Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 24 сентября 1986 г. N 2790 срок действия установлен

Разработан Министерством рыбного хозяйства СССР.

Исполнители: В.А. Исаев, А.Н. Головин, С.Г. Кириченко, В.Е. Астахов, Н.К. Жайворонок, Л.Л. Светлова, Н.И. Веселова, Ю.Н. Арсеньев.

Внесен Министерством рыбного хозяйства СССР.

Зам. министра А.Н. Гульченко.

Утвержден и введен в действие Постановлением Государственного комитета СССР по стандартам от 24 сентября 1986 г. N 2790.

Настоящий стандарт устанавливает методы определения консервантов: бензойнокислого натрия в пресервах из рыбы и морепродуктов, а также буры и борной кислоты в икре разных видов рыб.

1.1. Отбор проб и подготовка к испытанию пресервов - по ГОСТ 8756.0-70; отбор проб и подготовка к испытанию икры - по ГОСТ 7631-85 и ГОСТ 7636-85.

2.1. Сущность метода

Метод основан на титровании бензойной кислоты, экстрагированной хлороформом или этиловым эфиром из безбелковой водной вытяжки, щелочью в присутствии фенолфталеина.

2.2. Аппаратура, реактивы, материалы

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 1 кг IV класса точности по ГОСТ 24104-88.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г не ниже 2-го класса точности по ГОСТ 24104-88.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Колбы мерные 2-500-2; 2-1000-2 по ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные 1-25; 1-50; 1-100 по ГОСТ 1770-74.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Чашки выпарительные по ГОСТ 9147-80.

Воронки В-25-38-ХС по ГОСТ 25336-82.

Воронки делительные ВД-1-500-ХС по ГОСТ 25338-82.

Колбы круглодонные К-1(2)-250 ТХС по ГОСТ 25336-82.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Бюретки 1(2, 3)-2-25-0,1; 1(2, 3)-2-50-0,1 по ГОСТ 20292-74.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Пипетки 1(2)-2-2; 6(7)-2-5; 6(7)-2-10; 2-2-20; 2-2-100 по ГОСТ 20292-74.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Капельницы по ГОСТ 25336-82.

Баня водяная.

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76 или фильтры бумажные.

Марля медицинская по ГОСТ 9412-77.

Палочки стеклянные по ГОСТ 21400-75.

Бумага индикаторная лакмусовая или универсальная по ГОСТ 4919.1-77.

Цинк сернокислый по ГОСТ 4174-77, ч.д.а., раствор массовой концентрации 300 г/дм3.

Калий железистосинеродистый по ГОСТ 4207-75, ч.д.а., раствор массовой концентрации 150 г/дм3.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, ч., раствор 1:1.

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, ч.д.а., раствор массовой концентрации 100 г/дм3 и раствор концентрации c (NaOH) = 0,05 моль/дм3.

Фенолфталеин по нормативно-технической документации, спиртовой раствор массовой концентрации 10 г/дм3, готовят по ГОСТ 4919.1-77.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Хлороформ по ГОСТ 20015-74.

Эфир этиловый, ч.д.а., не содержащий перекисей.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87 или спирт этиловый ректификованный по ГОСТ 5962-67.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Кислота бензойная по ГОСТ 10521-78, ч.д.а.

Калий йодистый по ГОСТ 4232-74, ч.д.а., раствор массовой концентрации 20 г/дм3.

Калия гидроокись по ГОСТ 24363-80, ч.д.а.

Кислота соляная по ГОСТ 3118-77, х.ч., раствор с массовой долей 10%, плотностью 1050 кг/м3.

Крахмал растворимый по ГОСТ 10163-76, раствор массовой концентрации 10 г/дм3.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Колбы конические или плоскодонные вместимостью 250 и 500 см3 по ГОСТ 25336-82.

(абзац введен Изменением N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Испаритель ротационный с ловушкой по нормативно-технической документации.

(абзац введен Изменением N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Допускается использовать другую стеклянную посуду и оборудование, обеспечивающие требуемую точность измерений.

