Настоящая фармакопейная статья распространяется на дезоксирибонуклеат натрия с железом комплекс, раствор для внутримышечного введения, являющийся иммуномодулирующим и противовирусным средством в отношении различных РНК и ДНК-содержащих вирусов. Препарат представляет собой биологически активное вещество - вытяжку из молок осетровых или лососевых рыб - очищенную и стандартизованную комплексную соль дезоксирибонуклеата натрия с железом.

Препарат содержит от заявленного количества не менее 93% и не более 107% дезоксирибонуклеата натрия и не менее 40% и не более 120% железа (III).

Препарат должен соответствовать ниже приведенным требованиям.

Описание. Прозрачная желтая или коричневато-желтая жидкость.

5,0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, доводят объем раствора до метки 0,1% раствором натрия хлорида и перемешивают (раствор A).

1 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, доводят объем раствора до метки 0,1% раствором натрия хлорида и перемешивают (раствор B).

Снимают спектр раствора B ультрафиолетовой области в диапазоне длин волн от 220 до 300 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют натрия хлорида раствор 0,1%. Полученный спектр должен иметь максимум поглощения при (260 +/- 2) нм и минимум поглощения при (230 +/- 2) нм, отношение оптических плотностей Dmax/Dmin должно быть не менее 2.0 (гетероциклические азотистые основания).

Реактив Дише. 1 г дифениламина растворяют в 100 мл ледяной уксусной кислоты, добавляют 2,75 мл серной кислоты концентрированной и перемешивают. Раствор используют свежеприготовленным.

0,1 мл препарата помещают в пробирку со шлифом вместимостью 10 мл, прибавляют 2 мл воды и 2 мл реактива Дише, соединяют пробирку с воздушным холодильником, снабженным шлифом и нагревают на кипящей водяной бане в течение 10 мин. Появляется синее окрашивание раствора (дезоксирибоза).

10 мл препарата помещают в коническую колбу, прибавляют 2 мл раствора натрия гидроксида 10%, нагревают до кипения и кипятят 2 - 3 мин. Охлаждают при температуре от 15 до 25 °C в течение 3 - 5 мин. Выпадает осадок коричнево-желтого цвета (железо).

Прозрачность. Должен быть прозрачным. Определение проводят в соответствии с ОФС. "Прозрачность и степень мутности жидкостей".

Цветность. Окраска препарата должна быть не интенсивнее эталонного раствора BY₂ и не слабее эталонного раствора BY₇. Определение проводят в соответствии с ОФС "Степень окраски жидкостей".

pH. От 5,7 до 7.0. Определение проводят потенциометрическим методом в соответствии с ОФС "Ионометрия".

Извлекаемый объем. Должен быть не менее номинального. Определение проводят в соответствии с ОФС "Извлекаемый объем лекарственных форм для парентерального применения".

Видимые механические включения. Препарат должен соответствовать требованиям ОФС "Видимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения и глазных лекарственных формах".

Невидимые механические включения. Среднее число частиц размером 10 мкм и более не должно превышать 6000, размером 25 мкм и более не должно превышать 600. Определение проводят в соответствии с ОФС "Невидимые механические включения в лекарственных формах для парентерального применения", счетно-фотометрический метод.

Аномальная токсичность. Препарат должен выдерживать испытание ОФС "Аномальная токсичность". Тест-доза: 7.5 мг в 0,5 мл препарата на мышь, внутримышечно. Срок наблюдения 48 час.

Пирогенность. Препарат должен быть апирогенным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Пирогенность". Тест-доза: 3,75 мг в 0,25 мл препарата на 1 кг массы животного, внутримышечно.

Бактериальные эндотоксины. Предельное содержание не более 4,67 ЕЭ на 1 мг натрия дезоксирибонуклеата. Определение проводят в соответствии с ОФС "Бактериальные эндотоксины". Для проведения анализа препарат разводят водой для ЛАЛ-теста не менее чем в 1000 раз.

Стерильность. Должен быть стерильным. Определение проводят в соответствии с ОФС "Стерильность".

Измеряют оптическую плотность раствора C (приготовление раствора C приведено в разделе "Гиперхромизм") на спектрофотометре при длинах волн 270 и 290 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Содержание натрия дезоксирибонуклеата (X) в г/мл вычисляют по формуле:

где: D₂₇₀, D₂₉₀ - оптические плотности раствора C при 270 нм и 290 нм;

10⁶ - перевод микрограммов в граммы;

0,198 - разность удельных показателей поглощения натрия дезоксирибонуклеата при длинах волн 270 и 290 нм (концентрации фосфора 1 мкг/мл);

5 - объем раствора препарата, взятый для определения, мл;

1 - объем раствора A, взятый для приготовления раствора C (см. "Гиперхромизм")

100, 25 - разведение раствора препарата при приготовлении раствора C (см. "Гиперхромизм");

10,7 - коэффициент пересчета фосфора на натрия дезоксирибонуклеат.

Содержание дезоксирибонуклеата натрия от заявленного в препарате должно быть не менее 40% и не более 120% железа (III) (от 0,02 до 0,06 мг/мл).

2 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 10 мл сульфосалициловой кислоты раствора 10%. перемешивают (выпадает осадок), добавляют 5 мл аммиака раствора 10% и нагревают на водяной бане при температуре 60 °C до полного растворения осадка. Раствор охлаждают, доводят до метки водой и перемешивают. Измеряют оптическую плотность на спектрофотометре раствора в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 440 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий в том же количестве все реактивы, кроме препарата.

