чешуйки кожи размером не более 2 мм переносят в стерильную чашку Петри, откуда берут отборочный материал для высева на питательные среды в пробирки. Посев производят микологической иглой. Предварительно иглу прокаливают над пламенем горелки и, слегка погружая в питательную среду, охлаждают ее. Затем иглой прикасаются к частичке волоса (чешуйке) и, соблюдая стерильность, переносят их по одному на поверхность косяка питательной среды. Волоски высевают в два-три участка поверхности агара на расстоянии 1 - 1,5 см друг от друга. На каждую экспертизу берут по 7 - 10 пробирок. Посевы выдерживают в термостате при температуре 28 °C до 30 дней.

5.3. В случае сильного загрязнения материала посторонней микрофлорой, быстро опережающей рост возбудителя, прибегают к обработке 70°-ным этиловым спиртом. При этом отобранные частички материала переносят в стерильную чашку Петри, заливают на 5 мин 15 мл спирта, затем спирт удаляют пипеткой и дважды промывают стерильной водой: наливают по 15 - 20 мл стерильной воды и отсасывают пипеткой. Волоски подсушивают в термостате при 37 °C и высевают на питательные среды. Обработанный спиртом патологический материал высевают на питательные среды без антибиотиков.

5.4. Появление роста колоний дерматофитов на месте посева пораженных волосков или кожных чешуек можно отметить на 3 - 5-й день. В отдельных случаях развитие возбудителя заметно только на 20-й день, в связи с чем наблюдения за посевами надо вести в течение месяца. Формирование колоний дерматофитов разных видов наступает в различные сроки - на 10 - 14-й день после начала роста для T. mentagrophytes, T. equinum, M. canis, equinum и на 20 - 25-й день для T. verrucosum. Описание культур следует проводить в этот период.

6.1. При определении вида возбудителя описывают культуральные признаки: размеры колоний, их структуру и цвет, строение растущего края, пигментацию обратной стороны колонии и питательной среды и проводят микроскопическое исследование культур, отмечая строение и ширину мицелия, форму и размеры микроконидий, макроконидий, хламидоспор и артроспор.

Для микроскопии культур готовят препараты: нагретой в пламени горелки и охлажденной микологической иглой или лопаточкой вырезают кусочек выросшей колонии гриба (при этом пробирку держат около пламени горелки), помещают его на предметное стекло в каплю 50%-ного водного раствора глицерина или воды и накрывают покровным стеклом, слегка раздавливая кусочек колонии. Микроскопируют препараты с объективом x10 и x40.

7.1. Trichophyton verrucosum (син. T. faviforme) (основной возбудитель дерматомикозов крупного и мелкого рогатого скота, зебу, буйволов, северных оленей). Культуры развиваются медленно, рост заметен на 5 - 7-й день.

7.2. Trichophyton mentagrophytes (син. T. gypseum) (основной возбудитель дерматомикозов пушных зверей, кроликов, морских свинок, мышевидных грызунов). Культуры развиваются быстро, рост заметен на 3 - 5-й день.

7.3. Trichophyton equinum (основной возбудитель трихофитии лошадей). Культуры развиваются быстро, рост появляется на 3 - 5-й день.

7.4. Microsporum canis (син. M. lanosum, M. felineum, основной возбудитель дерматомикозов кошек и собак). Культуры развиваются быстро, рост заметен на 3 - 5-й день.

7.5. Microsporum equinum (возбудитель микроспории лошадей). Культуры развиваются быстро, рост заметен на 3 - 5-й день.

8.1. Сусло-агар. Неохмеленное пивное сусло, имеющее плотность 12 - 17% по сахарометру, получают на пивоваренном заводе. Разбавляют его водопроводной водой до плотности 7% по сахарометру, устанавливают pH до 8 - 8,2 добавлением 10%-ного NaOH. Разведенное сусло нагревают, не доводя до кипения, и растворяют в нем 2% агар-агара. Среду фильтруют через марлю (4 - 5 слоев), разливают в пробирки и другую стерильную посуду и стерилизуют в автоклаве 30 мин под давлением 0,5 атм. После стерилизации pH среды 6,4 - 6,7.

8.2. Агар Сабуро: глюкоза (мальтоза, декстроза) 40 г; пептон 10 г; агар-агар 20 г; вода водопроводная 1 л. В небольшом объеме воды растворяют глюкозу и пептон, доводят объем жидкости до 1 л, добавляют агар-агар и расплавляют его, нагревая среду, но не доводя до кипения. Питательную среду фильтруют через марлю (4 - 5 слоев), разливают в пробирки и другую посуду и стерилизуют в автоклаве под давлением 0,5 атм в течение 30 мин. После стерилизации pH среды 6,5 - 6,7.

8.3. Мясо-пептонно-глицериновый агар с 2% глюкозы (МПГА): глюкоза 20 г, глицерин 25, пептон 10, хлористый натрий 5 г; стерильная мясная вода (разбавленная дистиллированной водой 1 : 2) 1 л.

После растворения в мясной воде компонентов и расплавления агар-агара среду фильтруют через марлю (4 - 5 слоев), разливают в пробирки и другую посуду и стерилизуют в автоклаве под давлением 0,5 атм в течение 30 мин.