2.3. Подготовка к испытанию

При работе с этиловым эфиром его проверяют на присутствие перекисей и при наличии их проводят очистку.

Присутствие перекисей обнаруживают по выделению йода из подкисленного раствора йодистого калия.

В пробирку с 2 - 3 см3 эфира добавляют равный объем раствора йодистого калия, подкисленного 3 - 5 каплями раствора соляной кислоты плотностью 1050 кг/м3, и хорошо встряхивают в течение 1 - 2 мин. При наличии перекисей выделяющийся йод может быть обнаружен по бурому окрашиванию эфирного слоя или по появлению синего окрашивания при добавлении к пробе 1 см3 раствора крахмала.

Для очистки этилового эфира от перекисей в колбу с 65 - 70 г порошкообразной гидроокиси калия добавляют около 1 дм3 этилового эфира.

Содержимое встряхивают в течение 3 мин. После отстаивания проверяют эфир на отсутствие перекисей, фильтруют через бумажный складчатый фильтр и хранят в темном месте.

Допускается проводить очистку этилового эфира от перекисей по ГОСТ 26829-86.

2.4. Проведение испытания

Из подготовленной пробы отвешивают 100 г в выпарительную чашку и количественно переносят ее дистиллированной водой в мерную колбу вместимостью 500 см3, доводя объем в колбе до 250 - 300 см3.

Содержимое колбы подщелачивают до pH 7,5 - 8,0 (по лакмусу или универсальной индикаторной бумаге) раствором гидроокиси натрия массовой концентрации 100 г/дм3, нагревают на кипящей водяной бане в течение 30 мин, затем охлаждают до комнатной температуры.

В колбу приливают 20 см3 водного раствора железистосинеродистого калия и 20 см3 водного раствора сернокислого цинка, осторожно перемешивая содержимое после прибавления каждого реактива и оставляют на 30 мин. Объем в колбе доводят дистиллированной водой до метки, хорошо перемешивают и фильтруют в сухую колбу сначала через двойной слой марли, а затем через бумажный складчатый фильтр. Фильтрат должен быть прозрачным.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

100 см3 полученного фильтрата количественно переносят в делительную воронку, нейтрализуют (по лакмусу или универсальной индикаторной бумаге) раствором серной кислоты и добавляют еще 2 см3 указанного раствора серной кислоты при экстракции эфиром. При экстракции хлороформом допускается подкисление соляной кислотой.

При использовании этилового эфира экстракцию бензойной кислоты проводят три раза последовательно 40, 30 и 30 см3 эфира осторожными вращательными движениями делительной воронки в течение 5 мин.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Объединенные в делительной воронке эфирные вытяжки промывают дистиллированной водой три раза по 15 см3, удаляя каждый раз нижний водный слой после отстаивания. Водная фаза последней промывки должна иметь нейтральную реакцию по лакмусу или универсальной индикаторной бумаге.

Эфир из делительной воронки сливают в колбу и отгоняют или выпаривают досуха при температуре водяной бани не выше 40 °C.

При использовании хлороформа экстракцию проводят четыре раза, последовательно 35; 25; 20 и 15 см3 хлороформа.

Каждую экстракцию проводят в течение 5 мин осторожными вращательными движениями делительной воронки. После разделения слоев хлороформ сливают в сухую перегонную колбу, не захватывая водного слоя.

При попадании водного слоя в хлороформную вытяжку ее переносят из колбы в чистую делительную воронку и промывают 15 см3 дистиллированной воды.

Хлороформный слой из делительной воронки сливают в сухую перегонную колбу и отгоняют 3/4 объема хлороформа на водяной бане при температуре 65 - 70 °C, остаток выпаривают досуха при температуре (55 +/- 5) °C.

К сухому остатку в колбе после удаления эфира или хлороформа добавляют 30 - 50 см3 этилового спирта, нейтрального по фенолфталеину, 7 - 10 см3 дистиллированной воды, 2 капли фенолфталеина и титруют раствором гидроокиси натрия c (NaOH) = 0,05 моль/дм3.

