(2S,5R,6R)-3,3-диметил-7-оксо-6-[(2-фенилацетил)амино]-4-тиа-1-азабицикло[3.2.0]гептан-2-карбоксилат натрия

Содержит не менее 96,0% и не более 102,0% бензилпенициллина натрия C₁₆H₁₇N₂NaO₄S в пересчете на сухое вещество.

Примечание. При определении активности биологическим методом общая активность субстанции (сумма пенициллинов) не менее 96%. Теоретическая активность бензилпенициллина натрия 1670 ЕД/мг. 0,5988 мкг химически чистой субстанции бензилпенициллина натрия соответствует одной единице действия (ЕД) (ОФС "Определение антимикробной активности антибиотиков методом диффузии в агар").

Точность определения должна быть такой, чтобы доверительные пределы при P = 95% отклонялись от среднего значения не более чем на 5% (ОФС "Статистическая обработка результатов определения специфической фармакологической активности лекарственных средств биологическими методами").

Средняя величина найденной активности должна быть не менее 1600 ЕД/мг.

Описание. Белый или почти белый кристаллический порошок, слегка гигроскопичен. Легко разрушается при действии кислот, щелочей и окислителей, при нагревании в водных растворах, а также при действии пенициллиназы. Медленно разрушается при хранении в растворах при комнатной температуре.

Растворимость. Очень легко растворим в воде, растворим в спирте 90% и метаноле.

1. ИК-спектрометрия. Инфракрасный спектр субстанции, снятый в диске с калия бромидом, в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру стандартного образца бензилпенициллина натрия.

2. Тонкослойная хроматография (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля силанизированного.

Подвижная фаза (ПФ). Аммония ацетата раствор 15%, предварительно доведенный уксусной кислотой ледяной до pH 5,0 - ацетон 70:30.

Испытуемый раствор. Растворяют 25,0 мг субстанции в 5,0 мл воды очищенной.

Раствор сравнения А. Растворяют 25 мг стандартного образца бензилпенициллина натрия в 5,0 мл воды очищенной.

Раствор сравнения Б. Растворяют 25 мг стандартного образца бензилпенициллина натрия и 25 мг стандартного образца феноксиметилпенициллина калия (CAS 132-98-9) в 5,0 мл воды.

Раствор для проверки пригодности хроматографической системы. На линию старта пластинки наносят по 1 мкл испытуемого раствора (5 мкг), раствора сравнения А (5 мкг) и раствора сравнения Б (5 мкг; 5 мкг). Пластинку с нанесенными растворами сушат на воздухе, помещают в камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат на воздухе до удаления следов растворителей, выдерживают над парами йода до проявления зон адсорбции и просматривают при дневном свете.

Пригодность хроматографической системы. Основная зона адсорбции на хроматограмме испытуемого раствора по положению, интенсивности окраски и величине должна соответствовать зоне адсорбции на хроматограмме раствора сравнения А.

Зоны адсорбции на линии старта не учитывают.

Результаты анализа считаются достоверными, если на хроматограмме раствора сравнения Б наблюдаются две четко разделенных зоны адсорбции.

3. Качественная реакция. Несколько кристаллов субстанции помещают на предметное стекло или в фарфоровую чашку, прибавляют 50 мкл раствора, состоящего из 1,0 мл 1 М раствора гидроксиламина гидрохлорида и 0,3 мл 1 М раствора натрия гидроксида. Через 2 - 3 мин к смеси прибавляют 50 мкл 1 М раствора уксусной кислоты и тщательно перемешивают, прибавляют 50 мкл 5% раствора меди (II) нитрата; должен образоваться осадок зеленого цвета.

4. Качественная реакция. Около 0,1 г субстанции сжигают в тигле. Субстанция дает характерную реакцию Б на натрий (ОФС "Общие реакции на подлинность").

Удельное вращение. От +285 до +310 в пересчете на сухое безводное вещество (2% водный раствор субстанции, ОФС "Поляриметрия").

<*> Прозрачность раствора. Свежеприготовленный 30% раствор субстанции в воде должен быть прозрачным (ОФС "Прозрачность и степень мутности жидкостей").