Содержание железа (X) (III) в мг/мл вычисляют по формуле:

где: a - содержание железа (III), найденное по калибровочному графику, мг;

2 - объем раствора препарата, взятый для определения, мл.

Содержание железа (III) от заявленного количества в препарате должно быть не менее 40% и не более 120% железа (III) (от 0.02 мг/мл до 0,06 мг/мл).

Стандартный раствор иона железа (III) 0,7 мг/мл. Около 6,0397 г (точная навеска) железоаммониевых квасцов, NH₄Fe(SO₄)₂·12H₂O растворяют в 1000 мл воды, подкисленной 10 мл хлористоводородной кислотой концентрированной.

Стандартный раствор иона железа (III) 0,07 мг/мл. 10 мл полученного раствора помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл доводят объем раствора до метки водой и перемешивают.

Для построения калибровочного графика в 10 мерных колб вместимостью 25 мл отбирают 0,2; 0,4; 0,5; 0,7; 0,8; 1,0; 1,2; 1,4; 1.6; 1,8 мл раствора с содержанием иона железа (III) 0,07 мг/мл, добавляют 10 мл сульфосалициловой кислоты 10%, 5 мл аммиака раствора 10%, перемешивают, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Содержание железа (III) в калибровочных растворах составляет соответственно: 0,014, 0.028, 0,035, 0,049, 0,056, 0,070, 0,084, 0,098, 0,112, 0,126 мг. Растворы используют свежеприготовленными.

На спектрофотометре измеряют оптическую плотность полученных растворов в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 440 нм. В качестве раствора сравнения используют раствор, содержащий в том же количестве все реактивы, кроме железа. Строят график зависимости оптической плотности от содержания иона железа (III) в растворе.

Характеристическая вязкость. Значение характеристической вязкости должно быть от 1,55·10² мл/г до 3,50·10² мл/г (ОФС "Вязкость").

20.0 мл препарата помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл. доводят объем раствора до метки 0,1% раствором натрия хлорида, предварительно профильтрованного через стеклянный фильтр с диаметром пор 10 - 40 мкм, и перемешивают (раствор D). Из раствора D готовят растворы с различными концентрациями дезоксирибонуклеата натрия (конечные растворы). Для этого в пять мерных колб вместимостью 25 мл последовательно отбирают 5,0 мл, 7,5 мл. 10.0 мл. 12,5 мл, 15.0 мл раствора D. доводят объем растворов до метки 0,1% раствором натрия хлорида, предварительно профильтрованного через стеклянный фильтр с диаметром пор 10 - 40 мкм. перемешивают.

В капиллярном вискозиметре ВПЖ 2 с номинальным диаметром капилляра 0.56 мм при температуре (25 +/- 0.1) °C определяют время истечения 0,1% раствора натрия хлорида, предварительно профильтрованного через стеклянный фильтр с диаметром пор 10 - 40 мкм, и каждого конечного раствора как среднее трех измерений.

Вычисляют концентрацию конечных растворов (C_n) в г/мл на основании результатов количественного определения дезоксирибонуклеата натрия в препарате по формуле:

где: X - концентрация натрия дезоксирибонуклеата в препарате, г/мл (определена в разделе "Количественное определение. Натрия дезоксирибонуклеат");

V_n - объем раствора D, взятый для приготовления конечного раствора, мл;

20 - объем раствора препарата, взятого для приготовления раствора D, мл;

100 - разведение раствора препарата;

25 - разведение раствора D.

Для каждого конечного раствора рассчитывают приведенную вязкость по формуле:

где: t₀ - время истечения натрия хлорида раствора 0,1%, сек;

t_n - время истечения конечного раствора, сек;

Cn - концентрация конечного раствора, г/мл.

Строят зависимость от концентрации C_n, графически или линейным методом наименьших квадратов экстраполируют приведенную вязкость к нулевой концентрации, т.е. находят характеристическую вязкость .

Кислоты хлорной раствор 10%. 115 мл хлорной кислоты (60%) помещают в мерную колбу вместимостью 1000 мл, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают. Раствор хранят при температуре от 15 до 25 °C в течение 6 мес.

Измеряют оптическую плотность раствора B (раздел "Подлинность") на спектрофотометре при длине волны 260 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве сравнения используют натрия хлорида раствор 0,1%.

1 мл раствора A (раздел. "Подлинность") помещают в пробирку вместимостью 20 мл, прибавляют 10 мл хлорной кислоты раствора 10%, прикрывают пробкой и нагревают на кипящей водяной бане в течение 20 мин. Раствор охлаждают до температуры от 15 до 25 °C, количественно переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора до метки водой (раствор C).

Измеряют оптическую плотность раствора C на спектрофотометре при длине волны 260 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют воду.

Гиперхромизм (X) в процентах вычисляют по формуле:

где: Do - оптическая плотность раствора B при длине волны 260 нм;

Di - оптическая плотность раствора C при длине волны 260 нм;

Гиперхромизм должен быть не менее 10%.

Хранение. В защищенном от света месте при температуре от 4 °C до 20 °C в соответствии с ОФС "Хранение лекарственных средств".