2.5. Обработка результатов

Массовую долю бензойнокислого натрия (X) в процентах вычисляют по формуле

где V - объем раствора гидроокиси натрия 0,05 моль/дм3, израсходованный на титрование, см3;

K - коэффициент пересчета на точно 0,05 моль/дм3 раствор гидроокиси натрия;

0,0071 - количество бензойнокислого натрия, соответствующее 1 см3 точно 0,05 моль/дм3 раствора гидроокиси натрия, г;

- объем, до которого доведена навеска, см3;

- коэффициент, учитывающий открываемость методики, для этилового эфира - 1,25, для хлороформа - 1,43;

- объем фильтрата, взятый для экстракции, см3;

m - масса навески продукта, г.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Вычисление проводят до третьего десятичного знака. За результат испытания принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,005. Результат округляют до второго десятичного знака.

Предел абсолютной погрешности результата при доверительной вероятности P = 0,95.

Абзац исключен с 1 октября 1990 года. - Изменение N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453.

2а.1. Сущность метода

Метод основан на извлечении бензойной кислоты этиловым эфиром из безбелковой водной вытяжки, хроматографическом разделении в тонком слое сорбента и спектрофотометрическом определении содержания бензойной кислоты из элюата.

2а.2. Аппаратура, реактивы, материалы

Аппаратура, реактивы, материалы - по п. 2.2, кроме бюреток, капельниц, натрия гидроокиси, фенолфталеина, спирта этилового, а также указанные ниже.

Колбы мерные 2-25-2 по ГОСТ 1770-74.

Цилиндры мерные 1-10; 2-5(10) по ГОСТ 1770-74.

Пробирки мерные П-2-5(10)-0,2 ХС по ГОСТ 1770-74.

Пробирки П4-15(20)-ХС по ГОСТ 25336-82.

Колбы круглодонные К-1(2)-50-ТХС; К-1(2)-100-ТХС по ГОСТ 25336-82.

Баня песчаная.

Камера для тонкослойной хроматографии.

Пластинки "Силуфол UV 254 нм" 20 x 20 см.

Микрошприц МШ-10 вместимостью 10 мкл или калиброванные стеклянные капилляры.

Карандаш простой М или 2М.

Источник ультрафиолетового излучения с рабочей длиной волны 254 нм.

Фен или вентилятор.

Спектрофотометр.

Натрий сернокислый безводный по ГОСТ 4166-76.

Эфир этиловый уксусной кислоты (этилацетат) х.ч. по ГОСТ 22300-76.

Эфир петролейный, фракция с температурой кипения от 40 до 70 °C.

Кислота муравьиная, ч. по ГОСТ 5848-73.

Допускается использовать другую стеклянную посуду и лабораторное оборудование с техническими характеристиками, обеспечивающими требуемую точность измерения.

2а.3. Подготовка к испытанию

2а.3.1. Подготовка к испытанию - по п. 2.3.

2а.3.2. Приготовление стандартного раствора бензойной кислоты

Отвешивают 100 мг бензойной кислоты, переносят в мерную колбу вместимостью 25 см3 и доводят до метки этиловым эфиром. Допускается использование этилацетата. Массовая концентрация полученного раствора должна быть 4 мг/см3.

2а.4. Проведение испытания

Экстракт, полученный по п. 2.4 с использованием этилового эфира, сушат в течение 2 ч над 6 г безводного сернокислого натрия, затем фильтруют через сухой складчатый фильтр в сухую колбу с притертой пробкой.

20 см3 экстракта упаривают на ротационном испарителе или в выпарительной чашке на песчаной бане при температуре не более 40 °C почти досуха. Остаток экстракта количественно переносят в мерный цилиндр или мерную пробирку и доводят объем этиловым эфиром до 2 см3.

Пластинку силуфола размечают простым мягким карандашом и на линию старта микрошприцем или калиброванным капилляром наносят 4 - 5 точек по 10 мкл полученного экстракта с постоянным поддувом холодного воздуха феном или вентилятором. Диаметр наносимого пятна не должен превышать 2 - 3 мм.

