Главная // Актуальные документы // Методические рекомендацииСПРАВКА
Источник публикации
Документ опубликован не был
Примечание к документу
По вопросу, касающемуся применения данного документа, см.
письмо Роспотребнадзора от 02.12.2008 N 01/14262-8-32
Название документа
"Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях"
(утв. Минздравом РСФСР 17.08.1990)
"Методические рекомендации по проведению бактериологических исследований при пищевых отравлениях"
(утв. Минздравом РСФСР 17.08.1990)
Начальник Главного управления
эпидемиологии и гигиены
Министерства здравоохранения РСФСР
Р.И.ХАЛИТОВ
17 августа 1990 года
МЕТОДИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ПО ПРОВЕДЕНИЮ БАКТЕРИОЛОГИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ
ПРИ ПИЩЕВЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ <*>
--------------------------------
<*> Разработаны специалистами Красноярской краевой санэпидстанции и одобрены Лабораторным Советом при Главном управлении эпидемиологии и гигиены Минздрава РСФСР 28.05.90.
Настоящие Методические рекомендации разработаны на основании нормативно-технических документов:
1.
Инструкция о порядке расследования, учета и проведения лабораторных исследований в учреждениях санитарно-эпидемиологической службы при пищевых отравлениях, утв. МЗ СССР 20 декабря 1973 г. N 1135-73.
2. Методические
указания по диагностике заболеваний, вызываемых энтеробактериями, утв. МЗ СССР 17 декабря 1984 г. N 04-23/3-84.
3. Письмо ГСЭУ МЗ РСФСР по количественному определению стафилококков в пищевых продуктах, N 08 с/б-3-1310 от 14.06.75.
4.
ГОСТ 10444.7-86 "Продукты пищевые. Методы выявления ботулинических токсинов и C. botulinum".
Настоящие Методические рекомендации имеют цель при ограниченных возможностях лабораторий выполнить максимальный объем исследований по сокращенной схеме на все потенциально опасные, известные виды микроорганизмов - возбудителей пищевых отравлений (при наличии методик исследований) качественно или количественно. Для эффективного использования результатов бактериологических исследований при пищевых отравлениях необходимо иметь в виду:
1. Не следует направлять на бактериологическое исследование продукты и другие материалы, неблагоприятные по своей природе для развития микроорганизмов (продукты, содержащие высокие концентрации сахара, соли, а также крупы, хлеб, сало, при подозрении на ботулизм - продукты, хорошо аэрируемые и т.п.).
2. В сопроводительном документе к материалам, направляемым на бактериологическое исследование, необходимо указать предполагаемый диагноз (этиологию отравления) и цель исследования (на какие группы возбудителей проводить исследование).
3. Материалы от пострадавших забирают и направляют на бактериологическое исследование в соответствии с клиникой заболевания и его патогенезом: так при подозрении на стафилококковую этиологию от пострадавших нецелесообразно забирать кровь на гемокультуру и серологические исследования; при подозрении на ботулизм - нецелесообразно направлять материалы для исследования на патогенные и условно-патогенные энтеробактерии и т.д.
4. Определение абсолютных патогенов (шигелл, сальмонелл, возбудителей ботулизма и др.) во всех материалах проводят качественно: определение условно-патогенных возбудителей (энтеробактерии, стафилококк, B. cereus, Cl. perfringens и др.) в некоторых материалах от больных (фекалии, мазки из зева и носа на стафилококковое носительство) и пищевых продуктах - количественно; в смывах - качественно.
5. Исследование проб воды, пищевых продуктов целесообразно проводить на соответствие ГОСТов, др. НТД (при соблюдении правил хранения и реализации) и параллельно на патогенную и условно-патогенную микрофлору в зависимости от цели исследования, указанной в направлении. Суточные пробы пищевых продуктов исследуют только на патогенную микрофлору.
Отбор проб, их доставку и подготовку к исследованию проводят по
Инструкции МЗ СССР ... N 1135-73.
6. При выделении однотипных культур из материалов от больных и из внешней среды проводят их углубленное изучение с целью установления идентичности (определяют серо-, био-, фаго-, колициновары, антибиотикорезистентность, термоустойчивость и другие эпид. маркеры).
7. Обращаем внимание, что предлагаемые схемы рассчитаны на проведение бактериологических исследований. Поэтому необходимость проведения серологических исследований устанавливается в каждом конкретном случае по показаниям.
Настоящие Рекомендации включают 2 раздела:
2.
Исследование материалов от пострадавших (Приложение N 2).
