СПРАВКА
Источник публикации
Документ опубликован не был
Примечание к документу
Приказом Минздрава России от 31.10.2018 N 749 с 01.12.2018 введена в действие ОФС.1.7.2.0018.15 (XIV издание).
В соответствии с Приказом Минздрава России от 29.10.2015 N 771 данный документ введен в действие с 01.01.2016.
Текст документа приведен в соответствии с публикацией на сайте http://femb.ru/feml, и разделен в Информационном банке на отдельные фармакопейные статьи.
Название документа
Общая фармакопейная статья "Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0018.15"
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II")
Общая фармакопейная статья "Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах. ОФС.1.7.2.0018.15"
("Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII издание. Том II")
МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ОБЩАЯ ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ
Определение нуклеиновых кислот по методу Спирина в иммунобиологических лекарственных препаратах | ОФС.1.7.2.0018.15 Вводится впервые |
Настоящая общая фармакопейная статья предназначена для определения суммарного количества нуклеиновых кислот в иммунобиологических лекарственных препаратах (ИЛП). Определение количества нуклеиновых кислот проводится спектрофотометрическим методом после проведения кислотного гидролиза.
Метод основан на измерении разности показателей оптической плотности гидролизатов ИЛП в ультрафиолетовой области спектра, характеризующей содержание фосфора нуклеиновых кислот. По результатам измерения оптической плотности растворов при 270 нм (максимум поглощения нуклеиновых кислот) и 290 нм (максимум поглощения примесей) определяется содержание нуклеиновых кислот.
Спектрофотометрический метод
К 1 мл испытуемого образца прибавляют 5 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты и перемешивают. Смесь нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. После охлаждения гидролизат центрифугируют в течение 20 мин. при 2000 об./мин., отделяют осадок от надосадочной жидкости и измеряют оптическую плотность надосадочной жидкости в кювете с толщиной слоя 10 мм при 270 и 290 нм по сравнению с контрольным раствором, содержащим 1 мл воды очищенной и 5 мл 0,5 М раствора хлорной кислоты.
Содержание нуклеиновых кислот (X) в мкг/мл вычисляют по формуле:
,где: A270 и A290 - значения оптической плотности, измеренные при соответствующих длинах волн;
0,19 - коэффициент удельной экстинкции нуклеиновых кислот (среднее значение разницы показаний оптической плотности (D270 - D290), соответствующее содержанию 1 мкг фосфора нуклеиновых кислот в 1 мл испытуемого раствора);
10,3 - коэффициент пересчета количества фосфора на нуклеиновые кислоты, мкг/мл;
6 - разведение испытуемого образца.
Метод применим при выполнении условия: показания оптической плотности при A270 и A290 не должны отличаться более чем на 15%.
Содержание нуклеиновых кислот в ИЛП должно составлять от 15 до 35 мкг/мл.
Примечания.
1. Испытуемый раствор. Исследуют 1 мл испытуемого образца или приготовленного, как указано в фармакопейной статье и нормативной документации.
2. 0,5 М раствор хлорной кислоты. Раствор готовят с учетом удельного веса и процентной концентрации исходного раствора кислоты хлорной.
Приготовление 0,5 М раствора хлорной кислоты из 70% раствора. В мерную колбу вместимостью 1000 мл вносят 42,07 мл 70% раствора хлорной кислоты с удельным весом 1,664, доводят объем раствора водой очищенной до метки и перемешивают. Раствор хранят в склянке с притертой пробкой при температуре от 18 до 25 °С в течение 12 мес.