Одновременно на пластинку наносят 2 - 3 точки по 10 мкл стандартного раствора бензойной кислоты. Пластинку подсушивают и опускают в камеру для тонкослойной хроматографии, куда предварительно наливают смесь растворителей, состоящую из 20 см3 петролейного эфира, 12 см3 хлороформа, 2,8 см3 этилового эфира и 1,2 см3 муравьиной кислоты.

После прохождения фронтом растворителей около 15 см от линии старта пластинку вынимают, подсушивают в вытяжном шкафу с использованием фена или вентилятора без подогрева воздуха до исчезновения резкого запаха муравьиной кислоты и рассматривают в ультрафиолетовом свете.

Обводят карандашом темные пятна бензойной кислоты, выделенной из экстракта и стандартного раствора бензойной кислоты. Обведенные зоны вырезают ножницами и помещают в пробирки, в которые приливают по 3 см3 этилового эфира. Пробирки закрывают пробками и встряхивают 1 мин.

Полученные элюаты сливают в кварцевые кюветы и на спектрофотометре, используя длину волны 272 нм, измеряют оптическую плотность экстракта и стандартного раствора бензойной кислоты относительно этилового эфира.

2а.5. Обработка результатов

Массовую долю бензойнокислого натрия (X) в процентах вычисляют по формуле

где

- количество бензойной кислоты в стандартном растворе, нанесенное на пластинку, мкг;

- оптическая плотность экстракта относительно этилового эфира, усл. ед.;

- оптическая плотность стандартного раствора бензойной кислоты относительно этилового эфира, усл. ед.;

- объем экстракта, нанесенный на пластинку, см3;

- объем, до которого доведена навеска, см3;

- объем этилового эфира, используемый для экстракции бензойной кислоты, см3;

- объем, до которого упаривают экстракт, см3;

- объем экстракта, используемого для упаривания, см3;

- объем фильтрата, используемого для экстракции, см3;

- масса навески продукта, г;

1,18 - коэффициент пересчета на бензойнокислый натрий;

1,25 - коэффициент, учитывающий открываемость методики.

При использовании объемов и навески, указанных в пп. 2.4 и 2а.4, формулу (1) можно упростить:

Вычисления проводят до третьего десятичного знака.

За результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,005.

Результат округляют до второго десятичного знака.

3.1. Сущность метода

Метод основан на способности борной кислоты образовывать с многоатомными спиртами или инвертированным сахаром более сильные комплексные кислоты с кольцевой структурой, которые определяются титрованием.

3.2. Аппаратура, реактивы, материалы

Весы лабораторные общего назначения по ГОСТ 24104-88 с наибольшим пределом взвешивания 500 г 4-го класса точности.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Электроплитка бытовая по ГОСТ 14919-83.

Шкаф сушильный по нормативно-технической документации.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Электропечь сопротивления по нормативно-технической документации.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Баня водяная.

Чашки выпарительные по ГОСТ 9147-80.

Щипцы тигельные.

Воронки В-25-38 ЖХС по ГОСТ 25336-82.

Колбы конические Кн-1-100-34ХС по ГОСТ 25336-82.

Бюретки 1-2-50-0,1 по ГОСТ 20292-74.

Пипетки 4-2-1 или 5-2-1; 4-2-2 или 5-2-2 по ГОСТ 20292-74.

Палочки стеклянные по ГОСТ 21400-75.

Кислота серная по ГОСТ 4204-77, х.ч., растворы концентрации и c = 1,5 моль/дм3.

Спирт этиловый ректификованный технический по ГОСТ 18300-87.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Натрия гидроокись по ГОСТ 4328-77, ч.д.а., растворы концентрации c (NaOH) = 0,1 моль/дм3, c = 1,0 моль/дм3 и c = 3,0 моль/дм3.

Сахар-рафинад по ГОСТ 22-78.

Глицерин по ГОСТ 6824-76.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Маннит по ГОСТ 8321-74.

Фенолфталеин по нормативно-технической документации, спиртовой раствор массовой концентрации 10 г/дм3.