ИССЛЕДОВАНИЕ ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ
Готовят исходное разведение продукта 1:10 (для твердых продуктов: 15 г
продукта + 135 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ. раствора, для
жидких продуктов: 10 мл продукта + 90 мл 0,1-процентной пептонной воды или
физ. раствора) и из него в 9 мл 0,1-процентной пептонной воды или физ.
-3 -5
раствора два дополнительных разведения 10 и 10 .
При целенаправленном исследовании на C. perfringens дополнительно
-8 -9 -10
готовят разведения 10 , 10 , 10 .
Посев в среды обогащения проводят в больших объемах: 25 мл/г цельного продукта (для твердых продуктов необходимо предварительно размельчить в ступке) в 100 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации или 25 мл хлористо-магниевой среды двойной концентрации.
5 мл/г - в 25 мл желчного бульона, 30 мл/г - в 120 - 150 мл среды Китт-Тароцци и т.д.
Исследование на C. botulinum и C. perfringens проводят по клинико-эпидемиологическим показаниям.
Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят в соответствии с вышеперечисленной НТД.
ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТОВ
Твердый продукт Жидкий продукт
││ ││
┌───────────┐ 25 гр ││ ││ 25 мл ┌────────────┐
│100 мл │<─────────┤│ │├───────>│ 100 мл ХМ │
│хлористо- │ ││ ││ │ обычн. │
│магниевой │ ││ ││ │концентрации│
│обыч. конц.│ 15 гр продукта + 135 мл 10 мл прод. + 90 мл │ или 25 мл │
└───────────┘ 0,1-процентного ПВ 0,1-процентного ПВ │ двойной │
или физ. р-ра или физ. р-ра └────────────┘
┌──────────────┐ ││ ││ 5 мл ┌──────────────┐
│ 5 мл │ 5 гр ││ │├──────>│ 25 мл │
│10-процентного│<──────┘│ │└────┐ │10-процентного│
│ желч. бульона│ \/ \/ │ │ желч. б-на │
└──────────────┘ ┌────┐ 0,1 мл 0,1 мл ┌────┐ │ └──────────────┘
┌───────────┤ -1├─────────┬──────────┤ -1│ │
│ │10 │ │ │10 │ │
│ по 0,1 мл └────┘ │ └────┘ │ по 0,1 мл
\/ │ \/
──┬─────┬─────┬─── │ ──┬─────┬─────┬───
\/ \/ \/ ┌──┴─┐ \/ \/ \/
┌────┐┌─────┐┌───┐ ┌──────┤ │ ┌────┐┌─────┐┌───┐
│Эндо││Плоск││ВСА│ │ ├────┤ │Эндо││Плоск││ВСА│
└────┘└─────┘└───┘ │ │ -3│ └────┘└─────┘└───┘
по 0,1 мл │ │10 │
┌─────────────┘ └──┬─┘
\/ │ 9,9 мл 0,1-процентного
──┬─────┬───┬────┬────┬──── │ ПВ или физ. р-ра
\/ \/ \/ \/ \/ │
┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ │ 0,1 мл
│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│ │
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘ \/
┌────┐ по 0,1 мл
│ ├────────────────┐
├────┤ \/
│ -5│ ──┬─────┬───┬────┬────┬────
│10 │ \/ \/ \/ \/ \/
9,9 мл 0,1-процентного└────┘ ┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐
ПВ или физ. р-ра │Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘
Примечание: 1. При отсутствии среды МИС идентификацию энтерококков возможно проводить со среды КР.
2. При отсутствии среды ЖАМПФ (желточный агар с маннитом, полимиксином и феноловым красным) идентификацию B. cereus возможно проводить со среды ЖСА.
ИССЛЕДОВАНИЕ МАТЕРИАЛОВ ОТ ПОСТРАДАВШИХ
1. Кровь засевают в питательную среду (Раппопорт и др.) в соотношении 1:10 (5 мл на 45 мл среды).
Термостатируют 10 дней при 37 °С, делая высевы на среду Эндо через 18 - 24 часа, на 3, 4, 6, 10 сутки. При наличии роста работают по общепринятой методике.
2. Мочу центрифугируют, засевают осадок в 5 мл хлористо-магниевой среды обычной концентрации (или 10 мл мочи на 10 мл среды двойной концентрации), через 18 - 20 часов инкубации при 37 °С делают высев петлей на ВСА (48 часов при 37 °С).
При наличии подозрительного роста идентификацию проводят по общепринятой методике.
