Содержит не менее 99,0% и не более 101,0% пилокарпина гидрохлорида C₁₁H₁₆N₂O₂·HCl в пересчете на сухое и свободное от остаточных органических растворителей вещество.

Описание. Бесцветные кристаллы или белый или почти белый кристаллический порошок. <*> Гигроскопичен.

--------------------------------

<*> Приводится для информации.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, легко растворим в спирте 96%, практически нерастворим в хлороформе.

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия хлоридом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца пилокарпина гидрохлорида.

2. Качественная реакция. 10 мг субстанции растворяют в 5 мл воды, прибавляют 50 мкл серной кислоты разведенной 16%, 1 мл водорода пероксида раствора разведенного, 50 мкл калия дихромата раствора 5% и 1 мл хлороформа. Смесь энергично встряхивают; хлороформный слой должен окраситься в сине-фиолетовый цвет.

3. Качественная реакция. 10 мг субстанции дают характерную реакцию на хлориды (ОФС "Общие реакции на подлинность").

Температура плавления. От 200 до 203 °C (с разложением, ОФС "Температура плавления").

Удельное вращение. От +89 до +93 в пересчете на сухое вещество (2% раствор субстанции в воде, ОФС "Поляриметрия").

pH От 3,5 до 4,5 (5% раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Буферный раствор. 4,4 г дикалия гидрофосфата растворяют в 600 мл воды, доводят pH раствора до 6,5 +/- 0,1 фосфорной кислотой и доводят объем раствора до 1,0 л.

Подвижная фаза (ПФ). Ацетонитрил - метанол - буферный раствор 2:35:63.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают около 25 мг (точная навеска) субстанции растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор стандартного образца пилокарпина гидрохлорида. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают около 25 мг (точная навеска) стандартного образца пилокарпина гидрохлорида растворяют в воде и доводят объем раствора водой до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора водой до метки.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. Около 25 мг стандартного образца пилокарпина гидрохлорида растворяют в 5 мл воды, прибавляют 5,0 мл 0,1 М раствора натрия гидроксида и, немедленно, 5,0 мл 0,1 М раствора хлористоводородной кислоты. Доводят объем раствора водой до 50,0 мл. В растворе образуется изопилокарпин.

Раствор для проверки чувствительности хроматографической системы. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 1,0 мл раствора стандартного образца пилокарпина гидрохлорида и доводят водой до метки.

Примечание:

изопилокарпин: (3R,4R)-4-[(1-метил-1H-имидазол-5-ил)метил]-3-этилоксолан-2-он, CAS 531-35-1;

пилокарпиновая кислота: (2S,3R)-4-гидрокси-3-[(1-метил-1H-имидазол-5-ил)метил]-2-этилбутановая кислота, CAS 28406-15-7;

изопилокарпиновая кислота: (2R,3R)-4-гидрокси-3-[(1-метил-1H-имидазол-5-ил)метил]-2-этилбутановая кислота, CAS 34350-99-7.

Хроматографируют испытуемый раствор, раствор стандартного образца пилокарпина гидрохлорида и растворы для проверки пригодности и чувствительности хроматографической системы.

Пригодность хроматографической системы определяется в соответствии с ОФС "Хроматография" со следующими уточнениями:

- на хроматограмме раствора для проверки пригодности хроматографической системы разрешение (R) между пиками изопилокарпина и пилокарпина должно быть не менее 1,5;

- на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы отношение сигнал/шум (S/N) для пика пилокарпина должно быть не менее 10;

- на хроматограмме раствора стандартного образца пилокарпина гидрохлорида относительное стандартное отклонение площади пика пилокарпина должно быть не более 5,0% (6 определений).

Относительное время удерживания соединений. Пилокарпин - 1; изопилокарпин - около 0,94; пилокарпиновая кислота - около 1,15; изопилокарпиновая кислота - около 1,19.

Содержание каждой примеси в субстанции в процентах (X) вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика каждой из примесей на хроматограмме испытуемого раствора;

S₀ - площадь пика пилокарпина на хроматограмме раствора стандартного образца пилокарпина гидрохлорида;

a₁ - навеска субстанции пилокарпина гидрохлорида, мг;

a₀ - навеска стандартного образца пилокарпина гидрохлорида, мг;

P - содержание пилокарпина гидрохлорида в стандартном образце пилокарпина гидрохлорида.

- изопилокарпин не более 1,0%;

- суммарное содержание изопилокарпина и пилокарпиновой кислоты не более 1,5%;

- суммарное содержание остальных примесей - не более 0,5%.

Не учитывают пики, площадь которых менее площади основного пика на хроматограмме раствора для проверки чувствительности хроматографической системы (менее 0,05%).

Посторонние алкалоиды. 0,2 г препарата растворяют в 20 мл воды. К 10 мл полученного раствора прибавляют несколько капель 10% раствора аммиака, к другим 10 мл - несколько капель 5% раствора калия дихромата; в обоих случаях не должно быть помутнения.

Органические примеси. Раствор 0,25 г субстанции в 5 мл концентрированной серной кислоты должен выдерживать сравнение с эталоном Y₄ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

Потеря в массе при высушивании. Не более 0,5% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют около 0,5 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют около 1,0 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Количественное определение. Определение проводят методом титриметрии.

Около 0,2 г (точная навеска) субстанции растворяют в 50 мл смеси уксусного ангидрида и безводной уксусной кислоты 7:3 и титруют 0,1 М раствором хлорной кислоты. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС "Потенциометрическое титрование") или с индикатором - 0,1 мл 0,1% раствора кристаллического фиолетового.

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора хлорной кислоты соответствует 24,47 мг пилокарпина гидрохлорида C₁₁H₁₆N₂O₂·HCl.

Хранение. В плотно закрытой упаковке, предохраняющей от действия света и влаги.