ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранная в фазу бутонизации, начала цветения и цветения высушенная трава многолетнего культивируемого травянистого растения мелиссы лекарственной - Melissa officinalis L., сем. яснотковых - Lamiaceae.

Содержит не менее 2,0% суммы фенольных соединений в пересчете на розмариновую кислоту в сухом сырье.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС "Травы".

Цельное сырье. Верхние части стеблей длиной до 35 см с супротивными черешковыми листьями, бутонами или цветками, отдельные листья, цветки, куски стеблей. Листья скрученные, тонкие, яйцевидные с клиновидным основанием, с городчатым краем и перистым жилкованием, слегка опушенные. Стебли четырехгранные, продольно-желобчатые, слабоопушенные, с рыхлой серовато-белой сердцевиной, толщиной до 3 мм. Цветки и бутоны в ложных мутовках в пазухах верхних листьев. Прицветники эллиптические, заостренные или продолговатые, чашечка двугубая, опушенная, с плоской верхней губой. Венчик 13 - 15 мм длины, в полтора-два раза длиннее чашечки, двугубый, с плоской двураздельной верхней губой и трехраздельной нижней. Тычинок 4, две из которых короче двух других.

Листья зеленые, серовато-зеленые, иногда зеленовато-коричневые, стебли от светло-зеленого до зеленовато-серого цвета, на изломе серовато-белые. Венчик желтовато-белый.

Запах слабый, характерный.

Измельченное сырье. Смесь кусочков стеблей, листьев, цветков и бутонов различной формы, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм.

При рассмотрении под лупой должны быть видны кусочки листьев зеленого, серовато-зеленого или зеленовато-коричневого цвета; черешков, стеблей серовато-зеленого или светло-зеленого цвета, редко серовато-зеленой или коричневатой чашечки и желтовато-белого венчика; кусочки стеблей часто расщеплены в продольном сечении и имеют желтовато-белую губчатую сердцевину. На фрагментах листовых пластинок заметны многочисленные темно-коричневые блестящие округлые образования (эфирномасличные железки), беловатые волоски, особенно многочисленные на кусочках мелких молодых листьев.

Цвет от зеленого до зеленовато-коричневого с серовато-зелеными, светло-зелеными, светло-коричневыми, коричневыми, коричневато-белыми, желтовато-белыми вкраплениями.

Запах слабый, характерный.

Порошок. Кусочки стеблей, листьев, цветков и бутонов различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм.

Цвет от зеленого до зеленовато-коричневого с серовато-зелеными, светло-зелеными, светло-коричневыми, коричневыми, коричневато-белыми, желтовато-белыми вкраплениями.

Запах слабый, характерный.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС "Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения".

Цельное сырье, измельченное сырье. При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны клетки верхнего эпидермиса, стенки клеток извилистые. Клетки нижнего эпидермиса мельче с более извилистыми стенками. Устьичный комплекс на обеих сторонах листа диацитного типа.

Клетки эпидермиса по жилке вытянутой формы, угловатые, с заметно четковидноутолщенной клеточной стенкой. На нижней стороне листовой пластинки в небольших углублениях находятся эфирномасличные железки. Крупная головка железки состоит из 8-ми радиально расположенных выделительных клеток и одноклеточной короткой ножки. Изредка встречаются железистые волоски на короткой ножке, состоящей из одной, реже - трех клеток. Головка волоска овальная, как правило, состоит из двух клеток.

По поверхности жилок и по краю листа встречаются длинные 3- и 6-клеточные простые волоски. Клетки волосков толстостенные с бородавчатой кутикулой.

Поверхность листа покрыта мелкими одноклеточными сосочковидными волосками, конусовидными по форме, с бородавчатой кутикулой.

По всей поверхности листовой пластинки, вдоль жилок, локализованы длинные железистые волоски. Ножка волоска многоклеточная (2 - 4 клетки) с гладкой кутикулой. Головка одноклеточная, булавовидной формы, с окрашенным в светло-коричневый цвет протопластом.

При рассмотрении микропрепаратов венчика цветка должны быть видны клетки эпидермиса венчика с сильно извилистыми стенками. Для фрагментов венчика характерны также волоски шлангообразной или пальцевидной формы, 1 - 3-клеточные, покрытые шероховатой кутикулой, иногда со спавшимися клетками. Железистые волоски на одноклеточной ножке с шаровидной одноклеточной головкой, реже встречаются волоски с шаровидной головкой на длинной 1 - 3-клеточной ножке.

При рассмотрении "давленого" препарата стебля должны быть видны прямоугольно вытянутые клетки эпидермиса с прямыми стенками и устьица диацитного типа. На поверхности встречаются мелкие одноклеточные сосочковидные и конусовидные волоски с бородавчатой кутикулой, а также головчатые волоски с одноклеточной шаровидной головкой на короткой одноклеточной ножке; толстостенные механические волокна; проводящие пучки представлены спиральными сосудами.

