1.1. Метод определения патогенности бактерий путем исследования активности бактериальных ферментов позволяет судить о потенциальной способности бактерий вызывать патологический процесс.

1.2. Патогенность (вирулентность) аэромонад зависит от активности продуцирования экстрацеллюлярных энзимов - факторов нестабильности, к которым относится и ДНКаза (дезоксирибонуклеаза);

1.3. Определение ДНКазы используется как косвенный метод определения патогенности. Применение метода ДНКазной активности позволяет получить ответ через 48 часов.

2.1. Навеску ДНК (дезоксирибонуклеиновой кислоты) из расчета 200 мг/100 мл среды растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды, подщелоченной IN раствором NaOH, вносят в расплавленный мясо-пептонный агар и стерилизуют однократно текучим паром 30 мин. Перед посевом агар расплавляют и стерильно добавляют на каждые 100 мл среды 0,8 мл 10%-ного CaCl₂. Расплавленный агар разливают в чашки Петри по 25 мл; после застывания агара чашки подсушивают в термостате.

2.1.1. Можно использовать готовую среду фирм Difco или Gibco.

2.2. Перед посевом дно чашки расчерчивают карандашом по стеклу на 6 - 16 секторов (радиальных или прямоугольных), в каждом секторе ставят соответствующий порядковый номер.

2.3. Для посева используют суточную агаровую культуру испытываемого штамма. Посев производят уколом в центр сектора, не доводя петлю до дна чашки. Для удобства обозначения каждую культуру условно нумеруют от единицы и далее.

2.4. Чашки инкубируют при температуре 25 - 30 °C в течение 48 часов.

2.5. После инкубации на поверхность среды наносят 8 - 10 мл IN раствора HCl, чашки слегка покачивают для равномерного смачивания поверхности среды. Через 10 мин кислоту сливают и учитывают результат.

3.1. Соляная кислота осаждает только полимерную ДНК, образуя хлопьевидный преципитат, в результате чего среда становится матовой. ДНК, деполимеризованная дезоксирибонуклеазой, продуцируемой бактериями, не осаждается, и вокруг этих макроколоний образуются прозрачные зоны.

3.2. Ширина зоны деполимеризации зависит от степени ДНКазной активности и измеряется миллиметровой бумагой от края макроколонии до конца зоны просветления. Учет проводят в миллиметрах ширины зоны деполимеризации или в четырехплюсовой системе:

+ - зона деполимеризации до 2 мм,

++ - зона деполимеризации 2 - 3 мм,

+++ - зона деполимеризации 3 - 5 мм,

++++ - зона деполимеризации 5 мм и более.

3.3. Культуры аэромонад, выделенные из патматериала, дающие зону деполимеризации до 2 мм - слабовирулентные, до 4 мм - вирулентные, более 4 мм - высоковирулентные.