(в ред. Изменения N 1, утв. Постановлением Госстандарта СССР от 19.03.1990 N 453)

Натрий тетраборнокислый 10-водный (бура).

Бумага фильтровальная лабораторная по ГОСТ 12026-76.

Вода дистиллированная по ГОСТ 6709-72.

Допускается использование другой стеклянной посуды и лабораторного оборудования, обеспечивающих точность измерения.

3.3. Подготовка к испытанию

Приготовление инвертированного сахара

0,5 кг сахара-рафинада растворяют в 166 см3 дистиллированной воды, кипятят в луженой, стеклянной или фарфоровой посуде до получения прозрачного раствора, приливают 4,2 см3 раствора серной кислоты 1,5 моль/дм3, перемешивают 30 с, снимают с плиты, добавляют 250 см3 дистиллированной воды, содержащей 4,2 см3 раствора гидроокиси натрия c (NaOH) 3 моль/дм3 и хорошо перемешивают.

Охлажденный раствор должен быть нейтральным (по фенолфталеину), прозрачным и бесцветным. Чтобы сохранить раствор на длительное время его стерилизуют в мелкой посуде.

3.4. Проведение испытания

Из подготовленной пробы отвешивают 25 г, помещают в выпарительную чашку, добавляют 4 см3 раствора гидроокиси натрия c (NaOH) - 1,0 моль/дм3, хорошо перемешивают стеклянной палочкой, высушивают и осторожно озоляют.

Если уголь долго не сгорает, его смачивают несколькими каплями дистиллированной воды, разрыхляют стеклянной палочкой, подсушивают и озоляют.

К полученной золе приливают 5 см3 дистиллированной воды и 5 см3 раствора серной кислоты 0,5 моль/дм3, перемешивают, через 3 - 5 мин добавляют 15 см3 горячей дистиллированной воды, снова перемешивают и фильтруют через складчатый бумажный фильтр в коническую колбу вместимостью 100 - 150 см3. Чашку с золой и фильтр смывают три раза небольшим количеством горячей дистиллированной воды, собирая промывные воды в ту же колбу.

Для удаления углекислого газа фильтрат нагревают до кипения, затем охлаждают, прибавляют три капли раствора фенолфталеина и нейтрализуют раствором гидроокиси натрия c (NaOH) 1 моль/дм3 до слабо-розового окрашивания. В колбу добавляют 25 см3 нейтрального глицерина, или 1 - 2 г маннита, или 1 - 2 см3 инвертированного сахара и титруют обесцветившийся раствор раствором гидроокиси натрия c (NaOH) 0,1 моль/дм3 до появления розового окрашивания. Чтобы точнее уловить перемену окраски, рекомендуется добавить небольшое количество нейтрального водного спирта.

В колбу добавляют еще 10 см3 глицерина или 0,5 г маннита и при обесцвечивании снова титруют раствором гидроокиси натрия указанной концентрации до розового окрашивания, повторяя эту процедуру до тех пор, пока жидкость в колбе после добавления новой порции нейтрального глицерина или маннита не перестанет обесцвечиваться.

Титрование следует вести при комнатной температуре, так как устойчивость комплексной маннитоборной кислоты снижается с повышением температуры.

3.5. Обработка результатов

Массовую долю борсодержащих соединений в пересчете на натрий тетраборнокислый 10-водный (X) в процентах вычисляют по формуле

где V - объем раствора гидроокиси натрия 0,1 моль/дм3, израсходованный на титрование, см3; K - коэффициент пересчета на точный раствор 0,1 моль/дм3 гидроокиси натрия; 0,0095 - количество тетраборнокислого натрия, соответствующее 1 см3 раствора 0,1 моль/дм3 гидроокиси натрия, г; m - масса исследуемого продукта, г.

Вычисление проводят до третьего десятичного знака.

За результат испытания принимают среднее арифметическое значение двух параллельных определений, допускаемое расхождение между которыми не должно превышать 0,04.

Результат округляют до второго десятичного знака. Предел абсолютной погрешности результата при доверительной вероятности P = 0,95.