3. Желчь засевают в количестве 5 мл на 45 - 50 мл МПБ (1:10), помещают на 7 суток в термостат при 37 °С и делают высевы через 18 - 20 часов и 3, 5, 7 сутки на среду Эндо. При наличии подозрительного роста работают по общепринятой методике.
4. Промывные воды желудка после нейтрализации (1 мл 10-процентной соды на 10 мл пробы) засевают по 0,1 мл на плотные чашечные питательные среды Эндо (Левина), Плоскирева, ЖСА, КА и в среды обогащения (хлористо-магниевая, желчный бульон, солевой бульон, сахарный бульон) в соотношении 1:5 - 1:10 (1 мл на 4 - 5 мл среды).
Дальнейшее исследование проводят в зависимости от характера роста по общепринятой методике.
5. Рвотные массы после нейтрализации, испражнения.
Готовят на 0,1-процентной пептонной воде или физ. растворе 10-кратные
-1 -3 -5
разведения: 10 , 10 , 10 , для исследования на C. perfringens
-8 -9 -10
дополнительно: 10 , 10 , 10 и далее проводят посевы:
5.1. На шигеллы и сальмонеллы:
-1
по 0,1 мл из 10 на среды Эндо (Левина), Плоскирева, ВСА и в среды
-1
обогащения: по 0,3 - 1,0 мл из 10 на 2,5 - 5 мл хлористо-магниевой среды
(селенитовой).
-3 -5
5.2. На S. aureus: по 0,1 мл из 10 и 10 на ЖСА.
-3 -5
5.3. На B. cereus: по 0,1 мл из 10 и 10 на желточный агар с
маннитом, полимиксином и феноловым красным (ЖАМПФ), при отсутствии - на
ЖСА.
5.4. На энтерококки:
-3 -5
по 0,1 мл из 10 и 10 на МИС, при отсутствии - на КА.
-3 -5
5.5. На условно-патогенные энтеробактерии: по 0,1 мл из 10 и 10 на
Эндо.
-8 -9 -10
5.6. На C. perfringens по 1 мл из 10 , 10 , 10 в пробирки с 8 - 9
мл среды Вильсон - Блера.
5.7. На C. botulinum:
-1
по 3 - 5 мл из 10 в 4 флакона (пробирки) с 30 - 50 мл среды
Китт-Тароцци (при отсутствии среды возможно применение среды для контроля
стерильности).
Примечание: посевы на Cl. perfringens и Cl. botulinum проводят только по клинико-эпидемиологическим показаниям, о чем должна быть сделана запись в направлении.
Дальнейший ход исследования и идентификацию на все виды возбудителей проводят по общепринятой методике.
ПРИМЕРНАЯ СХЕМА ПОСЕВА РВОТНЫХ МАСС И ИСПРАЖНЕНИЙ
0,1 мл ┌────┐ 0,3 - 1,0 мл
┌──────────────────────────────┤ -1├────────────────────────┐
│ 0,1 мл │10 │ │
│ ┌─────────────────────┤ ├─────────┐ │
│ │ 0,1 мл │ │ │ │
│ │ ┌─────────────┴─┬──┘ │ │
\/ \/ \/ 1 г/мл материала 10 мл │ \/
┌────┐ ┌─────┐ ┌───┐ 0,1-процентного │ ┌────────────┐
│Эндо│ │Плос.│ │ВСА│ ПВ или физ. р-ра │ │2,5 - 5,0 мл│
└────┘ └─────┘ └───┘ │ │ │хлористо- │
│ │ │магниевой │
│ │ │среды обыч. │
│ │ │конц. │
│ │ └────────────┘
\/ │ 0,3 - 1,0 мл
по 0,1 мл ┌────┐ └──────────────┐ или
┌───────────────────┤ -3│ \/
\/ │10 │ ┌────────────┐
──┬─────┬───┬────┬────┬──── ├────┤ 9,9 мл │2,5 - 5,0 мл│
\/ \/ \/ \/ \/ │ │ 0,1-процентного │селенитовой │
┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ └─┬──┘ ПВ или физ. р-ра │ среды │
│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│ │ └────────────┘
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘ │ 0,1 мл
\/
по 0,1 мл ┌────┐
┌───────────────────┤ -5│
\/ │10 │
──┬─────┬───┬────┬────┬──── ├────┤
\/ \/ \/ \/ \/ │ │ 9,9 мл 0,1-процентного
┌────┐┌───┐┌──┐┌───┐┌─────┐ └────┘ ПВ или физ. р-ра
│Эндо││ЖСА││КА││МИС││ЖАМПФ│
└────┘└───┘└──┘└───┘└─────┘