<*> Цветность раствора. Раствор, полученный в испытании "Прозрачность раствора", должен выдерживать сравнение с эталоном Y₅ (ОФС "Степень окраски жидкостей", метод 2).

Показатель поглощения. Оптическая плотность 0,188% водного раствора субстанции в кювете с толщиной слоя 1 см при длинах волн 280 нм и 325 нм должна быть не более 0,10 и от 0,80 до 0,88 в максимуме поглощения при длине волны 264 нм (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

При необходимости раствор дополнительно разводят для измерения при длине волны 264 нм. Оптическую плотность определяют в пересчете на основание для неразбавленного раствора (1,8 мг/мл).

pH. От 5,5 до 7,5 (2% водный раствор, ОФС "Ионометрия", метод 3).

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Подвижная фаза А (ПФА). Калия дигидрофосфата 0,5 М раствор, доведенный фосфорной кислотой разведенной 10% до pH 3,5 +/- 0,1 - метанол - вода 10:30:60.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Калия дигидрофосфата 0,5 М раствор, доведенный фосфорной кислотой разведенной 10% до pH 3,5 +/- 0,1 - метанол - вода 10:40:50.

Испытуемый раствор А. Около 50 мг (точная навеска) субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Испытуемый раствор Б. 80,0 мг субстанции помещают в мерную колбу вместимостью 20 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения А. Около 50 мг (точная навеска) стандартного образца бензилпенициллина натрия помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения Б. В мерную колбу вместимостью 50 мл помещают 10 мг стандартного образца бензилпенициллина натрия и 10 мг фенилуксусной кислоты (примесь В, CAS 103-82-2), растворяют в воде и доводят объем раствора тем же растворителем до метки.

Раствор сравнения В. 4,0 мл раствора сравнения А помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят водой до метки.

Хроматографируют испытуемый раствор Б и раствор сравнения Б в изократическом режиме, раствор сравнения В и воду (холостой раствор) в градиентном режиме.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме раствора сравнения Б разрешение (R) между пиками примеси В и бензилпенициллина должно быть не менее 6,0.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора Б:

- площадь пика любой примеси должна быть не более площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения В (не более 1%).

2-Этилгексановая кислота. Не более 0,5% (м/м) (ОФС "Определение 2-этилгексановой кислоты").

Потеря в массе при высушивании. Не более 1,0% (ОФС "Потеря в массе при высушивании", способ 1). Для определения используют около 2,0 г (точная навеска) субстанции.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

<*> Аномальная токсичность. Субстанция должна быть нетоксичной (ОФС "Аномальная токсичность"). Тест-доза - 5000 ЕД (активного вещества) субстанции в 0,5 мл воды на мышь, внутривенно. Срок наблюдения 48 ч.

<*> Бактериальные эндотоксины. Не более 0,16 ЕЭ на 1 мг субстанции (ОФС "Бактериальные эндотоксины").

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

<*> Стерильность. Субстанция должна быть стерильной (ОФС "Стерильность").

--------------------------------

<*> Контроль по показателям качества "Прозрачность раствора", "Цветность раствора", "Аномальная токсичность", "Бактериальные эндотоксины" и "Стерильность" проводят в субстанции, предназначенной для производства лекарственных препаратов для парентерального применения.

Количественное определение. Испытание проводят методом ВЭЖХ по методике, описанной в разделе "Родственные примеси".

Хроматографируют испытуемый раствор А и раствор сравнения А в изократическом режиме.

Содержание бензилпенициллина натрия C₁₆H₁₇N₂NaO₄S в субстанции в процентах (X) в пересчете на сухое вещество вычисляют по формуле:

где S₁ - площадь пика бензилпенициллина натрия на хроматограмме испытуемого раствора А;

S₀ - площадь пика бензилпенициллина натрия на хроматограмме раствора сравнения А;

a₁ - навеска субстанции, мг;

a₀ - навеска стандартного образца бензилпенициллина натрия, мг;

W - потеря в массе при высушивании, %;

P - содержание основного вещества в стандартном образце бензилпенициллина натрия, %.

Хранение. В плотно закрытой упаковке, в сухом, защищенном от света месте при температуре не выше 25 °C.