7H-Пурин-6-тиол моногидрат.

Содержит не менее 99,0% и не более 101,0% меркаптопурина C₅H₄N₄S в пересчете на безводное и свободное от остаточных растворителей вещество.

Описание. Желтый кристаллический порошок без запаха или почти без запаха.

Растворимость. Растворим в горячей воде и серной кислоте разведенной 16%, умеренно растворим в натрия гидроксида растворе 0,1 М, мало растворим в хлористоводородной кислоте разведенной 8,3%, практически нерастворим в воде.

1. ИК-спектрометрия (ОФС "Спектрометрия в средней инфракрасной области"). Инфракрасный спектр субстанции в области от 4000 до 400 см^-1 по положению полос поглощения должен соответствовать спектру фармакопейный стандартного образца изониазида.

2. Спектрофотометрия (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях")

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 20 мг субстанции, растворяют в 5 мл диметилсульфоксида и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой 0,37% до метки. В мерную колбу вместимостью 200 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора хлористоводородной кислотой 0,37% до метки.

Спектр поглощения испытуемого раствора в области длин волн от 230 до 350 нм должен иметь только один максимум при 325 нм.

3. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 0,5 мл натрия гидроксида раствора 10%, доводят объем раствора водой до 2 мл и прибавляют 0,5 мл свежеприготовленного натрия нитропруссида раствора 1%. Полученный раствор встряхивают; должно появиться желтовато-зеленое окрашивание, переходящее при подкислении хлористоводородной кислотой разведенной 8,3% в темно-зеленое.

4. Качественная реакция. Растворяют 50 мг субстанции в 5 мл аммиака раствора 10% и прибавляют по каплям свежеприготовленную смесь равных объемов меди(II) хлорида раствора 3% и гидроксиламина гидрохлорида раствора 20%; должен выпасть оранжево-желтый осадок.

Родственные примеси. Определение проводят методом ВЭЖХ (ОФС "Высокоэффективная жидкостная хроматография").

Растворы готовят непосредственно перед использованием.

Подвижная фаза А (ПФА). Метанол - муравьиной кислоты безводной раствор 0,1% о/о 20:980.

Подвижная фаза Б (ПФБ). Метанол - муравьиной кислоты безводной раствор 0,1% о/о 500:500.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 12 мг субстанции, растворяют в 2,5 мл метанола и доводят объем раствора муравьиной кислоты безводной раствором 0,1% о/о до метки.

Стандартный раствор. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 4,5 мг стандартного образца примеси A и 3,0 мг стандартного образца примеси B, растворяют в ПФА и доводят объем раствора тем же растворителем до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем ПФА до метки.

Раствор стандартного образца примеси D. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 3 мг стандартного образца примеси D, растворяют в 10 мл диметилсульфоксида и доводят объем раствора ПФА до метки. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора ПФА до метки.

Раствор сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 мл помещают 1,0 мл испытуемого раствора и доводят объем муравьиной кислоты безводной раствором 0,1% о/о до метки. В мерную колбу вместимостью 20 мл помещают 2,0 мл полученного раствора и доводят объем муравьиной кислоты безводной раствором 0,1% о/о до метки.

Примечание

Примесь A (гипоксантин): 1,7-Дигидро-6H-пурин-6-он [68-94-0].

Примесь B (аденин): 7H-пурин-6-амин [443-72-1].

Примесь D: 6,6'-дисульфанедиил-7-H-пурин [90947-51-6].

Хроматографируют стандартный раствор, раствор стандартного образца примеси D, раствор сравнения и испытуемый раствор.

Относительное время удерживания соединений. Меркаптопурин - 1 (около 6 мин); примесь B - около 0,3; примесь A - около 0,5; примесь D - около 3,5.

Идентификация примесей. Для идентификации пиков примесей A и B используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму стандартного раствора; для идентификации пика примеси D используют относительное время удерживания соединений и хроматограмму раствора стандартного образца примеси D.

Пригодность хроматографической системы. На хроматограмме стандартного раствора разрешение (R_S) между пиками примесей B и A должно быть не менее 5,0.

Поправочные коэффициенты. Для расчета содержания площадь пика примеси D умножают на 0,25.

Допустимое содержание примесей. На хроматограмме испытуемого раствора:

- площадь пика примеси A не должна превышать площадь пика примеси A на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,15%);

- площадь пика примеси B не должна превышать площадь пика примеси B на хроматограмме стандартного раствора (не более 0,10%);

- площадь пика примеси D не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%);

- площадь пика любой другой примеси не должна превышать площадь основного пика на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,10%);

- сумма примесей не должна превышать 0,3%.

Не учитывают пики, площадь которых менее 0,5 площади основного пика на хроматограмме раствора сравнения (менее 0,05%).

Вода. Не менее 10,0% и не более 12,0% (ОФС "Определение воды", метод 1). Для определения используют 0,1 г (точная навеска) субстанции.

Сульфатная зола. Не более 0,1% (ОФС "Сульфатная зола"). Для определения используют 1 г (точная навеска) субстанции.

Тяжелые металлы. Не более 0,002%. Определение проводят в соответствии с ОФС "Тяжелые металлы" (метод 3А или 3Б) в зольном остатке, полученном в испытании "Сульфатная зола", с использованием эталонного раствора 2.

Остаточные органические растворители. В соответствии с ОФС "Остаточные органические растворители".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

Определение проводят методом титриметрии (ОФС "Титриметрия (титриметрические методы анализа)").

Растворяют 0,1 г (точная навеска) субстанции в 50 мл диметилформамида и титруют 0,1 М раствором тетрабутиламмония гидроксида. Конечную точку титрования определяют потенциометрически (ОФС "Потенциометрическое титрование").

Параллельно проводят контрольный опыт.

1 мл 0,1 М раствора тетрабутиламмония гидроксида соответствует 15,22 мг безводного меркаптопурина C₅H₄N₄S.

Хранение. В герметично закрытой упаковке в защищенном от света месте.