Порошок. При рассмотрении микропрепаратов порошка должны быть видны фрагменты эпидермиса листьев, клетки которого имеют извилистые стенки и устьица диацитного типа; эфирномасличные железки округлой формы с 8 (реже 6) радиально расположенными выделительными клетками, многочисленные волоски 2-х типов: простые - от мелких одноклеточных сосочковидных и конусовидных, до очень крупных многоклеточных, как бородавчатых, так и гладкостенных (у крупных волосков часто одна или несколько спавшихся клеток) и головчатые - в большом количестве мелкие с одноклеточной шаровидной головкой на длинной 1 - 3-клеточной ножке; такие же волоски встречаются на фрагментах чашечки и венчика. Клетки эпидермиса венчика с сильно извилистыми стенками. Для венчика характерны также волоски шлангообразной или пальцеобразной формы, 1 - 3-клеточные, покрытые штриховатой кутикулой, иногда со спавшимися клетками.

При рассмотрении "давленых" микропрепаратов должны быть видны многочисленные фрагменты листовых пластинок зеленого цвета, жилок листа, длинных кроющих и головчатых волосков.

Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС "Тонкослойная хроматография").

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ). Вода - муравьиная кислота безводная - этилацетат 3:3:45.

Испытуемый раствор. В коническую колбу со шлифом вместимостью 50 мл, помещают 1,0 г сырья, измельченного до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, прибавляют 10 мл спирта 96%, нагревают с обратным холодильником на водяной бане в течение 10 мин. После охлаждения полученное извлечение фильтруют через беззольный фильтр.

Раствор стандартного образца лютеолин-7-глюкозида. Около 5 мг стандартного образца лютеолин-7-глюкозида растворяют в 10 мл спирта 96%.

Раствор стандартного образца розмариновой кислоты. Около 5 мг стандартного образца розмариновой кислоты растворяют в 10 мл спирта 96%.

Реактив для детектирования 1. Дифенилборной кислоты аминоэтилового эфира раствор 1% в спирте 96%.

Реактив для детектирования 2. Макрогола 400 раствор спиртовой 5%.

На линию старта пластинки наносят 20 мкл испытуемого раствора, 2 мкл раствора стандартного образца лютеолин-7-глюкозида и 5 мкл раствора стандартного образца розмариновой кислоты. Пластинку с нанесенными пробами сушат на воздухе, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 1 ч ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90% от линии старта пластинки, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей.

Затем выдерживают при 100 - 105 °C в течение 2 мин и еще горячую опрыскивают реактивом для детектирования 1, затем сушат в вытяжном шкафу в течение 5 мин и опрыскивают реактивом для детектирования 2. Через 30 мин просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм.

Результат. На хроматограмме растворов стандартных образцов должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией от желтого до желто-оранжевого цвета (лютеолин-7-глюкозид); в верхней части пластинки должна обнаруживаться зона адсорбции с флуоресценцией голубого цвета (розмариновая кислота).

На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: зона адсорбции с флуоресценцией от желтого до желто-оранжевого цвета на уровне зоны адсорбции стандартного образца лютеолин-7-глюкозида; зона адсорбции с флуоресценцией голубого цвета на уровне зоны адсорбции стандартного образца розмариновой кислоты; допускается обнаружение других зон адсорбции.

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 12,0% (ОФС "Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения").

Зола общая. Не более 12,0% (ОФС "Зола общая").

Зола, не растворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 3,0% (ОФС "Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте").

Измельченность сырья. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм, - не более 5%.

Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм, - не более 17%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, - не более 5%.

Порошок: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 2 мм, - не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,18 мм - не более 10%.

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС "Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Стеблей (в том числе отделенных при анализе). Цельное сырье, измельченное сырье - не более 50%.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2%.

Минеральная примесь. Не более 1%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС "Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Радионуклиды. В соответствии с ОФС "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Зараженность вредителями запасов. В соответствии с ОФС "Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов".

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с ОФС "Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах".

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС "Микробиологическая чистота".

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Определение проводят методом спектрофотометрии (ОФС "Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях").

Исходный раствор. Аналитическую пробу сырья измельчают до величины частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм. Помещают 1,0 г (точная навеска) измельченного сырья в колбу с притертой пробкой вместимостью 100 мл, прибавляют 40 мл спирта 70% и взвешивают с погрешностью +/- 0,01 г. Колбу с содержимым присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане в течение 1 ч. Затем содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры и взвешивают, при необходимости доводят спиртом 70% до первоначальной массы. Содержимое колбы фильтруют через беззольный фильтр.

Испытуемый раствор. В мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 1,0 мл исходного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки. Далее в мерную колбу вместимостью 25 мл помещают 5,0 мл полученного раствора и доводят объем раствора спиртом 96% до метки.

Оптическую плотность испытуемого раствора измеряют на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 326 нм относительно спирта 96%.

Содержание суммы фенольных соединений в пересчете на розмариновую кислоту в сухом сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

где A - оптическая плотность испытуемого раствора;

500 - удельный показатель поглощения розмариновой кислоты при длине волны 326 нм, ;

a - навеска сырья, г;

W - влажность сырья, %.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ПЕРЕВОЗКА

В соответствии с ОФС "Упаковка, маркировка и перевозка лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС "Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов".